白細(xì)胞、血小板顯微鏡計數(shù)法

1、白細(xì)胞顯微鏡計數(shù)法原理取稀釋酸溶液， 將血液稀釋一定倍數(shù)并破壞紅細(xì)胞， 滴入計數(shù)池， 計數(shù)一定范圍內(nèi)白細(xì)胞數(shù)，然后換算成每升血中白細(xì)胞數(shù)。試劑白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸，加蒸餾水至100ml ，再加 10g/l 亞甲藍(lán)（或結(jié)晶紫）1 滴，可使白細(xì)胞略著色，用時便于區(qū)別紅細(xì)胞稀釋液。器材顯微鏡：普通生物顯微鏡。微量吸管：吸管上刻有10 和 20ul 兩個刻度（誤差+-1%） 。微量吸管由于生產(chǎn)廠家不同，質(zhì)量也不相同，但不論哪家產(chǎn)品，在使用前均需經(jīng)嚴(yán)格校正，且應(yīng)做到每位患者 1 支。細(xì)胞計數(shù)板：計數(shù)板是用優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成，每塊計數(shù)板又分兩個計數(shù)池。在計數(shù)池兩側(cè)各有一條支柱，與計數(shù)池高度差是。所以將一塊平整

2、的血細(xì)胞計數(shù)蓋片放在兩條支柱上時，蓋片底面與計數(shù)池之距離為。目前國內(nèi)通用的是改良Neubauer 計數(shù)板。這類計數(shù)板中，每個計數(shù)池的邊線長寬各為3mm， 并被精密地刻劃成9 個大方格， 每個大方格長寬各為， 其面積為 1mm2o加蓋玻片后的容積為ImitfX .其中四角上的大方格用單線劃成16個中方格，作白細(xì)胞計數(shù)用；中央1 大方格則用雙線劃成25 個小中方格，每個小中方格又用單線劃成 16 個小格，總計為400 個小格。大方格每邊長的誤差是+-1%；蓋片與計數(shù)池面之距離誤差為+-2%。白細(xì)胞蓋片：這是特制的血細(xì)胞計數(shù)用蓋片，要求表面光滑平整，兩面平整度為以內(nèi)，有一定重量，不被血細(xì)胞懸液浮起。

3、其厚度應(yīng)為一，通常大小為24X20X。蓋片是否平整，可用光波干涉現(xiàn)象進(jìn)行鑒定。其方法是：將蓋片擦凈后，平整放在標(biāo)準(zhǔn)平面平晶上，用日光燈照射，觀察在平面平晶上所見到的干涉條紋，判斷其是否合格。蓋片在使用前應(yīng)當(dāng)用干凈、柔軟的吸水纖維制品拭凈，特別注意勿讓手接觸使其污染，否則充液時易產(chǎn)生氣泡。操作取小試管（12X75mm 一支，加白細(xì)胞稀釋液。采指血 20ul ，吸入稀釋液中，混勻。用小滴管或點(diǎn)眼棒取少量混懸液，滴入計數(shù)池中，靜止2 3min.用低倍鏡計數(shù)四角大方格的白細(xì)胞。計數(shù)時應(yīng)按一定順序，對壓線的白細(xì)胞應(yīng)按數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則計數(shù)。計算白細(xì)胞/L=四大方格白細(xì)胞數(shù)（ND /4X10X1

4、0 6X20=NX 5/100 X 10 9=N/20X 10 9/L式中： 1/4 標(biāo)示平均一大方格中白細(xì)胞數(shù)。X10表示10大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)。x 10 6表示1升稀釋液中白細(xì)胞數(shù)。x 20為稀釋倍數(shù)。血小板顯微鏡計數(shù)原理利用能保護(hù)血小板的稀釋液， 將血液稀釋一定倍數(shù)， 滴入計數(shù)池， 計數(shù)一定范圍內(nèi)血小板數(shù)，即可換算成每升血中血小板數(shù)。稀釋液草酸銨稀釋液草酸銨EDTA-Na2蒸餾水加至配好后用數(shù)層濾紙過濾，清亮后使用。此液對紅細(xì)胞破壞力較強(qiáng)， 血小板形態(tài)清楚。但只加草酸鏤，不加 EDTAa,則易產(chǎn)生草酸鈣結(jié)晶。許汝和式稀釋液尿素（AR或GR檸檬酸鈉甲醛溶液蒸餾水 加至混合后過濾即可備用。此稀

5、釋液破壞紅細(xì)胞完全，視野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室溫升高和保存過久而失效。一般只能使用 10d ， 4 攝氏度冰箱中保存，可稍延長使用期。一次配量不宜過多。歸納血小板稀釋液的成分包括抗凝劑，如檸檬酸鹽、 EDTA 鹽等；固定防腐劑，如甲醛等；溶血劑，如尿素、草酸銨等，以及等滲劑等。一種好的稀釋液應(yīng)具備： （ 1）能有效地防止血液凝固； （ 2）迅速固定血小板，防止其聚集和形態(tài)改變； （ 3 ）要求紅細(xì)胞破壞完全；（ 4）組成簡單，易保存，不生長細(xì)菌。操作取稀釋液，采末梢血 20ul 加入稀釋液中，混勻，靜置10min 左右?；靹蚝笕〕錾僭S滴入計數(shù)池，在溫室中靜置10 15min 。

6、在顯微鏡下（低倍或高倍）計數(shù)中央大方格中 5 個小中方格（與紅細(xì)胞同）的血小板數(shù)。（四）5小中方格血小板數(shù)（N） X5X10X20X10 6=NX 10 9/L注意事項如血小板數(shù)過低，可計數(shù) 25個中方格中的血小板數(shù)，結(jié)果X200.凡影響紅白細(xì)胞計數(shù)的技術(shù)因素都應(yīng)注意。全部器材和稀釋液應(yīng)十分清潔。因為血小板形態(tài)不規(guī)則且細(xì)小，任何灰塵斑點(diǎn)都可給計數(shù)造成困難，甚至誤認(rèn)。刺入皮膚深度要適當(dāng)（2 3mm） , 血液應(yīng)自然流出，避免擠壓。動作要快，以防止血小板聚集。如和血常規(guī)一起做，應(yīng)先采血小板計數(shù)用血。因血小板易聚集，所以滴入計數(shù)池之前應(yīng)充分混勻，但又不能用力過度，以防止破壞血小板。血小板在計數(shù)池中，完全下沉后方可計數(shù)。沉積時間短，結(jié)果偏低。但過長，計數(shù)池中稀釋液容易蒸發(fā)，尤其是夏季。所以最好將計數(shù)板放入溫室中。用尿素稀釋液，一般應(yīng)在 1h 內(nèi)計數(shù)完畢，放置時間過長，計數(shù)結(jié)果偏低 .（六） 質(zhì)量控制血小板計數(shù)質(zhì)控較難，但應(yīng)按操作規(guī)程，并認(rèn)真參照注意事項，減少血小板聚集，破壞，排