試驗11培養(yǎng)基的制備課件

1、實驗11 培養(yǎng)基的制備一、實驗?zāi)康?了解培養(yǎng)基配制原理，學(xué)習(xí)并掌握培養(yǎng)基制備方法。第1頁，共22頁。二、實驗原理1.培養(yǎng)基的概念是根據(jù)微生物滿足生長的營養(yǎng)需求，人工配制的混合營養(yǎng)基質(zhì)。 必需的養(yǎng)分 適合的環(huán)境不同類的微生物因生理類型不同而表現(xiàn)出不同的營養(yǎng)需求所以不同類的微生物一般采用不同的培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細菌專用馬鈴薯糖培養(yǎng)基真菌專用高氏一號培養(yǎng)基放線菌專用第2頁，共22頁。2.培養(yǎng)基的分類（1）按存在的物理狀態(tài)分 液體培養(yǎng)基（不含凝固劑） 半固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂含0.2-0.5%） 固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂含1.5-2.0%）。（2）按照培養(yǎng)基的用途差異分 基礎(chǔ)培養(yǎng)基： 加富培養(yǎng)基

2、： 選擇培養(yǎng)基： 鑒別培養(yǎng)基第3頁，共22頁。（3）按組成成分分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基瓊脂的特性：成分是多縮半乳糖，絕大多數(shù)微生物不能分解利用。96溶解，45凝固對微生物生長沒有毒害作用培養(yǎng)基的作用：微生物分離、培養(yǎng)、增殖、保藏及鑒定。第4頁，共22頁。3.培養(yǎng)基配制原則選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適控制pH條件控制氧化還原電位原料來源的選擇根據(jù)培養(yǎng)目的不同調(diào)配滅菌處理第5頁，共22頁。4.配制培養(yǎng)基的步驟原料稱量、溶解 pH 分裝 塞棉塞 包扎 滅菌第6頁，共22頁。四、作業(yè)2人1組配制阿須貝培養(yǎng)基2000ml（全班），每組用250ml三角瓶裝120ml左右；裝9ml蒸餾

3、水3支 第7頁，共22頁。實驗12 滅菌和消毒 一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)微生物實驗的一些準備方法（滅菌培養(yǎng)皿的準備、滅菌吸管的準備、無菌水的準備、培養(yǎng)基平板和斜面的準備等），為后續(xù)實驗做準備。了解消毒與滅菌應(yīng)用范圍及基本原理，學(xué)習(xí)并掌握實驗室常用消毒與滅菌的方法第8頁，共22頁。二、實驗原理 滅菌是應(yīng)用理化方法殺滅物體上所有微生物 消毒是應(yīng)用理化方法殺滅物體上部分微生物（主要是病原微生物）。三、滅菌的常用方法 物理法：高溫滅菌、紫外線滅菌、過濾除菌 化學(xué)法：化學(xué)藥劑殺菌第9頁，共22頁。高溫滅菌干熱滅菌(dry heat sterilization)1.火焰滅菌：酒精燈、接種環(huán)2.干燥熱空氣箱滅菌：干

4、燥熱空氣箱160-170,2小時（利用熱空氣滅菌) 適用范圍：金屬器皿、玻璃器皿第10頁，共22頁。濕熱滅菌(moist heat sterilization) 利用飽和熱蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋采用高壓蒸汽滅菌法是濕熱滅菌的一種。利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升以達到高溫滅菌目的的方法a 方法：一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。b 適用：耐高溫物品如培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿。c 注意事項：滅菌開始排凈冷空氣；滅菌終了，自然緩慢降壓回零；滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。第11頁，共22頁。四、高壓蒸汽滅菌操作步驟(1)滅菌前的準備：將高壓蒸汽滅菌鍋的內(nèi)桶取出，向外鍋內(nèi)加入

5、適量的水，將內(nèi)桶放入。(2)裝放待滅菌物品：將已包扎好的物品放入內(nèi)桶。蓋上鍋蓋，以兩兩對稱方式同時旋緊螺栓，勿使漏氣。(3)加熱排氣：接通熱源，同時打開排氣閥，待見有大量水汽排出時，維持3-5min，鍋內(nèi)空氣排盡，關(guān)上排氣閥。(4)升溫保壓：壓力為1.05kg/cm2,121.3,20-30min(5)出鍋；隔斷熱源，自然降溫，待壓力表指針回到零，打開排氣閥，稍等一些時間，再開蓋取物。第12頁，共22頁。實驗13 微生物的純系分離 1 了解土壤微生物的分離純化及測數(shù)的基本原理。2 學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化技術(shù)方法。3 學(xué)習(xí)并掌握微生物平板菌落計數(shù)的技術(shù)方法。第13頁，共22頁。二基本原理 土壤

6、是微生物生活的大本營，其中含有大量不同類型的微生物，可按照一定的方法將各類微生物通過分離進行純培養(yǎng)，并能對特定類群進行數(shù)量測定?；驹硎峭ㄟ^稀釋使菌體細胞充分分散，單細胞得以生長發(fā)育形成菌落，可使用稀釋法或平板劃線法進一步純化，還可通過平板菌落計數(shù)，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。第14頁，共22頁。第15頁，共22頁。三、實驗步驟土壤樣品采集 在待測田塊上，若田塊面積小于50平方米則按對角線三點采樣，若田塊面積大于50平方米按對角線五點采樣。采樣一般定點于耕作層0-20cm，先除去表土1-2cm，以無菌鏟采土足量充分混勻后用無菌塑料袋分裝。第16頁，共22頁。好氣性細菌的分離純化及測數(shù)1.制備土樣稀釋液2培養(yǎng)基的準備3傾注法接種4保溫培養(yǎng)5分區(qū)劃線法純化6計數(shù)第17頁，共22頁。1 制備土樣稀釋液吹吸三次混勻，無菌操作第18頁，共22頁。2 培養(yǎng)基的準備 融化阿須貝培養(yǎng)基，融化后保溫在48。并取3個無菌培養(yǎng)皿，分別在皿底貼好標簽，注明10-2、10-3、 10-4 。3 傾注法接種 先按10-4 、10-3 、 10-2 的順序?qū)⒉煌♂尪染鷳乙航尤雽?yīng)平皿中（每個平皿接入1ml），再向每個平皿傾注約15 ml的阿須貝培養(yǎng)基（50）待冷凝，混合均勻。4 保溫培養(yǎng) 將已經(jīng)接種的平皿靜置10min后，放入溫箱倒置培養(yǎng)7日（30），觀察結(jié)果。 第