ATCC菌種保藏與使用課件

1、ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌種復(fù)蘇與使用指南第1頁(yè)，共49頁(yè)?！癒WIK-STIK Microorganisms”產(chǎn)品的使用說(shuō)明防范與限制 Precaution and Limitation這類產(chǎn)品僅適用于體外實(shí)驗(yàn)。 這些設(shè)備以及后來(lái)在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出的微生物屬生物危害材料這些設(shè)備含具有活性的微生物，在一定的環(huán)境下可能致病。需使用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)避免任何微生物的暴露和接觸。 Company Logo第2頁(yè)，共49頁(yè)。微生物實(shí)驗(yàn)室需有相關(guān)實(shí)驗(yàn)裝備，且有可接收、處理、儲(chǔ)存、丟棄生物危害材料的設(shè)備。 使用這類設(shè)備的微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員必須在生物危害材料的操作過(guò)程，維護(hù)，儲(chǔ)存，丟棄等方面接受過(guò)培訓(xùn)，具備一定經(jīng)驗(yàn)，能熟練示范

2、。 相關(guān)機(jī)構(gòu)和法規(guī)對(duì)生物危害材料的處理作了規(guī)定。各實(shí)驗(yàn)室需了解并遵守該生物危害 材料處理規(guī)定。Company Logo第3頁(yè)，共49頁(yè)。儲(chǔ)存與有效期 Storage and expiration在原裝密封瓶或含干燥劑的袋中的KWIK-STIKTM應(yīng)存放在28。凍干的微生物制劑在有效期內(nèi)將保持其規(guī)格和性能，有效期在設(shè)備標(biāo)簽上標(biāo)明。若出現(xiàn)以下情況則不能使用：儲(chǔ)存不正確;有過(guò)度暴露在濕熱環(huán)境中的跡象;己過(guò)有效期。Company Logo第4頁(yè)，共49頁(yè)。Microorganisms公司產(chǎn)品Company Logo第5頁(yè)，共49頁(yè)。Kwik-Stik 操作流程Company Logo第6頁(yè)，共49頁(yè)。

3、注:請(qǐng)嚴(yán)格按照操作流程”、“推薦生長(zhǎng)條件”和“推推薦培養(yǎng)方法”活化標(biāo)準(zhǔn)菌株，不建議使用實(shí)驗(yàn)室自己的方法及文獻(xiàn)方法活化標(biāo)準(zhǔn)菌株，否則菌種供應(yīng)商不保證菌株的質(zhì)量且不提供相應(yīng)的售后服務(wù)。Company Logo第7頁(yè)，共49頁(yè)。LYFO DISK 操作流程Company Logo第8頁(yè)，共49頁(yè)。Kwik-Stik & Lyfo Disk 推薦生長(zhǎng)條件如何選擇最適合的菌種生長(zhǎng)條件1.最初的生長(zhǎng)最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上。除非特殊情況或特別推薦，最初的生長(zhǎng)一般不考慮液體培養(yǎng)基。這是由于在液體培養(yǎng)基中獲得凍干菌株的純種比較困難，污染所帶來(lái)的雜菌可能會(huì)過(guò)度生長(zhǎng)，影響得到目標(biāo)菌株的純種。2、以下列出可供選

4、擇的瓊脂培養(yǎng)基和相應(yīng)的生長(zhǎng)條件，供各實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)菌種時(shí)參考。Company Logo第9頁(yè)，共49頁(yè)。方法1胰蛋白胨大豆瓊脂，非選擇性羊血瓊脂，標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)平板，或營(yíng)養(yǎng)瓊脂35,正常環(huán)境，24-48小時(shí)。方法2非選擇性羊血瓊脂35，正常環(huán)境，2448小時(shí)。在培養(yǎng)鏈球菌屬和隱秘桿菌屬時(shí)，CO2環(huán)境可提高其生長(zhǎng)。推薦使用5%CO2環(huán)境來(lái)培養(yǎng)肺炎鏈球菌和其他甲型溶血性鏈球菌。方法3巧克力瓊脂35，5%10%的CO2環(huán)境，24-48小時(shí)。Company Logo第10頁(yè)，共49頁(yè)。方法4厭氧血瓊脂35，厭氧環(huán)境，48-72小時(shí)；部分專性厭氧菌可能需要57天，才能充分生長(zhǎng)；對(duì)于梭菌，以下新鮮配制的平板也可選用

5、：營(yíng)養(yǎng)瓊脂，胰蛋白胨大豆瓊脂和標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂(標(biāo)準(zhǔn)方法瓊脂)；只是需額外培養(yǎng)24小時(shí)。方法5沙保氏葡萄糖 Emmons瓊脂25，正常 環(huán) 境 ，27天； 非選擇性羊血瓊脂也可選用 ； 以下培養(yǎng)基也可選用：營(yíng)養(yǎng)瓊脂，胰蛋白胨大豆瓊脂， 馬鈴薯 葡萄糖瓊脂和標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂 ，只是需額外培養(yǎng)24小時(shí)。Company Logo第11頁(yè)，共49頁(yè)。方法6巧克力瓊脂35，微需氧環(huán)境，48-72小時(shí)。方法7Lowenstein Jensen瓊脂或Middlebrook瓊脂35，5%10%CO2環(huán)境或正常環(huán)境，7天。M. fortuitum subsp. fortuitum, M. peregrium 和

6、M. smcgmatis也可以選用胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)和Lowenstein Jensen瓊脂或Middlebrook瓊脂一樣，只是需額外培養(yǎng)一些時(shí)間。Company Logo第12頁(yè)，共49頁(yè)。方法8緩沖活性炭酵母提取物瓊脂35，正常環(huán)境，3-5天。方法9V瓊脂或巧克力瓊脂35，5%10%，CO2環(huán)境，48小時(shí)。Company Logo第13頁(yè)，共49頁(yè)。方法10菌種水解可選用無(wú)菌腦心浸出液肉湯，胰蛋白胨大豆肉湯，或0.85%生理鹽水。無(wú)菌水水解可能會(huì)導(dǎo)致活力下降或不復(fù)蘇。在KWIK-STIK包裝中自帶的培養(yǎng)基使得菌種很好的復(fù)蘇。在胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)上生長(zhǎng)35，正常環(huán)境，24-

7、48小時(shí)。Vibro SP.也可在Marine瓊脂上生長(zhǎng)Company Logo第14頁(yè)，共49頁(yè)。方法11先接種于MRS肉湯中35，正常環(huán)境，48小時(shí);然后接入含羊血的哥倫比亞CNA培養(yǎng)基中35，5-10%CO2環(huán)境，48小時(shí)。方法12馬鈴薯葡萄糖瓊脂55,正常環(huán)境，48小時(shí)。Company Logo第15頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第16頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第17頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第18頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第19頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第20頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第21頁(yè)，共49頁(yè)。各類菌種推薦

8、培養(yǎng)方法Company Logo第22頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第23頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第24頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第25頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第26頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第27頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第28頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第29頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第30頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第31頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第32頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第33頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第34頁(yè)，共49頁(yè)。Company Lo

9、go第35頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第36頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第37頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第38頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第39頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第40頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第41頁(yè)，共49頁(yè)。加拿大PROLAB microbank 菌種保藏管 簡(jiǎn)介與說(shuō)明：微生物的長(zhǎng)期保存是一個(gè)挑戰(zhàn)，生物需要低溫貯存并盡量提供最少干擾的可能性。然而，Microbank提供了一種保存液來(lái)應(yīng)對(duì)對(duì)這個(gè)問(wèn)題。用途：標(biāo)記顏色的25 個(gè)小珠被包裝容納在包含保存劑的保存管里，小珠被沖洗和吸附細(xì)菌在上面，之后保存管在貯存期內(nèi)保持在-

10、70C，當(dāng)需要培養(yǎng)，單個(gè)小珠很簡(jiǎn)單的移出保存管，并直接劃線在微生物培養(yǎng)基上。Company Logo第42頁(yè)，共49頁(yè)。操作步驟A準(zhǔn)備1使用一個(gè)準(zhǔn)備的標(biāo)簽，管上條碼，每管接種一個(gè)生物。（也可以看步驟6）。2在無(wú)菌的條件下打開小管的蓋。3將純培養(yǎng)的小菌落（18-24h 培養(yǎng)）挑取3-4 個(gè)麥?zhǔn)瞎芫彌_液接種到液體保存劑中。4蓋好瓶蓋并顛倒4-5 次以吸附微生物，不要旋渦。5、此時(shí)微生物將被吸附到小珠，這緩沖液需倒掉使接種小珠盡可能無(wú)液體，蓋上瓶蓋。6、在瓶上提供的培養(yǎng)條碼做下記錄或其它的記錄。7、貯存接種的凍存管在-70為了最好長(zhǎng)期效果。Company Logo第43頁(yè)，共49頁(yè)。B.復(fù)蘇1、在無(wú)

11、菌的條件下，打開瓶蓋并使用滅菌的接種棒或鑷子移出一個(gè)小珠，蓋好瓶蓋并盡快放回低溫保存。過(guò)度改變溫度會(huì)減少生物生存能力。2、小珠能被直接使用接種在固體培養(yǎng)基或可滴入在合適的液體培養(yǎng)基。3、當(dāng)作推存使用，每個(gè)保存管大概保存25 次相同可能培養(yǎng)數(shù)。Company Logo第44頁(yè)，共49頁(yè)。Company Logo第45頁(yè)，共49頁(yè)。局限性1、Microbank為生物長(zhǎng)期保存可能完全提供一種方法。2、在使用中，無(wú)菌技術(shù)必須熟練以繼續(xù)保證微生物的完整3、Microbank在接種之前以下條件不能被使用：a.管顯示任何泄漏的跡象（凍存管破損）。b.凍存管存在污染。c.已經(jīng)超出標(biāo)記的有效期。4、無(wú)論如何小珠移出后不能放回凍存管。5、Microbank提供了不同的顏色，這些顏色提供顏色識(shí)別便利并沒(méi)有意味產(chǎn)品功能的任何改變。Company Logo第46頁(yè)，共49頁(yè)。安全預(yù)防1當(dāng)操控危害的培養(yǎng)物需使用一個(gè)生物安全柜。2當(dāng)拋棄使用或部分使用凍存管注意生物危害預(yù)防。3當(dāng)保存Microbank在液氮里。以下需注意：a.保證保存管蓋正常旋緊：過(guò)于繃緊可扭曲帽里面硅樹脂橡膠密封件引起泄漏。b.保證保存管在蓋之前螺紋與蓋是完全干燥的：液滴在液氮將損害封口。c.所有Microbank 保存管需經(jīng)常保存在氣相，在液氮上面。如浸入，當(dāng)回到室溫時(shí)他們可以發(fā)展裂縫或破碎。d.