DB15∕T 2544-2022 大球蓋菇菌種制作技術(shù)規(guī)程

1、ICS65.020.01CCSB0515內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T 25442022大球蓋菇菌種制作技術(shù)規(guī)程Regulation of strain manufacture for stropharia rugosoannulata2022-04-25 發(fā)布2022-05-25 實(shí)施內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā) 布IDB15/T 25442022前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)果蔬標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC 25）歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：王海燕、孫國(guó)琴、李

2、亞嬌、龐杰、于傳宗、王永、韓鳳英、扈順、薛國(guó)萍、慕宗杰、付崇毅、康立茹。 PAGE 5 PAGE 4DB15/T 25442022大球蓋菇菌種制作技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了大球蓋菇菌種生產(chǎn)要求、母種生產(chǎn)、原種和栽培種生產(chǎn)、檢驗(yàn)、入庫(kù)等技術(shù)流程要點(diǎn)。本文件適用于大球蓋菇母種、原種、栽培種菌種制作要求。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 4806.7食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸用塑料材料及制品NY/T 528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/

3、T 1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。菌種 spawn通過(guò)生產(chǎn)試驗(yàn)驗(yàn)證具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，豐產(chǎn)性好、抗性強(qiáng)的大球蓋菇菌株或品種，培養(yǎng)生長(zhǎng)在適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。母種 stock culture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管或培養(yǎng)皿為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱(chēng)為一級(jí)種、試管種。原種 pre-culture spawn由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以菌種瓶（玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶）或（1217）cm（2228）cm（0.040.05）mm聚丙烯塑料袋為容器。也稱(chēng)為二級(jí)種

4、。栽培種 spawnDB15/T 25442022由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以菌種瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（1517）cm（3335）cm（0.040.05） mm聚丙烯塑料袋為容器。栽培種只能用于擴(kuò)大到栽培出菇袋或直接出菇，不可以再次擴(kuò)大繁殖菌種。也稱(chēng)為三級(jí)種。菌種生產(chǎn)要求人員生產(chǎn)所需要的技術(shù)人員和檢驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)、掌握基礎(chǔ)知識(shí)及菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程要求的相應(yīng)專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員。場(chǎng)地、廠房菌種生產(chǎn)應(yīng)選擇地勢(shì)高，通風(fēng)良好，空氣清新，水源近，排水通暢，交通便利的場(chǎng)所。場(chǎng)地環(huán)境條件符合NY/T 528規(guī)定。菌種生產(chǎn)廠房要求有各自隔離的攤曬場(chǎng)、原材料庫(kù)、配料分裝庫(kù)。配套有配料室、攪拌室、

5、裝袋（瓶） 室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室（通風(fēng)好，有紗窗）、菌種檢測(cè)室及菌種冷藏庫(kù)等各環(huán)節(jié)的設(shè)施。冷卻室、接種室，培養(yǎng)室都要有離子凈化設(shè)施。菌種生產(chǎn)廠房條件應(yīng)符合NY/T 1731規(guī)定。生產(chǎn)設(shè)備菌種生產(chǎn)需要粉碎機(jī)、電子秤、攪拌機(jī)、裝袋（瓶）機(jī)、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、離子凈化器、超凈工作臺(tái)或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、液體菌種灌（30 L250 L）、顯微鏡等設(shè)備。菌種生產(chǎn)設(shè)備應(yīng)符合NY/T 1731規(guī)定。母種生產(chǎn) 培養(yǎng)基馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨1.5 g、瓊脂18 g、加水至1000 mL。 容器試管規(guī)格18 mm180 mm或者20 mm200 mm；培養(yǎng)皿直徑

6、7 cm9 cm；三角瓶規(guī)格300 mL500 mL。 分裝和滅菌斜面培養(yǎng)基分裝和滅菌分裝培養(yǎng)基至試管1/4處，用棉塞或硅膠塞封閉試管口，每5支試管為1把，牛皮紙包棉塞，橡皮筋扎緊，棉塞向上放置。棉塞應(yīng)采用梳棉，不能使用脫脂棉。在121 122 （0.11 MPa0.12 MPa） 下滅菌25 min。滅菌后溫度降到（655）時(shí)，在空氣清潔的室內(nèi)擺斜面，要求斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管長(zhǎng)度的2/3。從擺好的試管中抽取3 %5 %的試管，在28 下培養(yǎng)48 h，無(wú)微生物長(zhǎng)出為滅菌合格。平板培養(yǎng)基分裝和滅菌DB15/T 25442022培養(yǎng)基裝入300 mL500 mL三角瓶至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口

7、膜封口后放入滅菌鍋；玻璃培養(yǎng)皿用報(bào)紙包好，放入滅菌鍋。在溫度升至102 105 排凈冷空氣后升壓，升至121 122 （0.11 MPa0.12 MPa）恒溫滅菌25 min。滅菌后溫度降到（655）時(shí)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將三角瓶中的培養(yǎng)基分裝至無(wú)菌培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基占培養(yǎng)皿高度的1/31/2。 接種超凈工作臺(tái)或接種箱紫外燈照射30 min后吹風(fēng)，之后用75 %酒精進(jìn)行表面消毒。接菌過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，接種后及時(shí)貼好標(biāo)簽并做好記錄。將3 mm5 mm菌塊接種在培養(yǎng)皿或試管培養(yǎng)基的中部，培養(yǎng)皿需用石臘封口膜密封。菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基表面即可使用。培養(yǎng)在通風(fēng)避光、18 28 下培養(yǎng)。接種后每隔2 d3 d檢

8、驗(yàn)一次，挑出菌種未活、污染和生長(zhǎng)不良的不合格培養(yǎng)物。原種、栽培種生產(chǎn) 培養(yǎng)基谷?；螓溋?0 %，檸條粉、麥麩、棉籽殼、玉米芯粉或豆秸粉9 %，石膏1 %。水分含量60 %65 %， pH值調(diào)至67。 容器原種采用850 ml以下、瓶口直徑小于等于4 cm、耐126 高溫的菌種瓶，也可以采用（1217）cm（2228）cm（0.040.05）mm的聚丙烯塑料袋。栽培種采用同原種要求相同的瓶子，也可采用（1517）cm（3335）cm（0.040.05）mm 的聚丙烯塑料袋。以上聚丙烯塑料袋均要求符合GB 4806.7規(guī)定。 裝袋（瓶）采用裝袋（瓶）機(jī)或人工進(jìn)行裝袋（瓶），人工裝袋（瓶）需用打孔器

9、在袋口處打孔，孔直徑1 cm1.5 cm、深度為8 cm12 cm，每袋（瓶）裝培養(yǎng)基質(zhì)500 g600 g，塑料袋用無(wú)棉蓋體套環(huán)或窩口海綿塞封口，培養(yǎng)基質(zhì)裝袋（瓶）后4 h內(nèi)進(jìn)行滅菌。 滅菌可采用高壓滅菌和常壓滅菌。高壓滅菌：組合培養(yǎng)料在121 122 （0.11MPa0.12 MPa）下滅菌2 h；糧食培養(yǎng)基在121 122 （0.11 MPa0.12 MPa）下滅菌2.5 h。常壓滅菌：在3 h之內(nèi)使溫度升至100 ，恒溫保持10 h12 h。 接種DB15/T 25442022原種、栽培種在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)接種，接種前打開(kāi)紫外燈照射30 min后吹風(fēng)，接種時(shí)用75 % 酒精對(duì)超凈工

10、作臺(tái)或接種箱進(jìn)行表面擦拭消毒。每個(gè)原種接入2 cm3 cm大小母種12塊；每個(gè)栽培種接入原種量不應(yīng)少于15 g。菌種都應(yīng)從容器口處接種，不應(yīng)打孔多點(diǎn)接種。每批接種應(yīng)為單一品種，如中途換品種時(shí)采用75 %酒精對(duì)超凈工作臺(tái)或接種箱及接種工具進(jìn)行表面擦拭消毒。 培養(yǎng)通風(fēng)避光、21 28 下培養(yǎng)。 貯存原種和栽培種在0 4 下貯存，貯存期不超過(guò)50 d。檢驗(yàn)、入庫(kù)檢驗(yàn)?zāi)阜N感官要求母種感官要求見(jiàn)表1。表1大球蓋菇母種感官要求項(xiàng)目要求容器完整、無(wú)損、潔凈棉塞或無(wú)棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和過(guò)濾要求培養(yǎng)基灌入量為試管總?cè)莘e的1/4，培養(yǎng)皿高的的1/31/2菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿斜面或平板菌絲體特

11、征菌絲潔白、絨毛狀、生長(zhǎng)致密、均勻、健壯菌絲體表面均勻、舒展、平整菌絲體分泌物無(wú)菌落邊緣整齊雜菌菌落無(wú)斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，無(wú)積水、顏色均勻、無(wú)暗斑、無(wú)色素原種感官要求原種感官要求見(jiàn)表2。DB15/T 25442022表2大球蓋菇原種感官要求項(xiàng)目要求容器完整、無(wú)損、潔凈棉塞或無(wú)棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離（505）mm菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿容器菌絲體特征菌絲體白、生長(zhǎng)旺健、整齊培養(yǎng)物表面菌絲體生長(zhǎng)均勻、無(wú)高溫抑制線培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無(wú)干縮菌絲分泌物無(wú)、允許少量無(wú)色至棕黃色水珠雜菌菌落無(wú)子實(shí)體原基無(wú)栽培種感官要求栽培種感官要求見(jiàn)表3。表3大球蓋菇栽培種感官要求項(xiàng)目要求容器完整、無(wú)破損棉塞或無(wú)棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、