醫(yī)學(xué)專題藥敏試驗簡介

1、藥敏試驗簡介盧先雷12021/7/20 星期二本節(jié)課程需要掌握的內(nèi)容什么是藥敏試驗，什么時候需要做藥敏試驗即藥敏試驗的臨床指征是什么？藥敏試驗方法學(xué)怎么做藥敏試驗結(jié)果的正確判讀與解釋怎么觀察藥敏結(jié)果的正確報告藥敏試驗的室內(nèi)質(zhì)量控制22021/7/20 星期二藥敏試驗的概念與適應(yīng)征通過模擬體內(nèi)環(huán)境條件，測試分離自病人體內(nèi)感染部位的病原菌對常用抗生素的敏感性，即抗生素對目標(biāo)細菌的抑制能力，從而預(yù)測抗生素治療效果的一種體外試驗方法。藥敏試驗適應(yīng)征：分離菌是感染菌而不是定植菌或污染菌；常規(guī)經(jīng)驗治療效果不佳或有較高失敗風(fēng)險時；對感染菌的耐藥性無法估計時；需要了解微生物耐藥性變遷時32021/7/20 星

2、期二藥敏試驗方法學(xué)紙片擴散法稀釋法（MIC法）肉湯稀釋法常量稀釋法微量稀釋法瓊脂稀釋法E-test法42021/7/20 星期二藥敏試驗方法學(xué)指南美國CLSIM2-A10 Disk Diffusion (2009)*M7-A8 MIC (2009)*M11-A7 Anaerobes (2007)M24-A Mycobacteria, Nocardiae, and Other Aerobic ActinomycetesM27-A2 Fungal MIC(2002)M44-A Funga Disk Diffusion(2004)M45-A Infrequently Isolated/Fastidi

3、ous Bacteria (2006) * M2, M7 updated every 3 years52021/7/20 星期二其他標(biāo)準：法國CASFM標(biāo)準； 梅里埃產(chǎn)品習(xí)慣采用的CLSI以外的標(biāo)準英國BSAC標(biāo)準； 歐洲應(yīng)用比較廣泛的標(biāo)準德國DIN標(biāo)準 .62021/7/20 星期二紙片擴散法原理一定藥物含量的碟形抗生素紙片貼在涂布一定濃度菌液的瓊脂上，過夜培養(yǎng)后抗生素擴散到紙片周圍的瓊脂中，形成一定濃度區(qū)域，越靠近紙片的濃度越高，反之越低；當(dāng)?shù)偷揭欢ǔ潭龋∕IC以下）時藥物無法抑制細菌的生長，從而形成界限分明的抑菌環(huán)通過抑菌環(huán)大小與MIC值高低之間的統(tǒng)計學(xué)分布關(guān)系，經(jīng)過回歸處理可以求出細菌

4、對某種抗生素的MIC折點范圍對應(yīng)的抑菌環(huán)大小值。由此可知，MIC與抑菌環(huán)大小之間存在負相關(guān)，。72021/7/20 星期二試驗方法與條件CLSI推薦培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)要求細菌使用水解酪蛋白瓊脂（MHA）平板肺鏈使用含5%綿羊血的含血MHA嗜血桿菌使用HTM培養(yǎng)基淋球菌使用含1%生長因子（不含L-半胱氨酸）補充劑的GC培養(yǎng)基平皿大?。鹤钚?0mm，通常使用150mm平板瓊脂厚度41mm菌液濃度0.5 McF（約1.5108CFU/ml）82021/7/20 星期二涂布方法：無菌棉簽浸透菌液后稍微擠干，棉簽與平板呈30左右的傾角密集左右來回涂布，完成一遍后旋轉(zhuǎn)120后再涂，如此三次，最后繞邊緣一次紙

5、片之間最佳間距30mm，不得低于25mm培養(yǎng)溫度；35；重疊時不超過3個碟子氣體環(huán)境：普通細菌大氣環(huán)境；嗜血桿菌、淋球菌、肺鏈置CO2環(huán)境培養(yǎng)時間：18小時92021/7/20 星期二測量方法透射光葡萄球菌利奈唑胺苯唑西林萬古霉素腸球菌萬古霉素102021/7/20 星期二反射光測量其他細菌與藥物時112021/7/20 星期二變形桿菌忽略環(huán)內(nèi)的遷徙生長122021/7/20 星期二測量肉眼可見的明顯抑菌區(qū)忽略環(huán)邊緣的微弱生長132021/7/20 星期二環(huán)內(nèi)生長現(xiàn)象大腸藥敏，被腸球菌污染銅綠假單胞菌耐藥亞群142021/7/20 星期二特殊處理方法當(dāng)受測抑菌環(huán)與旁邊的融合時，選擇完整部分測量

6、當(dāng)受測抑菌環(huán)部分變形時，選擇正常部分測量152021/7/20 星期二擴散法藥敏影響因素培養(yǎng)基pH值7.2-7.4營養(yǎng)程度（腸球菌能生長）厚度抗生素拮抗劑含量（用29212監(jiān)控）鈣鎂離子含量、鋅離子含量（用27853氨基糖苷類和亞胺配能結(jié)果監(jiān)控）菌懸液濃度高抑菌環(huán)縮小濃度低則擴大細菌純度氣體環(huán)境普通細菌放CO2時由于碳酸的影響，藥物活性受到影響，形成假敏感或假耐藥苛養(yǎng)菌放普通環(huán)境生長不良，導(dǎo)致假敏感培養(yǎng)時間粘液性銅綠需48小時測量方法162021/7/20 星期二稀釋法（MIC法）MIC法：分為常量法和微量法常量法：肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法微量法：微量肉湯稀釋法簡化雙濃度折點法 ATB藥敏簡化常

7、規(guī)濃度分布MIC法 BD、德靈藥敏動力學(xué)計算MIC法 VITEK32、VITEK2藥敏172021/7/20 星期二試驗方法與條件CLSI推薦培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)要求細菌使用補充陽離子MH肉湯肺鏈使用含2%凍融馬血的MH肉湯嗜血桿菌使用HTM肉湯厭氧菌和微需氧菌使用布氏肉湯淋病奈瑟菌推薦強化GC作瓊脂稀釋法菌液濃度（5104CFU/ml）：初始菌液0.5 McF（約1.5108CFU/ml）鹽水稀釋200倍，加入0.1ml菌液到含有0.1ml 雙倍濃縮的MH肉湯的微孔板中（或預(yù)先用標(biāo)準濃度的MH肉湯稀釋后再加到微孔中）182021/7/20 星期二接種后應(yīng)充分混勻，但不能有氣泡產(chǎn)生靜置培養(yǎng)培養(yǎng)溫度

8、；35氣體環(huán)境：所有細菌（包括苛養(yǎng)菌）均置大氣環(huán)境；厭氧菌置厭氧環(huán)境；微需氧菌置微需氧環(huán)境；淋菌瓊脂稀釋法置CO2培養(yǎng)時間：18小時結(jié)果讀?。阂姾竺娴幕脽簦?92021/7/20 星期二常量稀釋法藥敏試驗的參考方法： 將標(biāo)準接種物加入含対倍稀釋抗生素的MH肉湯管中. 過夜培養(yǎng). MIC 即是能抑制細菌生長的含最低抗生素的濃度的那一管所標(biāo)示的濃度值(瓊脂稀釋法是將対倍稀釋后的抗生素加入融化后平衡到50的MHA中再傾制平皿，接種物為一定大小的斑點，濃度也為104CFU/ml). 解釋標(biāo)準(S or R) 是建立在體內(nèi)可達到的抗生素濃度水平上104 cfu/ml4210.50.250.120mg/m

9、l202021/7/20 星期二微量肉湯稀釋法212021/7/20 星期二商品化藥敏系統(tǒng)MicroScanSensititrePhoenixVitek 2 compact 222021/7/20 星期二微量肉湯稀釋法結(jié)果讀取技巧磺胺類藥物容易出現(xiàn)弱生長，只要滿足70%以上抑菌率即可視為未生長真菌藥敏三唑類藥物容易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象（即低濃度孔易出現(xiàn)弱生長），判讀時以對照孔為參照，80%的抑菌率即可視為未生長大于三孔不同梯度濃度的抗生素測試中，出現(xiàn)的高濃度生長，而低濃度不生長現(xiàn)象叫跳孔。造成跳孔的主要原因，菌懸液乳化不充分，細菌分散不足，以及藥敏卡某些孔被污染跳孔的解決方法：根據(jù)其他藥理學(xué)特征類似的

10、抗生素的敏感性以及分析其他同類不同種抗生素的敏感性進行推斷性修正修正低濃度耐藥修正高濃度敏感232021/7/20 星期二肉湯稀釋法注意事項生長緩慢微生物（形成肉眼可見生長1周）不適合用MIC法在肉湯中發(fā)育不良的微生物不適合用MIC粘液性銅綠假單胞菌只能用擴散法，48小時觀察結(jié)果淋病奈瑟菌CLSI無肉湯稀釋法藥敏指南注意微弱生長導(dǎo)致的假敏感（結(jié)果需要修正）例如銅綠對磺胺、四環(huán)素、頭孢噻肟/曲松鮑曼不動桿菌對氨曲南肺克、陰溝、變形桿菌對呋喃妥因242021/7/20 星期二稀釋法藥敏影響因素培養(yǎng)基pH值 7.2-7.4營養(yǎng)程度抗生素拮抗劑含量鈣鎂離子含量（鈣10-25；鎂10-12.5g/ml）

11、菌懸液（5104CFU/ml）接種效應(yīng)濃度高MIC抬高濃度低MIC壓低細菌純度氣體環(huán)境所有需氧細菌均放普通大氣環(huán)境。如果放CO2，由于碳酸的影響，藥物活性受到影響，形成假敏感或假耐藥培養(yǎng)時間真菌需48小時奴卡菌需5天252021/7/20 星期二MIC 值標(biāo)注于試條的光面Etest 試條毛面貼于MHA上262021/7/20 星期二Etest 操作程序按照擴散法標(biāo)準操作涂布接種貼上試條并培養(yǎng)15-18小時讀取抑菌濃度并按標(biāo)準解釋272021/7/20 星期二肺炎鏈球菌青霉素 MIC = 3 g/ml 結(jié)果讀取282021/7/20 星期二292021/7/20 星期二藥敏解釋標(biāo)準CLSI標(biāo)準；

12、全球性每年更新非強制性學(xué)術(shù)機構(gòu)FDA標(biāo)準（全球標(biāo)準）建立在CLSI基礎(chǔ)上68年更新一次官方機構(gòu)，標(biāo)準帶有強制性法國CASFM標(biāo)準； 梅里埃產(chǎn)品習(xí)慣采用的CLSI以外的標(biāo)準英國BSAC標(biāo)準； 歐洲應(yīng)用比較廣泛的標(biāo)準德國DIN標(biāo)準 .302021/7/20 星期二CLSI藥敏解釋標(biāo)準CLSI (Clinical Laboratory standard institution)藥敏指南CLSI312021/7/20 星期二CLSI 藥敏文件M100-S22 常見菌 (2012)*M11-A7 厭氧菌 (2007)M39-A3 積累抗菌譜(2009)M24-A 分枝桿菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放線菌

13、M27-A2 酵母樣真菌MIC法(2002)M44-A 真菌紙片擴散法(2004)M45-A 低頻分離菌與苛養(yǎng)菌(2006) *M100 updated yearly322021/7/20 星期二M2 (紙片法操作方法)M7 (MIC法操作方法)M100（解釋標(biāo)準）作為共識標(biāo)準即“參考方法”臨床實驗室通常這樣使用使用CLSI 方法記錄采用其他方法時使用CLSI做參照方法進行比對332021/7/20 星期二更新信息M2 表格 擴散法M7 表格MIC法附錄詞匯表I & II & IIICLSI M100 “表格” 內(nèi)容抗生素的測試與報告S I R 折點質(zhì)控M100 抗生素的測試與報告S I R

14、折點質(zhì)控342021/7/20 星期二CLSI M100-S22 更新信息 352021/7/20 星期二CLSI M100-S22 Glossary I (Part 1)362021/7/20 星期二CLSI M100-S22 詞匯表 I Part 1, 例如 抗生素類別抗生素亞類含蓋的抗生素; 通用名青霉素類青霉素亞類青霉素青霉素酶穩(wěn)定青霉素氯唑西林雙氯西林甲氧西林萘夫西林苯唑西林372021/7/20 星期二CLSI M100-S22 詞匯表 II 例如 抗生素類別抗生素縮寫給藥途徑藥物類別口服靜脈滴注肌肉注射阿米卡星AN, AK, Ak, AMI, AMKXX氨基糖苷類氨芐西林AM,

15、Am, AMPXXX青霉素類382021/7/20 星期二我們應(yīng)該如何測試和報告?CLSI M100-S22. Table 1A點擊放大392021/7/20 星期二分組測試與選擇性報告在做藥敏時每組中不同類藥物只選用一種抗生素用于測試，藥理作用特殊者單獨測試，這些抗生素稱為代表藥物。按CLSI規(guī)定，由FDA根據(jù)抗生素在臨床實踐中表現(xiàn)出來的安全性、有效性、和醫(yī)學(xué)經(jīng)濟學(xué)原則將抗生素分為A,B,C三組。報告時按照ABC的次序進行報告。402021/7/20 星期二關(guān)于抗生素分組A組藥物是首選藥物，屬于最經(jīng)濟有效，最安全的抗生素類別B組是在A組藥物無效時，或者感染不單純需要擴展微生物覆蓋范圍時選用的

16、藥物，耐藥性一般較A組藥物低，但可能價格較貴或者安全性處于考察期內(nèi)C組藥物是A組和B組藥物都耐藥時需要選用的備用抗生素，通常用于治療高耐藥菌株和嚴重的復(fù)雜性感染。耐藥性最低，但價格昂貴或者安全性差412021/7/20 星期二適合于治療尿路感染的抗生素被歸入U組可考慮選擇性應(yīng)用但其適應(yīng)癥或適用范圍不屬于常規(guī)報告范疇的抗生素歸入O組處于考察過程中的某些新藥和某些老藥在擴展應(yīng)用范圍時歸入Inv組422021/7/20 星期二關(guān)于代表藥物微生物室選取用于測試和報告的抗生素是可以代表一類抗菌原理相同，抗菌效能相仿，抗菌譜基本一致，并且耐藥機制相同的藥物。即只需測試一種藥物就可以推測出該類藥物中其他幾種

17、藥物的敏感性。在根據(jù)藥敏結(jié)果選用抗生素時只需選用效果相同的即可。432021/7/20 星期二關(guān)于代表藥物需要注意：代表藥物的代表作用只能針對同一類別的微生物，即位于表1A中同一框內(nèi)的幾個藥物選取其中一個即可代表該類(或亞類)藥物如果一類中有幾個藥物分別位于不同框中，則說明這幾個藥物抗菌活性或耐藥譜有所不同，需要分別測試442021/7/20 星期二我們?nèi)绾卫斫狻斑x擇性報告”?首先報告窄譜, 低毒性, 最便宜的藥物如果有下列情況，則報告其他藥物:對一線藥物耐藥時(A組藥物)分離菌來自特殊部位病人對一線藥物過敏或不耐受多種微生物感染混合感染 不同微生物導(dǎo)致的多部位感染 452021/7/20 星

18、期二銅綠假單胞菌頭孢他啶 8 S 環(huán)丙沙星 1 S慶大霉素 2 S哌拉西林/他唑巴坦 16 S MIC (g/ml) 選擇性報告例如選擇性報告GroupBGroupB462021/7/20 星期二阿米卡星 8 S頭孢他啶32 R 環(huán)丙沙星 1 S慶大霉素16 R亞胺配能 4 S哌拉西林/他唑巴坦 128 R妥布霉素16 R MIC (g/ml) 選擇性報告選擇性報告例如銅綠假單胞菌GroupBGroupBGroupB472021/7/20 星期二我們應(yīng)該使用分級報告規(guī)則嗎?是, 這個規(guī)則是經(jīng)過國際醫(yī)療組織眾多醫(yī)務(wù)工作者一致通過的是, 這將有助于臨床醫(yī)生在開處方時，將范圍集中于:窄譜抗生素低毒抗

19、生素廉價抗生素也許不是如果在我們所在的醫(yī)療機構(gòu)中我們能有更好的辦法激勵臨床醫(yī)生“謹慎處方” 的話482021/7/20 星期二粘質(zhì)沙雷菌氨芐西林R頭孢唑林R頭孢曲松S慶大霉素S亞胺配能R哌拉西林/他唑巴坦S復(fù)方新諾明S報告偶然發(fā)現(xiàn)的亞胺配能耐藥現(xiàn)象(通常情況下，一般實驗室在哌拉西林和頭孢曲松測定敏感時，不會報告亞胺配能的結(jié)果（多數(shù)情況下該藥是敏感的），但需要注意如果測定出耐藥時，就必須報告) 例如：金屬酶？修正為R修正為R492021/7/20 星期二CLSI M100 表 1的解讀注意：“方框”的含義“或”字的含義 “警告” 評述的含義“Rx” 評述的含義認真閱讀腳注敘述的內(nèi)容502021/

20、7/20 星期二例如這張幻燈CLSI M100-S22. Table 1A512021/7/20 星期二No “or”“or”CLSI M100-S22. Table 1A522021/7/20 星期二表1對于分組測試與報告推薦藥物表格的注釋說明532021/7/20 星期二同一框中無“或”字相連, 例如: 銅綠假單胞菌亞胺配能美羅培能每個框中包含的多個藥物 測試結(jié)果解釋(S, I, R) 時類似臨床療效類似并且, 只需選擇其中一種藥物用于測試即可(當(dāng)然所選的藥物在你所在的機構(gòu)應(yīng)是恰當(dāng)?shù)?不能從一個藥推導(dǎo)到另一個藥CLSI M100-S22. Table 1A542021/7/20 星期二框中

21、有“或”字相連的，例如: 葡萄球菌阿奇霉素 “或”克拉霉素“ 或” 紅霉素在一個框中各個藥之間有“或”字相連 幾乎具有完全相同的交叉耐藥和交叉敏感臨床療效也是相同的可以從一個藥推衍到另一個藥CLSI M100-S22. Table 1A552021/7/20 星期二“或”字相連的應(yīng)用實例例如: 葡萄球菌阿奇霉素 “或” 克拉霉素“或”紅霉素CLSI M100-S22. Table 1A562021/7/20 星期二金黃色葡萄球菌 克林霉素S 紅霉素R 苯唑西林S 青霉素R 萬古霉素S “MLSb(+) 金黃色葡萄球菌克林霉素應(yīng)修正為耐藥耐藥結(jié)果推衍實例推衍出阿奇霉素及克拉霉素耐藥572021/

22、7/20 星期二金黃色葡萄球菌 克林霉素S 紅霉素S 苯唑西林S 青霉素R 萬古霉素S敏感結(jié)果推衍實例推衍出阿奇霉素及克拉霉素敏感582021/7/20 星期二CLSI “警告” 評述 有些藥物或復(fù)合藥物制劑測試結(jié)果為 “S” 但臨床治療無效 禁止根據(jù)測試結(jié)果就報告“敏感”592021/7/20 星期二體外測試敏感但體內(nèi)無效的藥物或藥物復(fù)合制劑微生物沙門菌、志賀菌李斯特菌ESBL 陽性的腸桿菌禁止報告“S”一二代頭孢頭霉菌素氨基糖苷類所有頭孢類氨曲南一二代頭孢菌素三四代頭孢修改折點的除外青霉素類CLSI M100-S22. Table 1A602021/7/20 星期二體外測試敏感但體內(nèi)無效的

23、藥物或藥物復(fù)合制劑微生物 MRSA, MRCNS 腸球菌禁止報告“S”所有內(nèi)酰胺類 頭孢類 克林霉素 復(fù)方新諾明 氨基糖苷類 (高濃度除外)CLSI M100-S22. Table 1A612021/7/20 星期二“警告” 評述 舉例“Warning: For oxacillin-resistant staphylococci (MRS), all penicillins, cephems, carbapenems, and other -lactams such as amoxicillin-clavulanic acid, ampicillin-sulbactam, ticarcilli

24、n-clavulanic acid, piperacillin-tazobactam, and imipenem may appear active in vitro but are not effective clinically. Results for these drugs should be reported as resistant or should not be reported. This is because most cases of documented MRS infections have responded poorly to -lactam therapy, o

25、r because convincing clinical data have yet to be presented that document clinical efficacy for these agents.警告：對于MRS而言，無論你在實驗中測得的結(jié)果如何，所有內(nèi)酰胺類在臨床治療中均是無活性的；應(yīng)該報告所有的-內(nèi)酰胺類藥物耐藥。因為在臨床治療觀察中對MRS測試“敏感”的這類抗生素不是反應(yīng)差就是無令人信服的數(shù)據(jù)證明其有效性。CLSI M100-S18622021/7/20 星期二觀點的歷史沿革與發(fā)展Oxacillin-resistant staphylococci are resis

26、tant to all currently available -lactam antimicrobial agents, with the exception of the newer cephalosporins with anti-MRSA activity. Thus, susceptibility or resistance to a wide array of -lactam antimicrobial agents may be deduced from testing only penicillin and either cefoxitin or oxacillin. Rout

27、ine testing of other penicillins, -lactam/-lactamase inhibitor combinations, cephems, or carbapenems is not advised. 苯唑西林耐藥葡萄球菌（MRS）對除開新型的具有抗MRSA活性的頭孢菌素之外的所有-內(nèi)酰胺類均耐藥；對眾多內(nèi)酰胺類抗生素而言，只需要通過檢測青霉素，與苯唑西林或頭孢西丁中的任意一個即可預(yù)測其他抗生素的敏感與耐藥。無須常規(guī)測試其他青霉素類、頭孢類、復(fù)合制劑、碳青霉烯類。CLSI M100-S22632021/7/20 星期二金黃色葡萄球菌頭孢唑林 S R*克林霉素 R

28、 紅霉素 R 苯唑西林 R 青霉素 R 萬古霉素 S“警告” 舉例642021/7/20 星期二分離自腦脊液中的菌株不要報告這里所例舉的任意一種藥物僅僅用于口服的藥物一二代頭孢菌素(頭孢呋辛鈉除外)頭霉菌素類克林霉素大環(huán)內(nèi)酯類四環(huán)素類氟喹諾酮類CLSI M100-S22. Table 1A652021/7/20 星期二尿液中的分離菌不要報告下列抗生素阿奇霉素氯霉素克拉霉素克林霉素紅霉素報告CLSI M100-S22 Table 1A中位于U組的抗生素：例如， 呋喃妥因，等。CLSI M100-S22 這些藥物不通過腎臟排泄，因而在尿液中達不到應(yīng)有濃度，對感染的治療無貢獻662021/7/20

29、星期二CLSI “Rx” 評述 該處評述（或者修訂評述）的建議是針對臨床醫(yī)生在處方過程中應(yīng)該理解并注意的，微生物室應(yīng)附在報告中提示醫(yī)生672021/7/20 星期二Rx: 評述舉例Rx: 利福平在抗菌治療中不能單獨應(yīng)用CLSI M100-S22682021/7/20 星期二金黃色葡萄球菌克林霉素 R 紅霉素 R 苯唑西林 R 青霉素 R利福平 S 萬古霉素 S“Rx: 利福平在抗菌治療中不能單獨應(yīng)用”“Rx” 舉例692021/7/20 星期二CLSI M100-S22 Table 2A 解釋標(biāo)準(折點)例如：腸桿菌科細菌702021/7/20 星期二CLSI M100-S22 解釋標(biāo)準覆蓋的

30、細菌類別腸桿菌科銅綠假單胞菌不動桿菌屬洋蔥伯克霍爾德菌嗜麥芽窄食單胞菌其他非腸道桿菌葡萄球菌屬腸球菌屬流感嗜血桿菌與副流感桿菌淋病奈瑟菌肺炎鏈球菌-溶血鏈球菌草綠色鏈球菌腦膜炎奈瑟菌厭氧菌712021/7/20 星期二不同細菌適用的藥敏方法部分細菌同時具有擴散法標(biāo)準和MIC標(biāo)準，但具有擴散法標(biāo)準的藥物相對較少部分細菌（某些藥物）只有MIC標(biāo)準其他非腸道細菌所有藥物葡萄球菌萬古霉素、托達霉素腸球菌托達霉素肺鏈除苯唑西林以外的其他內(nèi)酰胺類溶血鏈球菌除青霉素、氨芐青霉素、頭孢吡肟、噻肟、曲松外的其他內(nèi)酰胺類草綠色鏈球菌除頭孢吡肟、噻肟、曲松外的其他內(nèi)酰胺類厭氧菌所有藥物淋菌只有擴散法和瓊脂稀釋法，無

31、肉湯稀釋法標(biāo)準722021/7/20 星期二表2中沒有列舉的抗生素或者目前為止尚無解釋標(biāo)準的抗生素. 毫無疑問這些都是不用測試的例如: 銅綠假單胞菌對頭孢西丁，因為該藥對銅綠是沒有活性的732021/7/20 星期二只有“S” 無“I”或“R”藥物的定義罕見CLSI M100-S22. 表2E，綜合評述（7）.For some organism/antimicrobial agent combinations, the absence or rare occurrence of resistant strains precludes defining any results categorie

32、s other than “susceptible.” For strains yielding results suggestive of a “nonsusceptible” category, organism identification and antimicrobial susceptibility test results should be confirmed.對于某些細菌而言，某些抗生素敏感以外的結(jié)果是不存在或罕見的；當(dāng)產(chǎn)生不敏感結(jié)果時，其鑒定或藥敏結(jié)果應(yīng)該經(jīng)過其他途徑確認742021/7/20 星期二 肺炎鏈球菌- 萬古霉素 MIC (g/ml) 敏感 中介 耐藥萬古霉素

33、1.0 - - CLSI M100-S22. Table 2G*研究任何產(chǎn)生不敏感結(jié)果的菌株.重復(fù)鑒定藥敏.保留菌株.送往參考實驗室(用CLSI 標(biāo)準MIC 法復(fù)核)752021/7/20 星期二CLSI M100 S22包含的其他信息特殊耐藥機制檢測方法推薦給藥方案質(zhì)控方案天然耐藥譜不常見耐藥表型介紹以及確認方法脆弱擬桿菌抗生素積累敏感性（統(tǒng)計）其他厭氧菌抗生素積累敏感性（統(tǒng)計）質(zhì)量管理系統(tǒng)簡介762021/7/20 星期二少見菌和苛養(yǎng)菌的特殊藥敏參考方法：M45-A乏養(yǎng)菌與顆粒鏈菌稀釋法嗜水氣單胞菌復(fù)合群稀釋法與擴散法弧菌屬細菌（霍亂除外）稀釋法與擴散法芽孢桿菌屬（炭疽除外）稀釋法空腸/大

34、腸彎曲菌稀釋法與擴散法棒狀桿菌稀釋法（可用的藥物標(biāo)準比BSAC標(biāo)準提供的多）Methods for Antimicrobial Dilution and Disk Susceptibility Testing of Infrequently Isolated or Fastidious Bacteria；Approved guideline772021/7/20 星期二豬紅斑丹毒似菌稀釋法HACEK組苛養(yǎng)性G-桿菌稀釋法卡他莫拉菌稀釋法產(chǎn)單核細胞李斯特菌稀釋法巴斯德菌稀釋法其他，如乳桿菌、片球菌、無色藻菌稀釋法782021/7/20 星期二分枝桿菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放線菌藥敏參考方法：

35、M24-A結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群比例法緩慢生長非結(jié)核分枝桿菌稀釋法快速生長分枝桿菌稀釋法奴卡菌等需氧放線菌稀釋法Susceptibility Testing of Mycobacteria, Nocardiae, and Other Aerobic Actinomycetes; Approved Standard792021/7/20 星期二真菌藥敏M27-A2用于酵母樣真菌的稀釋法藥敏只有氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶有解釋標(biāo)準，其他藥物的測試結(jié)果報告MIC M44-A用于酵母樣真菌的擴散法藥敏只有氟康唑有解釋標(biāo)準M38-P用于絲狀真菌的稀釋法藥敏只有操作方法，報告MIC值，但無解釋標(biāo)準802021

36、/7/20 星期二藥敏試驗質(zhì)量控制意義：保障藥敏結(jié)果的可靠性準確性和精密度控制環(huán)節(jié)（重要的五大環(huán)節(jié)）：*質(zhì)控1：人員操作能力質(zhì)控2：菌液濃度（比濁）質(zhì)控3：培養(yǎng)基質(zhì)量質(zhì)控4：藥敏試劑（紙片或MIC試卡/板）、讀取藥敏結(jié)果的儀器設(shè)備*質(zhì)控5：異常結(jié)果的發(fā)現(xiàn)與修正參照指南：CLSI文件812021/7/20 星期二*質(zhì)控1：人員標(biāo)準操作指南：擴散法參照CLSI-M2文件；MIC法參照M7文件考核內(nèi)容：基本操作步驟的熟練程度結(jié)果的正確讀取822021/7/20 星期二人員：操作步驟的熟練程度按照標(biāo)準程序操作，能在15分鐘內(nèi)完成單個分離菌的藥敏試驗操作操作過程：菌落的挑取手法菌液的配制操作與菌液混勻操

37、作擴散法中菌液涂布操作MIC法中菌液的稀釋操作儀器法中儀器的標(biāo)準操作手法菌懸液純度和濁度的驗證性操作；832021/7/20 星期二人員：結(jié)果的正確讀取抑菌環(huán)的正確測量忽略邊緣的微弱生長環(huán)內(nèi)生長的檢測污染菌的發(fā)現(xiàn)或耐藥亞群的分離確認MIC值的正確讀取包括跳孔現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)與糾正微弱生長孔的發(fā)現(xiàn)與結(jié)果修正（磺胺、四環(huán)、氯霉素、氨曲南）拖尾現(xiàn)象的正確忽略（磺胺、真菌）生長不良的確認與補救措施（重做、延長）842021/7/20 星期二質(zhì)控2：菌液濁度控制目測法控制內(nèi)容：主要是0.5McF濁度的感知能力參照物：0.5 McF硫酸鋇比濁管，對應(yīng)1.5108 CFU/ml 參考方法：菌液稀釋后菌落計數(shù)法允許

38、誤差：1.5107 1.5109 CFU/ml 儀器法控制內(nèi)容：同上校準品：0.54 McF硫酸鋇比濁管參考方法：同上允許誤差：同上852021/7/20 星期二質(zhì)控3：MH培養(yǎng)基質(zhì)量控制pH值 7.2-7.4營養(yǎng)程度：不加血的情況下就能支持ATCC 29212的生長 抗生素拮抗劑含量：使用ATCC 29212監(jiān)測，擴散法有抑菌環(huán)出現(xiàn)，并且環(huán)內(nèi)只允許微量小菌落出現(xiàn)；MIC法抑菌率80%鈣鎂離子含量：鈣10-25、鎂10-12.5g/ml鋅離子含量：ATCC27853亞胺配能結(jié)果在允許范圍內(nèi)862021/7/20 星期二質(zhì)控4：藥敏試劑質(zhì)控CLSI提供擴散法和稀釋法的質(zhì)控標(biāo)準擴散法標(biāo)準適合于紙片擴散法稀釋法標(biāo)準適合于微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法，以及E-test法內(nèi)容標(biāo)準菌株質(zhì)控頻率各種藥物的控制范圍872021/7/20 星期二擴散法質(zhì)控菌株非苛養(yǎng)菌：腸桿菌科ATCC 25922 大腸；非發(fā)酵菌27853 銅綠；葡萄球菌25923 金葡；加酶抑制劑抗生素質(zhì)控35218 產(chǎn)ESBL大腸苛養(yǎng)菌：嗜血桿菌49247 流感，49766 流感用于補充，彌補49247某些不能檢測的藥物；淋菌用49226；肺鏈用49619882021/7