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文檔簡介

1、堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素生物素法（SAP免疫組織化學(xué)實驗二1實驗材料1、小鼠胰腺的石蠟切片；2、胰島素抗體（鼠抗人單克隆抗體）；3、SAP檢測試劑盒；4、正常羊血清；5、 0.01M PBS（pH7.27.6） ；6、BCIP/NBT顯色試劑；7、孵育濕盒。2實驗原理ABC法SAP法3實驗方法或步驟1、石蠟切片脫蠟至水，蒸餾水洗，PBS浸泡2min；(如需采用 抗原修復(fù)，可在此步后進行)。2、10正常羊血清封閉，室溫孵育10min；3、傾去血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的胰島素一抗或一抗工 作液，37孵育45min。 PBS沖洗，33min；4、滴加生物素標記羊抗鼠IgG工作液，37孵育20m

2、in；5、 PBS沖洗，33min；6、滴加堿性磷酸酶標記鏈霉親和素工作液，37或室溫孵育 20min。 PBS沖洗，33min；7、顯色劑顯色（BCIP/NBT）；8、自來水充分沖洗，封片。4結(jié)果 胰島內(nèi)可見藍色或紫藍色著色的陽性細胞，陽性產(chǎn)物見于細胞質(zhì)5多聚鰲合物酶法 HRP-多聚化合物-抗體 一、Epos法 Enhanced polymer one-step staining6組織抗原一抗HRP多聚化合物骨架EPOS 方法7原理：采用一種具有惰性的多聚 化合物作為骨架，將特異 性抗體和HRP，同時標記 在多聚合物分子上，形成 HRP-多聚化合物-特異 性抗體。 8步驟：一步法特點：快速，

3、簡便，特異性強， 敏感性高 但商品化種類不全， 價格昂貴9二、EnVision法（或PowerVison） Enhanced Labelled Polymer System 原理：HRP -多聚化合物-第二 抗體10組織抗原一抗二抗酶多聚化合物骨架第一步第二步PowerVision方法11特點：敏感性高：（每個多聚鰲合物中含70個 HRP分子和10 個第二抗體） 特異性強： 復(fù)合物內(nèi)無內(nèi)源性Avidin和Biotin的干擾。12基本操作步驟 1. 抗原修復(fù)2.內(nèi)源性過氧化 物抑制3. 正常血清封閉4. 第一抗體5. 多聚骨架復(fù)合物6. 顯色 13實驗步驟1、石蠟切片脫蠟至水，PBS洗33min；2、3%H2O2室溫孵育10min，以消除內(nèi)源性過氧化 物酶的活性；蒸餾水洗，PBS浸泡5min；3、滴加適當比例稀釋的胰島素一抗工作液， 37 孵育1hr；4、 PBS沖洗，33min；5、 滴加HRP標記羊抗小鼠Ig多聚體，37或室溫孵 育2030min；6、 PBS沖洗，33min； 7、顯色劑顯色

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