病毒感染檢查方法和防治原則1

1、關(guān)于病毒感染的檢查方法與防治原則1第一張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 病毒感染的檢查方法檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體 病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶 電鏡直接觀察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng)第二張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，還特別注意以下原則：采集急性期標(biāo)本使用抗生素：標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 冷藏保存、快速送檢采集雙份血清第三張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）雞胚接種（egg inoculation）動物接種（anim

2、al inoculation）第四張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性 病毒鑒定 盲傳23代指標(biāo)陰性病毒陰性第五張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1. 細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)生長方式分類： 單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture）從細(xì)胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)分類： 原代細(xì)胞（primary cell） 二倍體細(xì)胞（diploid cell） 傳代細(xì)胞系（continuous cell line）（一）病毒的分離培養(yǎng)第六張，P

3、PT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞第七張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1.細(xì)胞培養(yǎng)（1）原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織 組織塊 分散的單個細(xì)胞 單層細(xì)胞 剪碎 培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶 特點(diǎn)：對多種病毒敏感 生長能力有限, 獲取成本高 可攜帶潛伏病毒第八張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（2）二倍體細(xì)胞培養(yǎng) 體外分裂50100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點(diǎn)：對多種病毒敏感 不帶異種蛋白(人源性) 不帶病毒，無致瘤潛能 可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)第九張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）

4、傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：對多種病毒敏感性高 繁殖能力高，傳代時間長 有致癌危險(xiǎn)，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)第十張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指征：致細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE ）紅細(xì)胞吸附（hemadsorption） 病毒干擾作用（viral interference）細(xì)胞代謝改變（一）病毒的分離培養(yǎng)第十一張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落（1）致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）第十三張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病

5、毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（1）致細(xì)胞病變效應(yīng)（ CPE）第十四張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月形成包涵體(inclusion body)（1）致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）第十五張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月腮腺炎病毒感染細(xì)胞（2）紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)紅細(xì)胞表面HA受體第十六張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒猴腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()埃可病毒猴腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()猴腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒?？刹《景？刹《颈灰种?，CPE()（4）細(xì)胞代謝改變第十七張，PPT共三十

6、五頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分離 卵黃囊（yolk sac） 嗜神經(jīng)病毒 第十八張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜第二十張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月3.動物接種應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞

7、的病毒培養(yǎng)動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒第二十二張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）病毒的鑒定1.形態(tài)學(xué)鑒定：電子顯微鏡2.血清學(xué)鑒定：鑒定病毒種、型、亞型，免疫標(biāo)記法、血凝抑制試驗(yàn)等。血凝抑制試驗(yàn) 正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細(xì)胞凝集（血凝試驗(yàn)） 病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞不凝集 （血凝抑制試驗(yàn)）第二十三張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）病毒的鑒定3.分子生物學(xué)鑒定：抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測序第二十四張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1.血凝試驗(yàn)：病毒

8、總量（活病毒死病毒）2.50%組織細(xì)胞感染量（50 tissue culture infectious dose, TCID50）測定3.空斑形成試驗(yàn)（plaque formation test）：空斑形成單位（ plaque formation unit，PFU） （三）病毒數(shù)量與感染性測定感染性病毒量第二十五張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、病毒感染的診斷（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查 普通光學(xué)顯微鏡檢查：包涵體第二十六張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、病毒感染的診斷（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測：免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測：核酸擴(kuò)增技術(shù)、 核酸雜交技

9、術(shù) 、基因芯片技術(shù)、基因測序第二十七張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三、病毒感染的診斷（三）病毒感染的血清學(xué)診斷中和試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)特異性IgM抗體檢測其他：早期抗原的抗體檢測第二十八張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防生物制品：微生物及其代謝產(chǎn)物、 動物免疫血清、 免疫細(xì)胞、 細(xì)胞因子。防治和診斷感染性疾病。第二十九張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防一、人工主動免疫常用生物制品滅活疫苗（inactivated vaccine）減毒活疫苗（attenuated vaccine）重組載體疫苗（recombinant

10、carrier vaccine）亞單位疫苗（subunit vaccine）基因工程疫苗（genetically engineering vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）第三十張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 病毒感染的特異性預(yù)防二、人工被動免疫常用生物制品免疫球蛋白：血清丙種球蛋白細(xì)胞免疫制劑： IFN-、 細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 第三十一張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 病毒感染的治療（一）抗病毒化學(xué)制劑核苷類藥物：阿昔洛韋、阿糖腺苷、齊多夫定（AZT）非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑：奈韋拉平、吡啶酮蛋白酶抑制劑：沙奎那韋其他抗病毒藥物：金剛烷胺（二）干擾素和干擾素誘生劑（三）中草藥防治病毒感染（四）新抗生素類（五）治療性疫苗（六）治療性抗體：帕利珠（七）基因治療劑：反義寡核苷酸、干擾RNA、核酶第三十二張，PPT共三十五頁，創(chuàng)作于2022年6月思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有何應(yīng)用？病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？病毒性