基質(zhì)金屬蛋白酶

1、基質(zhì)金屬蛋白酶【關(guān)鍵詞】腸腫瘤；基質(zhì)金屬蛋白酶；腫瘤壞死因子受體EffetsfatrixetallprtEinase9ntheexpressinfturnersisfatrreeptr1inhuanlnarinaelllines【Keyrds】intestinalneplass;atrixetallprteinase;TNFR【摘要】目的：研究基質(zhì)金屬蛋白酶9P9對(duì)大腸癌細(xì)胞腫瘤壞死因子受體1TNFR1表達(dá)的影響以及促進(jìn)大腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的可能途徑.方法：通過(guò)免疫熒光法研究TNFR1在大腸癌細(xì)胞S1116中的表達(dá)；用P9干預(yù)培養(yǎng)的大腸癌S1116細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P9不同劑量和不同作用時(shí)間時(shí)

2、TNFR1表達(dá)變化.結(jié)果：S1116細(xì)胞表達(dá)TNFR1;P9對(duì)S1116細(xì)胞外表TNFR1表達(dá)有下調(diào)作用，但有劑量和時(shí)間依賴性.結(jié)論：P9下調(diào)大腸癌細(xì)胞外表TNFR1的表達(dá)，可能與大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移親密相關(guān).【關(guān)鍵詞】腸腫瘤；基質(zhì)金屬蛋白酶；腫瘤壞死因子受體0引言腫瘤壞死因子(turnersisfatr,TNF)是一種主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的多肽細(xì)胞因子，因其在內(nèi)毒素處理后具有殺傷腫瘤細(xì)胞的作用而被命名為腫瘤壞死因子.TNF的生物學(xué)活性是通過(guò)存在于細(xì)胞外表的膜受體,即腫瘤壞死因子受體1(turnersisfatrreeptr1,TNFR1)和腫瘤壞死因子受體2(turnersisfatrreept

3、r2,TNFR2)介導(dǎo).體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)已證實(shí)腫瘤壞死因子受體turnersisfatrreeptr,TNFR介導(dǎo)腫瘤壞死因子的腫瘤殺傷作用，體內(nèi)有多種免疫活性因子干擾素、白介素等即通過(guò)激活上調(diào)TNFR以到達(dá)去除腫瘤的目的1,因此誘導(dǎo)并穩(wěn)定腫瘤細(xì)胞膜TNFR對(duì)機(jī)體抗腫瘤起非常重要的作用.其他研究還證實(shí)大腸癌組織中存在基質(zhì)金屬蛋白酶atrixetallprteinase，Ps高表達(dá)或活性增強(qiáng)現(xiàn)象.某些活性基質(zhì)金屬蛋白酶可能通過(guò)酶解作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞膜TNFR的釋放形成高程度的可溶性腫瘤壞死因子受體2slubleturnersisfatrreeptr，sTNFR，是腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的重要方式.本研究通

4、過(guò)檢測(cè)TNFR1在腫瘤細(xì)胞膜的表達(dá)及P9對(duì)腫瘤細(xì)胞膜TNFR1表達(dá)的影響，討論P(yáng)9通過(guò)調(diào)節(jié)TNFR1促進(jìn)大腸癌轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制.1材料和方法1.1材料大腸癌細(xì)胞株S1116由南方醫(yī)院消化科實(shí)驗(yàn)室保存；小牛血清杭州四季青生物制品研究所；RPI1640培養(yǎng)液，青、鏈雙抗，2.5g/L胰酶廣州威佳生物試劑公司；鼠抗人TNFR1單克隆抗體Santaruz公司；FIT標(biāo)記的羊抗鼠二抗武漢博士德公司；熒光素異硫氰酸鹽FIT標(biāo)記的鼠抗人TNFR1單克隆抗體及重組人P9購(gòu)自美國(guó)RD公司；FIT標(biāo)記的鼠IgG1對(duì)照抗體北京鼎國(guó)生物.1.2主要儀器倒置、相差顯微鏡lypas公司；流式細(xì)胞儀BETNDIKINSN公司

5、.1.3方法2結(jié)果2.1免疫熒光染色結(jié)果TNFR1在S1116細(xì)胞膜呈較強(qiáng)熒光，對(duì)照組無(wú)表達(dá)(圖1).A:S1116細(xì)胞；B:陰性對(duì)照.圖1TNFR1在S1116細(xì)胞的表達(dá)2.2不同濃度P9作用后對(duì)TNFR1表達(dá)的影響流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，在不同的濃度作用3h后，與P90ng/L組(表達(dá)率90.92%)比擬，P9770ng/L組表達(dá)率69.96%，P91155ng/L組(表達(dá)率65.06%)TNFR1表達(dá)程度明顯降低P0.05；P9154ng/L組表達(dá)率85.05%，P9385ng/L組(表達(dá)率87.54%)與P90ng/L組相似P0.05；P9154ng/L組與P9385ng/L組TNFR1

6、表達(dá)程度明顯高于P9770ng/L和P91155ng/L組P0.05；P9154ng/L組與P9385ng/L組TNFR1表達(dá)程度相似P0.05；P9770ng/L組和P91155ng/L間TNFR1表達(dá)程度相似P0.05，圖2.2.2P9作用不同時(shí)間后對(duì)TNFR1表達(dá)的影響在P9770ng/L濃度，不同作用時(shí)間條件下，與0h組表達(dá)率86.36%比擬，3h表達(dá)率67.68%，6h表達(dá)率18.08%，9h表達(dá)率14.38%組TNFR1程度明顯降低P0.05；1.5h表達(dá)率83.88%組與0h組TNFR1程度相似P0.05；3h組TNFR1程度明顯高于6h和9h組P0.05；6h組與9h組TNFR

7、1程度相似P0.05，圖3.aP0.05vsA.3討論目前發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶在幾乎所有腫瘤組織中均存在高活性及高表達(dá).它不僅能降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的大部分成分，還參與釋放以前體形式結(jié)合于細(xì)胞膜上的多種細(xì)胞因子和/或生長(zhǎng)因子及生長(zhǎng)因子受體，成為近年來(lái)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的研究熱點(diǎn).實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示P9770ng/L組和1155ng/L組作用3h后TNFR1表達(dá)程度明顯低于對(duì)照組，而P9154ng/L組，P9385ng/L組與對(duì)照組無(wú)差異，考慮與劑量過(guò)低有關(guān)，同時(shí)也提示P9對(duì)大腸癌細(xì)胞外表TNFR1的表達(dá)的影響與劑量有一定的關(guān)系.當(dāng)P9劑量固定為770ng/L時(shí)，作用3，6，9h后TNFR1表達(dá)較對(duì)照組相

8、比明顯減少，但1.5h與對(duì)照組比擬無(wú)差異，可能與酶的最正確作用時(shí)間有關(guān).6h和9h組比擬無(wú)差異，考慮體外環(huán)境下，隨時(shí)間延長(zhǎng)酶已失活，提示P9對(duì)TNFR1表達(dá)的影響與酶的活性親密相關(guān).本研究說(shuō)明了，P9可以按照劑量、時(shí)間依賴的方式使大腸癌S1116細(xì)胞外表的TNFR1表達(dá)減少，可能是TNFR1經(jīng)P9水解后，其胞外區(qū)自胞膜脫落后形成sTNFR1.與Lbard8等研究發(fā)現(xiàn)人工合成的PIs和TIP2能以劑量依賴的方式減少細(xì)胞外表TNF受體的脫落相符.【參考文獻(xiàn)】1ilsnA,BrningJL.DeathfHT29adenarinaellsinduedbyTNFfailyreeptrativatinis

9、aspasEindependentanddisplaysfeaturesfbthapptsisandnersisJ.ellDeathDiffer,2002,9(12):1321-1333.2agenaarillerRA,GrdenL,atrisianL.atrixetallprteinasesinlretalaner:Isitrthtalkingabut?J.aneretastasisRev,2022,23(12):119-135.3henG,GeddelDV.TNFR1signaling:abeautifulpathayJ.Siene,2002,296(5573):1634-1635.4董偉

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