CTC在腫瘤診療中的應(yīng)用課件

1、循環(huán)腫瘤細胞(CTC)在液體活檢中的特殊意義Circulating Tumor Cells韓世強第1頁，共33頁。Cancer Res. 2003;63: 3805-11. Breast Cancer Res. 2009;11:R46. Am J Pathol. 2011;178:989-96.循環(huán)腫瘤細胞（CTC）1869年 Aust Med J，Ashworth最早 在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到；存在于外周循環(huán)的各類腫瘤細胞統(tǒng)稱；來自原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶或不明部位。大多數(shù)CTC在外周血循環(huán)中會發(fā)生凋亡，只有少數(shù)CTC才能夠形成轉(zhuǎn)移第2頁，共33頁。 循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液

2、循環(huán)的腫瘤細胞。CTC形成、播散及轉(zhuǎn)移的模式圖原發(fā)腫瘤血管生成侵潤侵入血管內(nèi)侵入血管外(CTC)血管內(nèi)增殖(CTM)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移播散腫瘤細胞（DTC）微轉(zhuǎn)移休眠灶循環(huán)腫瘤細胞（CTC）循環(huán)腫瘤微栓（CTM）凋亡的CTC侵潤腫瘤細胞擴增血管生成上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化（MET）轉(zhuǎn)移到骨髓和其他器官第3頁，共33頁。 “液態(tài)活檢”的標記物CTCctDNA(cfDNA)主要指來自于抗凝的外周血全血，完整的腫瘤細胞主要指來自于抗凝血外周血的血漿，片段化的DNA片段一般認為來源于腫瘤原發(fā)灶/轉(zhuǎn)移灶腫瘤瘤細胞凋亡/壞死釋放的DNA片段活細胞，一般不宜長期保存提取純化后的核酸，可以保存可以用于細胞學(xué)形

3、態(tài)、結(jié)構(gòu)分析；也可以分析細胞DNA、RNA、蛋白質(zhì)等各類標志物一般用于DNA突變監(jiān)測、甲基化等DNA修飾相關(guān)分析用于病情評價、預(yù)后判斷，腫瘤早期診斷潛力不明確用于個體化治療，腫瘤早期診斷潛力相對明確還有miRNAs，Peptides， Exosomes（外泌體），Secretomes（分泌物質(zhì)組）等。第4頁，共33頁。組織活檢的局限性很多腫瘤患者無法進行手術(shù)穿刺受檢者嚴重的不合適穿刺自身的臨床風險某些腫瘤解剖位置不便進行穿刺腫瘤的異質(zhì)性阿拉伯醫(yī)生Albucasis （936-1013）及其發(fā)明的外科手術(shù)器械Folia Histochem Cytobiol. 2009年47卷2期191-7頁 第

4、5頁，共33頁。但我的一些病友只是定期做CT檢查，并不抽血，是怎么回事呢？如果您朋友的腫瘤對常見標志物都不敏感，那我就沒辦法抽血查腫瘤了，只能等腫瘤長到直徑0.5 cm以上再借助CT或MRI檢查發(fā)現(xiàn)。但等腫瘤長大到肉眼能看到時，治療效果就很差了。第6頁，共33頁。CTC“液體活檢”Breast Cancer：N Engl J Med 351:781-791,2004Prostate Cancer : Lancet Oncol 10:233-239, 2009Colorectal Cancer: J Clin Oncol 26:3213-3221, 2008第7頁，共33頁。獲取CTC需要解決的

5、技術(shù)問題從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細胞將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常上皮細胞、造血干細胞等區(qū)分開來每10mL血液中可能僅含有幾個到幾十個循環(huán)腫瘤細胞，而10mL血液中含有的白細胞約有1億個，紅細胞有500億個。第8頁，共33頁。三種技術(shù)過濾法ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells8m孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細胞敏感性低梯度密度法腫瘤細胞和單核細胞密度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多白細胞腫瘤細胞會遷移至血漿層，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對細胞有毒性免疫磁珠法腫瘤細胞表面

6、抗原CTC純度低，混入較多白細胞不能有效排除細胞碎片假陽性和假陰性高Cell Search-免疫磁珠+流式細胞分析+化學(xué)發(fā)光第9頁，共33頁。CTC檢測的臨床應(yīng)用CTC數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTM數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后CTC型別變化通過跟蹤血液中CTC的型別變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTC實時個體化治療CTC基因即時檢測，指導(dǎo)腫瘤實時個體化治療第10頁，共33頁。CTC臨床應(yīng)用一：評估預(yù)后11治療前一個周期后N Engl J Med 2004;351:781-91.第11頁，共33頁。對于原發(fā)

7、性肺癌患者，CTC計數(shù)在有遠處轉(zhuǎn)移的肺癌患者中有顯著升高，相關(guān)性優(yōu)于CEA。CTC臨床應(yīng)用二：評估復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移Clin Cancer Res 2009;15(22)第12頁，共33頁。45-male-ESCC（食管鱗狀細胞癌）12w，CT-骨和皮下轉(zhuǎn)移104w，PET-CT顯示復(fù)發(fā)CTC可動態(tài)監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風險，及早發(fā)出腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)警，結(jié)合血清標志物，能更準確預(yù)測疾病進展。World J Gastroenterol.2015,21(25):7921-8.CTC臨床應(yīng)用二：動態(tài)監(jiān)測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移第13頁，共33頁。CTC檢測的臨床應(yīng)用CTC數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后

8、和治療效果CTM數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTM的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后CTC型別變化通過跟蹤血液中CTC的型別變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTC實時個體化治療CTC基因即時檢測，指導(dǎo)腫瘤實時個體化治療第14頁，共33頁。循環(huán)腫瘤微栓子(CTM)Hui L et al., PLos one, 2013. 循環(huán)腫瘤微栓子又稱循環(huán)腫瘤細胞團，一般由3個及以上腫瘤細胞組成。第15頁，共33頁。CTM成瘤能力強于單個CTCCell. 2014, 158: 11101122.CTM的成瘤、轉(zhuǎn)移能力是單個CTC的23-50倍第16頁，共33頁。CTM與預(yù)后評估J Clin Oncol. 2

9、012;30: 525-32.第17頁，共33頁。CTC升高對于判斷遠處轉(zhuǎn)移的敏感性達71%，特異性達83%CTC計數(shù)和血清CEA水平在不同切點的診斷價值第18頁，共33頁。CTC檢測的臨床應(yīng)用CTC數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTM數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后CTC型別變化通過跟蹤血液中CTC的型別變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTC實時個體化治療CTC基因即時檢測，指導(dǎo)腫瘤實時個體化治療第19頁，共33頁。第20頁，共33頁。CTC分型更精確地評估療效 Yu M et al., Science , 201

10、3, 339: 580-584.第21頁，共33頁。CTC表型轉(zhuǎn)換與病情進展相關(guān) Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.第22頁，共33頁。CTCs檢測的臨床應(yīng)用CTC數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTM數(shù)量變化通過跟蹤血液中CTC的數(shù)量變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后CTC型別變化通過跟蹤血液中CTC的型別變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估預(yù)后和治療效果CTC實時個體化治療CTC基因即時檢測，指導(dǎo)腫瘤實時個體化治療第23頁，共33頁。CTC指導(dǎo)實時個體化治療第24頁，共33頁。CTCs用于檢測EGFR突變N Engl

11、J Med 2008;359:366-77.sensitivity:96%, specificity:100%第25頁，共33頁。CTC用于檢測肺癌ALK重排J Clin Oncol 2013;31:2273-81.第26頁，共33頁。CTC用于檢測乳腺癌HER2擴增吻合率: 97%特異性:100%PNAS. 2004;101:9393-8.第27頁，共33頁。 9位患者，原發(fā)灶為HER2擴增陰性，疾病進展之后檢測CTC發(fā)現(xiàn)HER2擴增陽性，對其中4位采取含赫賽汀治療方案，3位患者疾病緩解。CTC檢測追蹤乳腺癌患者HER2擴增狀態(tài)PNAS. 2004;101:9393-8.第28頁，共33頁。

12、CTC的臨床應(yīng)用方向CTC檢測6、指導(dǎo)用藥3、術(shù)后監(jiān)控1、預(yù)后評估2、療效監(jiān)測5、早期篩查4、輔助診斷第29頁，共33頁。小 結(jié)個體化治療時代腫瘤實時監(jiān)測的實現(xiàn) 需要突破性技術(shù)對CTC進行分離、分型和分析，將腫瘤狀態(tài)實時監(jiān)測和腫瘤個體化治療有機結(jié)合。對腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、療效評估的預(yù)測影響 CTC的作為腫瘤轉(zhuǎn)移的種子，有望綜合反映腫瘤的實時動態(tài)，通過跟蹤血液中CTC數(shù)量和型別的變化，監(jiān)測腫瘤動態(tài)、評估治療效果。對實時個體化治療的影響 CTC的分子分析，有望綜合反映腫瘤分子病理學(xué)背景，實時提供腫瘤分子信息，推進腫瘤實時的個體化治療。第30頁，共33頁。第31頁，共33頁。第32頁，共33頁。愛是什么

13、？一個精靈坐在碧綠的枝葉間沉思。風兒若有若無。一只鳥兒飛過來，停在枝上，望著遠處將要成熟的稻田。精靈取出一束黃澄澄的稻谷問道：“你愛這稻谷嗎？”“愛?！薄盀槭裁?？”“它驅(qū)趕我的饑餓?！兵B兒啄完稻谷，輕輕梳理著光潤的羽毛?！艾F(xiàn)在你愛這稻谷嗎？”精靈又取出一束黃澄澄的稻谷。鳥兒抬頭望著遠處的一灣泉水回答：“現(xiàn)在我愛那一灣泉水，我有點渴了?！本`摘下一片樹葉，里面盛了一汪泉水。鳥兒喝完泉水，準備振翅飛去?！罢堅倩卮鹞乙粋€問題，”精靈伸出指尖，鳥兒停在上面?！澳阋プ鍪裁锤匾氖聠?？我這里又稻谷也有泉水。”“我要去那片開著風信子的山谷，去看那朵風信子?！薄盀槭裁矗克茯?qū)趕你的饑餓？”“不能?！薄八茏虧櫮愕母煽?？”“不能?！睈凼鞘裁矗恳粋€精靈坐在碧綠的枝葉間沉思。風兒若有若無。一只鳥兒飛過來，停在枝上，望著遠處將要成熟的稻田。精靈取出一束黃澄澄的稻谷問道：“你愛這稻谷嗎？”“愛?！薄盀槭裁矗俊薄八?qū)趕我的饑餓。”鳥兒啄完稻谷，輕輕梳理著光潤的羽毛?！?/p>