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文檔簡介
1、實驗四 血清蛋白的醋 酸纖維薄膜電泳1一 實驗原理電泳的基本原理: 任何一種物質(zhì)的質(zhì)點,由于其本身在溶液中的解離或由于其表面對其他帶電質(zhì)點的吸附,會在電場中向一定的電極移動。 一般來說,在堿性溶液中(即溶液的PH值大于等電點pI),分子帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動;而在酸性溶液中剛好相反。移動的速度取決于帶電的多少和分子的大小。2 醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。 醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成,它具有均一的泡沫樣的結(jié)構(gòu),有強滲透性,對分子移動無阻力,作為區(qū)帶電泳的支持物進行蛋白電泳有簡便、快速、樣品用量少,應(yīng)用范圍廣,分離清晰,沒有吸附現(xiàn)象等優(yōu)點。3二 實驗步驟1. 浸
2、泡 用鑷子取醋酸纖維薄膜1張分別光澤面和粗糙面然后在粗糙面離邊緣2cm處用鉛筆輕輕的畫一條與邊緣平行的直線(為了點樣方便)然后將薄膜放在巴比妥緩沖液中浸泡20min用鑷子取出纖維薄膜y用濾紙吸干平置于載玻片上(粗糙面朝上)42 點樣: 取出2塊載玻片分別滴一滴血清蛋白A和血清蛋白B然后用蓋玻片的平邊取樣(注意均勻)然后輕輕的在纖維薄膜的鉛筆橫線上點樣(注意要輕)3 電泳: 在電泳槽中搭建好濾紙橋倒入緩沖液(注意兩邊液面高度一致)將纖維薄膜架于橋上(點樣端靠近負(fù)極,點樣面朝下)接好導(dǎo)線調(diào)節(jié)電泳儀參數(shù)電泳30min54. 染色 取出纖維薄膜放于培養(yǎng)皿染色液中染色10min.5. 漂洗 取出纖維薄膜放在
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