《海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)》編制說明

1、海南省地方標(biāo)準(zhǔn)海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)編制說明（征求意見稿）海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院2022年6月12日海南省地方標(biāo)準(zhǔn)海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)編制說明一、標(biāo)準(zhǔn)制訂的背景和意義海南長(zhǎng)臀鮠Cranoglanis bouderius multiradiatus(Koller,1926)，俗稱白骨魚、骨魚，隸屬于鮎形目(Silurformes)，長(zhǎng)臀鮠科(Cranoglanididae)，長(zhǎng)臀鮠屬(Cranoglanis)，是一種底層魚類。主要分布于海南省的南渡江、昌化江水系、松濤水庫(kù)、大王嶺水庫(kù)等地，是海南淡水土著魚類之一，其肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有很高的食用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來由于過度捕撈、水體污染等原因，加之其分布

2、范圍較窄、總體資源量低等因素，海南長(zhǎng)臀鮠的野生資源量急劇下降，在其原有棲息地已很難捕捉到，目前僅在南渡江龍?zhí)炼?、新坡段、南豐水庫(kù)和大王嶺水庫(kù)等區(qū)域有少量分布，其種群數(shù)量已經(jīng)非常稀少。為了保護(hù)這一海南特有淡水土著魚類，先后有省內(nèi)外的多個(gè)科研機(jī)構(gòu)對(duì)其進(jìn)行育苗攻關(guān)，有突破但均未能量產(chǎn)。當(dāng)前，海南長(zhǎng)臀鮠的保護(hù)仍處于初級(jí)階段，基礎(chǔ)研究滯后、育苗難關(guān)尚未突破、棲息地被破壞，對(duì)其進(jìn)行保護(hù)已迫在眉睫。目前我國(guó)發(fā)布的關(guān)于魚類種質(zhì)的省級(jí)標(biāo)準(zhǔn)共有 10項(xiàng)，大多集中于一些主養(yǎng)經(jīng)濟(jì)品種，如鞍帶石斑魚、斜帶石斑魚、云紋石斑魚等，土著種類沒有，經(jīng)查目前國(guó)標(biāo)和地標(biāo)均未發(fā)布任何有關(guān)于海南長(zhǎng)臀鮠的標(biāo)準(zhǔn)。因此，制訂海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)標(biāo)

3、準(zhǔn)已刻不容緩。本標(biāo)準(zhǔn)從海南長(zhǎng)臀鮠的外部形態(tài)特征、生長(zhǎng)與繁殖特性、遺傳學(xué)特性（染色體、DNA條形碼）、檢驗(yàn)方法等方面入手制訂相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，旨在貫徹農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系建設(shè)的要求，建立相應(yīng)的海南長(zhǎng)臀鮠的種質(zhì)鑒定標(biāo)準(zhǔn)，可為海南長(zhǎng)臀鮠的引種、開發(fā)、增殖放流等提供判定標(biāo)準(zhǔn)，研究成果對(duì)海南長(zhǎng)臀鮠資源的合理保護(hù)與利用，確保海南淡水土著魚類種質(zhì)資源的保護(hù)與可持續(xù)發(fā)展，具有重要的意義。二、標(biāo)準(zhǔn)編制過程（一）任務(wù)來源海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)是由海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院提出申請(qǐng)，2021年8月9日，經(jīng)海南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳和海南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局審查批準(zhǔn)，編制任務(wù)列入 2021年第二批海南省地方標(biāo)準(zhǔn)制修定項(xiàng)目計(jì)劃，項(xiàng)目編號(hào)為 2021-Z

4、036，立項(xiàng)文件見海南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)海南省 2021年第二批地方標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目計(jì)劃的通知。擬在12個(gè)月內(nèi)完成海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的制訂工作，為了加強(qiáng)本標(biāo)準(zhǔn)的研究制定工作，更好地完成標(biāo)準(zhǔn)的起草任務(wù)，本單位參照海南省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 46/ T74-2021地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作程序，制定項(xiàng)目實(shí)施方案，并將按實(shí)施方案開展標(biāo)準(zhǔn)起草工作。（二）成立標(biāo)準(zhǔn)起草小組為了更好的完成海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的編制任務(wù)，海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究所從本所抽調(diào)長(zhǎng)期從事水生生物資源調(diào)查、水產(chǎn)技術(shù)研發(fā)的科研人員參與實(shí)施，組建了標(biāo)準(zhǔn)編制小組，對(duì)任務(wù)進(jìn)行了分解和明確的分工。主要起草人及其所做的工作如下：申志新：項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和

5、第一起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)的申報(bào)、組織實(shí)施、標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容設(shè)計(jì)、標(biāo)準(zhǔn)草案起草及征求意見等工作。董楊：主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容設(shè)計(jì)、方案的實(shí)施和開展具體的試驗(yàn)等工作。蔡杏偉：主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)中魚類形態(tài)測(cè)定，協(xié)助起草標(biāo)準(zhǔn)等工作。張清鳳：主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)中DNA含量和條形碼測(cè)定，協(xié)助起草標(biāo)準(zhǔn)等工作。王吉：主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)中性狀測(cè)定、繁殖性能測(cè)定，協(xié)助起草標(biāo)準(zhǔn)等工作。李芳遠(yuǎn)：主要起草人，協(xié)助制定項(xiàng)目實(shí)施方案，協(xié)助起草標(biāo)準(zhǔn)等工作等。王世鋒：主要起草人，負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)中染色體的測(cè)定。李高?。褐饕鸩萑?，協(xié)助制定項(xiàng)目實(shí)施方案，協(xié)助魚樣的收集、鑒定等。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB-T1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則給出

6、的規(guī)則進(jìn)行起草，標(biāo)準(zhǔn)起草小組查閱了有關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行了充分的調(diào)查研究，在此基礎(chǔ)上形成了海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的征求意見稿。（三）標(biāo)準(zhǔn)文稿編制的主要工作過程1.編寫標(biāo)準(zhǔn)前，海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究所已在海南長(zhǎng)臀鮠的資源調(diào)查、馴養(yǎng)、保種等方面進(jìn)行了3年的研究，積累了海南長(zhǎng)臀鮠棲息地環(huán)境、基礎(chǔ)生物學(xué)數(shù)據(jù)、生長(zhǎng)等大量的背景資料。在2021年申報(bào)之初即選調(diào)相關(guān)人員成立了專門的標(biāo)準(zhǔn)起草小組，經(jīng)過多次開會(huì)，反復(fù)研討，最終確定了標(biāo)準(zhǔn)的基本編制思路和內(nèi)容，制定工作計(jì)劃，明確了人員分工，落實(shí)了實(shí)施方案。2.查閱和學(xué)習(xí)相關(guān)政策和文獻(xiàn)，收集了與水產(chǎn)種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，包括DB37T 2290-2013半滑舌鰨（種質(zhì)）、DB5

7、2T 1114-2016貴州省昆明裂腹魚種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、DB42T 1595-2020中華沙塘鱧種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)等標(biāo)準(zhǔn)，以及GB/T 1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則、GB/T 18654養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn)國(guó)家和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部有關(guān)質(zhì)量管理規(guī)定、產(chǎn)業(yè)政策等素材。3.標(biāo)準(zhǔn)起草小組按照既定工作計(jì)劃，開展了深入的調(diào)查，數(shù)據(jù)測(cè)量、分析、檢測(cè)等方面的工作，完成了海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)草案稿，并且征求了淡水土著魚類保育、種質(zhì)鑒定等研究方向的相關(guān)科研人員的意見，在查閱了近五年來國(guó)家或地方有關(guān)魚類種質(zhì)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，合理設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)的框架結(jié)構(gòu)，在聽取各方面意見建議的基礎(chǔ)上確定了標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)內(nèi)容，于2022年6月形成了標(biāo)準(zhǔn)的征求意見稿和編制說明。三、

8、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的論據(jù)1.標(biāo)準(zhǔn)編制的原則水生生物種質(zhì)資源是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要基礎(chǔ)。世界各國(guó)都對(duì)其很重視，紛紛出臺(tái)規(guī)定和開展相關(guān)領(lǐng)域的研究。我國(guó)自上世紀(jì)80年代以來開始淡水魚類種質(zhì)資源的研究，先后建立種質(zhì)資源保護(hù)區(qū)、種質(zhì)資源庫(kù)并開展了水產(chǎn)種質(zhì)資源的調(diào)查，同時(shí)開展了相關(guān)養(yǎng)殖魚類種質(zhì)的鑒定技術(shù)、出臺(tái)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，取得了一定的成果。但對(duì)野生魚類的種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的制訂相對(duì)滯后，因此本標(biāo)準(zhǔn)編制的主要原則，首先是要填補(bǔ)海南長(zhǎng)臀鮠這一物種種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的空白；其次是本標(biāo)準(zhǔn)要能夠比較全面的反映近年來我國(guó)在海南長(zhǎng)臀鮠方面的研究成果；最后是標(biāo)準(zhǔn)的可操作性，使用者可以通過本標(biāo)準(zhǔn)所列的各項(xiàng)數(shù)據(jù)，對(duì)海南長(zhǎng)臀鮠種質(zhì)資源

9、進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。本標(biāo)準(zhǔn)的制訂是依托編寫團(tuán)隊(duì)近5年來在海南長(zhǎng)臀鮠資源調(diào)查、生活史、生物學(xué)習(xí)性、馴養(yǎng)保種等方面取得的研究成果，在充分查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，借鑒和參考國(guó)內(nèi)其它魚類種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的編寫格式和內(nèi)容而制定。本標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照 GB/T 1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的技術(shù)要求進(jìn)行了編制起草，包括（1）范圍、（2）規(guī)范性引用文件、（3）術(shù)語和定語、（4）學(xué)名與分類、（5）分布與生態(tài)習(xí)性、（6）主要形態(tài)構(gòu)造特征；（7）生長(zhǎng)和繁殖、（8）肌肉生化組分和主要氨基酸組成、（9）遺傳學(xué)特性；（10）規(guī)范性附錄（檢測(cè)方法），共10部分。2.確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)主

10、要包括四個(gè)方面的內(nèi)容，一是海南長(zhǎng)臀鮠主要形態(tài)構(gòu)造特征，包括外部形態(tài)描述，鰭式、須等可數(shù)性狀，全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體高等可量性狀方面的形態(tài)學(xué)分類依據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)；二是生長(zhǎng)和繁殖特征，包括體長(zhǎng)與體重的關(guān)系、繁殖生物學(xué)基本數(shù)據(jù)等；三是肌肉生化組分和主要氨基酸組成，包括魚肉中粗蛋白、粗脂肪等常規(guī)成分以及氨基酸種類和質(zhì)量；四是遺傳學(xué)特性，包括染色體數(shù)目、核型分析和線粒體COI基因。本標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定了野生海南長(zhǎng)臀鮠染色體數(shù)目、臂數(shù)、核型和DNA條形碼靶基因，以此作為其種質(zhì)判定的依據(jù)。標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容主要依據(jù)編制小組對(duì)從南渡江采集的野生海南長(zhǎng)臀鮠的各項(xiàng)測(cè)量、檢測(cè)與理化分析的結(jié)果，同時(shí)也研究、參照和對(duì)比了其他學(xué)者對(duì)海南長(zhǎng)臀鮠的形態(tài)特征、

11、細(xì)胞遺傳學(xué)特征等方面的研究成果。2.1物種分類參考相關(guān)魚類分類學(xué)書籍，根據(jù)其外部形態(tài)給予分類。2.2分布與生態(tài)習(xí)性根據(jù)魚類資源調(diào)查的結(jié)果，參考相關(guān)文獻(xiàn)，以及保種馴養(yǎng)過程中的觀察、試驗(yàn)，初步分析和總結(jié)出其分布與生態(tài)習(xí)性。2.3外部形態(tài)、可數(shù)性狀、可量性狀特征的描述2.3.1外部形態(tài)根據(jù)海南長(zhǎng)臀鮠的外部形態(tài)特征，按照魚類外形描述的通用規(guī)則，如外形、口位、須等采用規(guī)范化的語言和格式進(jìn)行描述。2.3.2可數(shù)性狀和可量性狀根據(jù)GB/T 18654.1-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第1部分：檢驗(yàn)規(guī)則、GB/T 18654.2-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第2部分：抽樣方法、GB/T 18654.3-2008養(yǎng)

12、殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第3部分：性狀測(cè)定的相關(guān)要求，采集海南長(zhǎng)臀鮠的活體樣本進(jìn)行鰭式、鰓耙數(shù)等可數(shù)性狀的計(jì)數(shù)和體長(zhǎng)、體高、體寬、眼徑、尾柄長(zhǎng)等各項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)的測(cè)量，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與統(tǒng)計(jì)，獲得相關(guān)統(tǒng)計(jì)結(jié)果。2.4生長(zhǎng)與繁殖特性根據(jù)GB/T 18654.4-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第4部分：年齡與生長(zhǎng)的測(cè)定和GB/T 18654.6-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第6部分：繁殖性能的測(cè)定的相關(guān)要求，采集海南長(zhǎng)臀鮠活體樣本，進(jìn)行計(jì)數(shù)、測(cè)量和解剖，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獲得最終統(tǒng)計(jì)結(jié)果。2.5肌肉生化組分和主要氨基酸組成根據(jù)GBT 18654.10-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第10部分：肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定、GB

13、T 18654.11-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第11部分：肌肉中主要氨基酸含量的測(cè)定的相關(guān)要求，采集海南長(zhǎng)臀鮠活體樣本，進(jìn)行檢測(cè)。2.6細(xì)胞遺傳學(xué)特性按照GBT 18654.12-2008養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn) 第12部分：染色體組型分析的方法，參考海南長(zhǎng)臀鮠和其它鯉科魚類染色體分析的相關(guān)文獻(xiàn)，采集海南長(zhǎng)臀鮠樣本，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。2.7分子遺傳學(xué)特性參考海南長(zhǎng)臀鮠和其它鯉科魚類有關(guān)線粒體CO基因分析的相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)給出的方法，采集海南長(zhǎng)臀鮠樣本進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。3.主要編制內(nèi)容分析3.1分類地位海南長(zhǎng)臀鮠Cranoglanis bouderius multiradiatus(Koller,19

14、26)，俗稱白骨魚、骨魚，隸屬于鮎形目(Silurformes)，長(zhǎng)臀鮠科(Cranoglanididae)，長(zhǎng)臀鮠屬(Cranoglanis)，是一種底層魚類。3.2分布與生態(tài)習(xí)性根據(jù)近年來海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院開展的南渡江、昌化江、萬泉河魚類資源調(diào)查和海南長(zhǎng)臀鮠及其生境專項(xiàng)調(diào)查，參考相關(guān)文獻(xiàn)，可知在我國(guó)海南長(zhǎng)臀鮠主要分布在南渡江的龍?zhí)?、新坡、儋州的松濤水?kù)、大王嶺水庫(kù)和昌化江的部分水域。主要棲息于河流中下層區(qū)域，常棲息于江河、水庫(kù)底層的石縫或坑中。肉食性，以淡水雙殼貝類、小魚蝦等為食。3.3外部形態(tài)特征頭胸部較粗，腹部和尾部側(cè)扁。體色為銀灰色、黑褐色，體色從背部至腹鰭基部逐漸變淡，腹部白色

15、，各鰭均呈灰色。頭部較大而尖長(zhǎng)。口中大、前位、弧形、上頜比下頜稍長(zhǎng)。有4對(duì)須，鼻須1對(duì)，可達(dá)眼后緣；上頜須1對(duì)，可達(dá)胸鰭基部；頦須2對(duì)，外須較長(zhǎng)，可達(dá)胸鰭基部，內(nèi)須較短，可達(dá)眼中部下方。眼中等大，側(cè)上位。背部稍隆起，具背鰭和脂鰭各1個(gè)，背鰭較短小，具較長(zhǎng)的鋸齒狀硬棘，起點(diǎn)位于胸鰭起點(diǎn)之后。脂鰭較小，后端游離。腹部平坦，胸鰭和臀鰭各具鋸齒狀硬棘，胸鰭末端可伸達(dá)腹鰭，肛門起點(diǎn)位于臀鰭起點(diǎn)前方。臀鰭基長(zhǎng)，不與尾鰭相連；尾鰭叉形，上下葉幾乎齊平。海南長(zhǎng)臀鮠的外部形態(tài)見圖1。圖1 海南長(zhǎng)臀鮠外部形態(tài)（成魚）3.4可數(shù)性狀海南長(zhǎng)臀鮠的可數(shù)性狀在海南島淡水及河口魚類志、廣東淡水魚類志等書中均有描述。本標(biāo)準(zhǔn)在

16、編寫過程中，根據(jù)對(duì)大量海南長(zhǎng)臀鮠樣本的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)與上述文獻(xiàn)的描述進(jìn)行了對(duì)比與驗(yàn)證，實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)均處于上述文獻(xiàn)數(shù)據(jù)的范圍內(nèi)，因此以實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，采用文獻(xiàn)中描述的相關(guān)數(shù)據(jù)作為標(biāo)準(zhǔn)的生物學(xué)數(shù)據(jù)。即背鰭-6，胸鰭-910，腹鰭1-11，臀鰭3-3335，鰓耙數(shù)1718。3.5可量性狀2021年2022年采集南渡江龍?zhí)炼魏唾僦荽笸鯉X水庫(kù)的野生海南長(zhǎng)臀鮠30尾作為樣本對(duì)其的體長(zhǎng)、體高、體寬、眼徑、頭長(zhǎng)、眼間距、尾柄長(zhǎng)、尾柄高等進(jìn)行了測(cè)量，測(cè)量公具為游標(biāo)卡尺（精確度為0.01mm），魚樣規(guī)格為體長(zhǎng)105mm367mm、體重18.4g1020g。經(jīng)過測(cè)量和計(jì)算得出以下數(shù)據(jù)，海南長(zhǎng)臀鮠體長(zhǎng)為體高的3.640.31倍

17、，為頭長(zhǎng)的3.800.38倍，為尾柄長(zhǎng)的12.886.38倍，為尾柄高的11.201.25倍，頭長(zhǎng)為吻長(zhǎng)的2.330.23倍，為眼徑的4.471.50倍，為眼間距的2.681.03倍，尾柄長(zhǎng)為尾柄高約為1.060.43倍左右。3.6內(nèi)部構(gòu)造通過解剖海南長(zhǎng)臀鮠可很直觀的對(duì)其內(nèi)部構(gòu)造進(jìn)行描述。鰾呈心形，3室，分前室、左后室和右后室，前室分別與兩個(gè)后室相連，但兩個(gè)后室之間不連通。腹膜為暗灰色。3.7生長(zhǎng)與繁殖3.7.1生長(zhǎng)從野外搜集野生海南長(zhǎng)臀鮠中隨機(jī)抽取30尾作為本標(biāo)準(zhǔn)制定的研究對(duì)象。體長(zhǎng)范圍105mm367mm、體重18.4g1020g，進(jìn)行了詳細(xì)的生物學(xué)測(cè)定，用游標(biāo)卡尺和電子秤測(cè)量每個(gè)樣本的全

18、長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重、體高等多項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)。對(duì)體長(zhǎng)與體重的參數(shù)進(jìn)行線性回歸方程式的構(gòu)建，海南長(zhǎng)臀鮠體重（W）與體長(zhǎng)(L)關(guān)系式見：W= 0.0062L3.38，R = 0.9945式中，W-體重，單位為克（g）；L-體長(zhǎng)，單位為厘米（cm）；圖2 海南長(zhǎng)臀鮠（廣東淡水魚類志 P296）外形測(cè)量示意圖3.7.2繁殖自然條件下，3齡初次性成熟。繁殖期為每年的5月至10月。繁殖高峰期在67月，性腺每年成熟1次，卵巢發(fā)育為非同步型，1次產(chǎn)卵，卵具粘性。精巢呈樹枝狀。性成熟海南長(zhǎng)臀鮠的性腺見圖3，3+以后的個(gè)體相對(duì)繁殖力為10.4粒/g體重14.2粒/g體重，卵徑為0.81.2mm。 圖3 性成熟海南長(zhǎng)臀鮠的性

19、腺（左側(cè)為精巢，右側(cè)為卵巢）3.78肌肉生化組分和主要氨基酸組成長(zhǎng)臀鮠的肌肉生化組分和主要氨基酸組成在張竹青等所發(fā)表的長(zhǎng)臀鮠含肉率及肌肉營(yíng)養(yǎng)成分分析、長(zhǎng)臀鮠肌肉脂肪酸組成分析的論文中有描述，但其所用的樣本為珠江采集的長(zhǎng)臀鮠群體，據(jù)分析應(yīng)該是珠江長(zhǎng)臀鮠，海南長(zhǎng)臀鮠的肌肉營(yíng)養(yǎng)分析尚未有論文發(fā)表。本標(biāo)準(zhǔn)在編寫過程中，從南渡江流域采集野生海南長(zhǎng)臀鮠的肌肉檢測(cè)其基本營(yíng)養(yǎng)成分，所測(cè)數(shù)據(jù)與珠江長(zhǎng)臀鮠相比有明顯差異。以實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)作為本標(biāo)準(zhǔn)中所用數(shù)據(jù)。經(jīng)檢測(cè)野生海南長(zhǎng)臀鮠每100g肌肉中的生化組分質(zhì)量為粗蛋白質(zhì)15.2g，粗脂肪1.1g，粗灰分1.05g，水分82.8g。每100g肌肉中的氨基酸總質(zhì)量為14.55

20、g，其中天門冬氨酸的含量為1.63g，異亮氨酸的含量為0.74g，蘇氨酸的含量為0.7g，亮氨酸的含量為1.26g，絲氨酸的含量為0.63g，酪氨酸的含量為0.62g，谷氨酸的含量為2.45g，苯丙氨酸的含量為0.64g，甘氨酸的含量為0.68g，賴氨酸的含量為1.47g，丙氨酸的含量為0.88g，組氨酸的含量為0.35g，精氨酸的含量為0.93g，纈氨酸的含量為0.71g，脯氨酸的含量為0.4g，蛋氨酸的含量為0.45g。3.8細(xì)胞遺傳學(xué)特征染色體核型分析參考珠江水產(chǎn)研究所分析的長(zhǎng)臀鮠染色體核型，以及萬全等的長(zhǎng)吻鮠染色體組型分析制備長(zhǎng)吻鮠的染色體標(biāo)本。向?qū)嶒?yàn)魚腹腔內(nèi)注射PHA溶液，在效應(yīng)時(shí)間

21、內(nèi)注射秋水仙素，取樣，固定，染色體滴片，Giemsa染色，空氣法干燥，放置于玻片盒中室溫保存, 用于后續(xù)研究。染色體標(biāo)本經(jīng)Giemsa染液染色后，置于顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍照。選取來自不同個(gè)體的120個(gè)分散良好的中期分裂相，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后確定長(zhǎng)臀鮠二倍體的染色體數(shù)目。選取多個(gè)數(shù)目完整、形態(tài)清晰、分散良好、長(zhǎng)度適中、著絲點(diǎn)清楚、兩條單體適度分開的分裂相進(jìn)行顯微攝相和測(cè)量。計(jì)算其相對(duì)長(zhǎng)度和臂比等，并按LEVAN提出的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類、配對(duì)和核型圖。3.8.1二倍體染色體數(shù)目對(duì)長(zhǎng)臀鮠120個(gè)分散良好的中期分裂進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)結(jié)果表明 (表1)，長(zhǎng)臀鮠中77.50%的中期分裂相的二倍體染色體

22、數(shù)目為76，由此可以判定長(zhǎng)臀鮠二倍體染色體數(shù)目為76。表1 海南長(zhǎng)臀鮠二倍體染色體計(jì)數(shù)結(jié)果染色體數(shù)目(2n)737475767778合計(jì)分裂相數(shù)目34129371120所占百分比（%）2.503.3310.0077.505.830.831003.8.2染色體核型分析選取形態(tài)清晰，著絲點(diǎn)易辨的中期分裂相進(jìn)行觀察、測(cè)量和統(tǒng)計(jì)分析，獲得長(zhǎng)臀鮠染色體相對(duì)長(zhǎng)度和臂比，結(jié)果見表2，長(zhǎng)臀鮠染色體組由2對(duì)中部著絲粒染色體，7對(duì)亞中部著絲粒染色體，7對(duì)亞端部著絲粒染色體和22對(duì)端部著絲粒染色體構(gòu)成, 其核型公式為2n=4m+14sm+14st+44t, 染色體臂數(shù)(NF)為94. 根據(jù)測(cè)量結(jié)果并結(jié)合形態(tài)相似性分

23、析，構(gòu)建了長(zhǎng)臀鮠的染色體核型 (圖4)。表2 海南長(zhǎng)臀鮠的相對(duì)長(zhǎng)度和臂比編號(hào)相對(duì)長(zhǎng)度臂比類型編號(hào)相對(duì)長(zhǎng)度臂比類型13.080.371.690.10M203.180.080T22.380.121.540.18M213.050.0633.650.222.750.34SM222.960.060T43.460.112.370.28SM232.850.060T53.090.242.370.30SM242.740.070T62.580.112.730.23SM252.660.050T72.370.052.410.18SM262.620.060T82.270.052.360.25SM272.600.050T

24、91.860.182.260.33SM282.570.060T103.500.155.290.33ST292.500.050T113.050.143.910.26ST302.450.050T122.780.044.950.35ST312.370.040T132.590.113.320.09ST322.270.030T142.450.133.770.32ST332.180.040T152.250.163.490.38ST342.130.020T162.040.133.420.26ST352.000.030T173.990.050T361.830.020T183.450.160T371.560.1

25、40T193.360.200T381.290.240T 圖4 海南長(zhǎng)臀鮠中期分裂相(a)及染色體核型(b)3.9分子遺傳學(xué)特征DNA條形碼分析（CO基因）海南長(zhǎng)臀鮠線粒體CO基因序列分析方法3.9.1 DNA 提取 取魚鰭組織，盡量剪碎，用試劑盒的方法提取基因組DNA，溶解后-20保存?zhèn)溆谩?.9.2 PCR擴(kuò)增上游引物：5-TTCTCCACCAACCACAARGAYATYGG-3；下游引物：5-CACCTCAGGGTGTCCGAARAAYCARAA-3。擴(kuò)增反應(yīng)條件：反應(yīng)體系為50L, 其中Takara公司Premix Taq 25L,10mol/L的引物2L，DNA模板50ng，無菌ddH

26、2O補(bǔ)足50L。擴(kuò)增條件為：94變性3 min,一個(gè)循環(huán)，94變性30 s, 60退火30 s, 72延伸45 s, 35個(gè)循環(huán); 72 延伸 10 min，4保存。3.9.3序列測(cè)定 PCR產(chǎn)物經(jīng)回收純化后，在DNA測(cè)序儀上測(cè)序；為保證測(cè)序的可靠性和準(zhǔn)確性，采用雙向測(cè)序，并進(jìn)行人工核對(duì)、校正。3.9.4結(jié)果計(jì)算序列歧異度(D)按下式計(jì)算D=序列內(nèi)變異堿基數(shù)/序列堿基總數(shù)以線粒體COI基因作為海南長(zhǎng)臀鮠DNA條形碼靶基因，全序列共631個(gè)堿基，堿基組成比例為25.7% A; 28.1% C; 17.1% G; 29.2% T。經(jīng)檢測(cè)海南長(zhǎng)臀鮠種內(nèi)的序列歧異度D0.5%，與種間的同源序列差異極顯著（p0.01），海南長(zhǎng)臀鮠DNA條形碼序列如下：1 TGAGCCGGATAGTTGGCACAGCTCTTAGCCTACTAATTCGAGCAGAGCTAGCCCAACCTG 6061 GGGCCCTCTTAGGTGATGATCAGATTTACAATGTTATTGTTACTGCTCATGC