實(shí)驗(yàn)三巴斯德效應(yīng)

1、實(shí)驗(yàn)三 巴斯德效應(yīng)一、目的要求學(xué)習(xí)和掌握巴斯德效應(yīng)的原理及測(cè)量方法。二、 基本原理1二、 基本原理巴斯德效應(yīng)：氧對(duì)發(fā)酵的抑制作用。酵母菌在無(wú)氧發(fā)酵中將葡萄糖分解成乙醇和CO2 。通進(jìn)氧氣，乙醇停止產(chǎn)生，葡萄糖消耗率明顯下降。一般兼性厭氧微生物都具有明顯的巴斯德效應(yīng)。測(cè)定項(xiàng)目： 細(xì)胞干重、發(fā)酵液中還原糖的量（3，5二硝基水楊酸比色定糖法）23，5二硝基水楊酸比色定糖法原理：3，5二硝基水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定比例關(guān)系，可用于比色測(cè)定，通過(guò)與還原糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，可得出溶液中的還原糖量。此法操作簡(jiǎn)便、快速、雜質(zhì)干擾少

2、。3三、實(shí)驗(yàn)器材菌種：啤酒酵母 (S.crovisiae)培養(yǎng)基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，NaCl 0.5g，水 1000ml，pH7.2器具：厭氧培養(yǎng)裝置（干燥器）、三角瓶、30ml試管、酒精燈、接種環(huán)等 。4四、操作步驟菌懸液制備:將生長(zhǎng)旺盛的酵母菌菌苔從斜面上用生理鹽水洗下，制成細(xì)胞懸液。液體培養(yǎng)基分裝：分好養(yǎng)與厭氧兩種。取液體培養(yǎng)基50ml裝于250ml三角瓶中，瓶口塞以紗布塞，滅菌后作好氧培養(yǎng)。取液體30ml裝入大試管，瓶口塞以橡膠塞，滅菌后作厭氧培養(yǎng)用。5接種培養(yǎng)：分好養(yǎng)與厭氧兩種好氧培養(yǎng)：取菌懸液各1ml，分別接種于兩個(gè)裝有50 ml培養(yǎng)液的500ml三角瓶中。

3、28oC搖床培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間24 _ 48小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分。設(shè)接無(wú)菌水對(duì)照。厭氧培養(yǎng)：化學(xué)吸氧法干燥器培養(yǎng)。各取1ml的兩種懸液，分別接種裝有30 ml培養(yǎng)液的大試管。預(yù)先在干燥器內(nèi)裝焦性沒(méi)食子酸和NaOH，將接種的試管放入干燥器內(nèi)，在器皿上涂上凡士林，使之密封，然后抽氣10至15分鐘關(guān)閉活塞。晃動(dòng)干燥器，使NaOH傾倒與焦性沒(méi)食子酸混合，產(chǎn)生吸氧作用。每克焦性沒(méi)食子酸在過(guò)量堿液中能吸收100ml空氣中的氧，常用1克焦性沒(méi)食子酸加10%的NaOH 10ml配制。6取樣測(cè)定：菌體干重：分別取發(fā)酵液10ml于已稱好干重的離心管中，50006000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，取上清液于另一離心管中，帶菌體的離心管放入105 _110oC烘箱中，烘干1小時(shí)，冷卻后稱重，然后求出每ml菌液中菌體干重。發(fā)酵液中還原糖含量：同時(shí)取培養(yǎng)液的上清液（去除菌體）及對(duì)照培養(yǎng)基，按下表加入試劑：78五、結(jié)果與討論由05號(hào)管的數(shù)據(jù)，以葡萄糖含量(mg)為橫坐標(biāo)，A540為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求樣品管中葡萄糖的含量(mg)。求出每生長(zhǎng)1mg菌體（干重），需要消耗