艾迪注射液抗腫瘤作用及其對(duì)免疫功能的增強(qiáng)效應(yīng)研究

1、艾迪注射液抗腫瘤作用及其對(duì)免疫功能的增強(qiáng)效應(yīng)研究潘耀振,余黎,李曉冬,柏帥【摘要】目的研究艾迪注射液抗腫瘤作用及其對(duì)免疫功能的增強(qiáng)效應(yīng)。方法利用小鼠體內(nèi)移植瘤H22肝癌整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头治霭献⑸湟旱囊至雎?。采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)荷瘤小鼠血清TNF-和IL-6的程度；分析艾迪注射液對(duì)胸腺和脾臟指數(shù)的影響，以碳粒廓清法分析艾迪注射液對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬才能。結(jié)果艾迪注射液對(duì)小鼠體內(nèi)移植瘤H22肝癌的抑瘤率高達(dá)30%以上，顯著進(jìn)步胸腺和脾臟指數(shù)、進(jìn)步血中TNF-和IL-6的程度，增強(qiáng)內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬才能。結(jié)論艾迪注射液對(duì)小鼠體內(nèi)移植瘤H22肝癌具有顯著的抑制作用，其機(jī)制可能與改善免疫系統(tǒng)的才能相

2、關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】艾迪注射液抗腫瘤免疫功能Abstrat:bjetiveTinvestigatetheantiturativityandiunregulatryeffetfAiDiinjetin.ethdsInhibitinrate(IR)nturgrthandindexesfthyusandspleeneredeterinedinieithtransplantabletursfH22.ThententsfTNF-andIL-6eredetetedbyELISAinserufieithtransplantabletursfH22,andthearbnpartilelearaneasusedtass

3、aythephagytifuntinfretiul-endtheliialsyste.ResultsAiDiinjetinsignifiantlyinreasedtheindexesfthyusandspleen,andenhanedntentsfTNF-andIL-6inseru,elevatedthephagytifuntinfretiul-endtheliialsyste,anditsIRasver30%.nlusinAiDiinjetinshsptentantitureffetinviv.PrtingiunativityaybeneftheantiturehanisfAiDiinjet

4、in.Keyrds:AiDiinjetin;Antitur;Iunativity放、化療在惡性腫瘤治療中占重要的地位，但是在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞也有較強(qiáng)的殺傷作用，患者往往無法承受同時(shí)帶來的骨髓、免疫、胃腸道等方面的不良反響，導(dǎo)致生存質(zhì)量嚴(yán)重下降。近年來，從傳統(tǒng)中醫(yī)藥寶庫中尋找新的抗腫瘤藥物或組方逐漸成為廣闊醫(yī)藥學(xué)科技工作者關(guān)注的問題1。艾迪注射液(簡(jiǎn)稱艾迪)由人參、刺五加、黃芪和斑蝥等制備而成，具有扶正驅(qū)邪、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。該藥物已經(jīng)上市，并被廣泛應(yīng)用于臨床，獲得了較為滿意的療效。本文主要研究艾迪注射液對(duì)H22荷瘤小鼠抑制腫瘤的作用，同時(shí)研究其對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響，為其臨

5、床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)根底與理論指導(dǎo)。1材料與方法1.1細(xì)胞株小鼠肝癌H22細(xì)胞株，購自上海中科院細(xì)胞研究所。1.2樣品及試劑艾迪注射液由貴州益佰制藥提供，10l/只，0.3015g(生藥)/l，成人50100l/次；1640培養(yǎng)基，Gib公司提供，批號(hào)1177845；新生小牛血清，Hylne公司提供，DQA194。小鼠TNF-，IL-6定量ELISA檢測(cè)試劑盒，大連泛邦生物技術(shù)提供。1.3動(dòng)物安康昆明種小鼠，體重1822g，均由南京江寧縣湯山青龍山動(dòng)物繁殖廠提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SXK蘇20020027。1.4對(duì)小鼠腋下接種H22腫瘤2取H22腫瘤細(xì)胞株用培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，取少許的細(xì)胞懸液加等量的0

6、.4%臺(tái)朌藍(lán)染液，顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)活細(xì)胞，計(jì)數(shù)后將懸液移入到25l培養(yǎng)瓶里，用含10%小牛血清的培養(yǎng)液按比例稀釋至1107/l。再將培養(yǎng)瓶放入溫度37，相對(duì)濕度100%，含5%2，95%空氣的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。給培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞換液1次/d，2d傳代1次。傳代2次，將培養(yǎng)液離心得到的腫瘤細(xì)胞，再稀釋成濃度為1107/l的細(xì)胞后，用無菌注射器接種到小鼠腹腔內(nèi)，0.2l/只。瘤株在動(dòng)物體內(nèi)傳代2次后，選擇接種8d腹部明顯膨大的動(dòng)物，頸椎脫臼，固定于蠟板上，無菌操作，抽吸腹水，將6只動(dòng)物的腹水混合。滴1滴腹水混合液于載玻片上，推片，瑞氏染色，鏡下進(jìn)展細(xì)胞分類記數(shù)，瘤細(xì)胞數(shù)95%。腹水用無菌PBS液

7、稀釋至1107個(gè)/l，每鼠右腋下接種0.2l細(xì)胞。1.5分組及給藥腫瘤接種24h后隨機(jī)分組，即：正常對(duì)照組(等容積蒸餾水)，模型組(等容積蒸餾水)、艾迪高劑量組(9.14g/kg)、艾迪中劑量組(4.57g/kg)、艾迪低劑量組(2.29g/kg)；每組10只。尾靜脈給藥1次/d，給藥容積為10l/kg，連續(xù)給藥7d。1.6抑瘤率實(shí)驗(yàn)3末次給藥后30in球后靜脈叢取血，處死小鼠，稱體重并剝離皮下瘤塊，稱瘤重，計(jì)算瘤指數(shù)與抑瘤率。抑瘤率(%)=(1-治療組平均瘤重/對(duì)照組平均瘤重)100%瘤指數(shù)=瘤重g/動(dòng)物體重g實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)1.7荷瘤成年鼠免疫器官臟器指數(shù)分析處死動(dòng)物，剖取胸腺和脾臟，按下式計(jì)算

8、臟器指數(shù)：臟器指數(shù)g/g=臟器重量(g)體重(g)101.8IL-6及TNF-分析對(duì)H22抑瘤率實(shí)驗(yàn)中獲得血液，2500r/in離心15in，別離制備血清。按檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)展檢測(cè)操作，制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液后，測(cè)定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照，得到含量。1.9對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬活性的作用4末次給藥后30in，尾靜脈注射印度墨汁用生理鹽水稀釋4倍0.1l/10g，注射后立即記時(shí)，于注射后3in和13in分別用肝素處理過的玻璃毛細(xì)管經(jīng)小鼠球后靜脈叢取血，取0.025l的血液參加含有0.1%Na232l的試管中，混勻。于721分光光度計(jì)600n處測(cè)定每個(gè)樣品的光密度值D，用0.1%Na23液做空白對(duì)照。末

9、次取血后，處死動(dòng)物，取出肝脾稱重，分別記錄。計(jì)算去除速度的K值：K=lgD1-lgD2/t2-t1計(jì)算吞噬指數(shù)：=體重/肝重+脾重K。式中t2-t1為兩次取血時(shí)間間隔；表示每克組織的吞噬活性。2結(jié)果2.1對(duì)H22荷瘤小鼠的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，艾迪注射液高劑量組抑瘤率為47.5%，與模型組比擬差異顯著(P0.01)，并呈一定的量-效關(guān)系。結(jié)果見表1。表1艾迪對(duì)小鼠H22的抑制作用略2.2對(duì)免疫器官的影響艾迪注射液連續(xù)給藥7d，脾臟與胸腺系數(shù)明顯增加，與模型組比擬差異顯著，提示艾迪對(duì)荷瘤小鼠的免疫功能可能有一定的增強(qiáng)作用。結(jié)果見表2。表2對(duì)小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響略2.3對(duì)免疫細(xì)胞因子的影響荷瘤小

10、鼠IL-6和TNF-的程度顯著降低，與正常對(duì)照組比擬差異顯著，給予艾迪注射液后，使降低的細(xì)胞因子升高，高劑量組作用更加明顯。結(jié)果見表3。表3復(fù)方斑蝥浸膏對(duì)小鼠IL-6和TNF-作用的影響略2.4對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬作用的影響荷瘤小鼠去除速度與吞噬指數(shù)明顯低于正常對(duì)照組，差異顯著；連續(xù)給予艾迪注射液7d顯著進(jìn)步荷瘤小鼠的去除速度與吞噬指數(shù)，高劑量組與荷瘤模型組比擬，差異顯著，中低劑量組具有增加的趨勢(shì)。提示艾迪注射液具有增強(qiáng)荷瘤小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)RES對(duì)吞噬功能的作用。結(jié)果見表4。表4復(fù)方斑蝥浸膏對(duì)荷瘤小鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬活性影響略3討論多年來的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察都說明，惡性腫瘤的發(fā)生、開展都伴隨有

11、機(jī)體免疫功能的降低，機(jī)體對(duì)抗腫瘤的免疫反響主要包括細(xì)胞免疫和體液免疫，兩者互相配合5。目前認(rèn)為在抗腫瘤細(xì)胞免疫機(jī)制中起主要作用的效應(yīng)細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等。胸腺是機(jī)體的中樞免疫器官，即免疫細(xì)胞產(chǎn)生、發(fā)育、分化、成熟的部位；脾是機(jī)體的外周淋巴器官，即成熟的淋巴細(xì)胞定居及對(duì)外來抗原發(fā)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。T細(xì)胞是介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要免疫細(xì)胞，它在胸腺中發(fā)育成熟，同時(shí)也有輔助和增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答的功能，除此之外，T細(xì)胞還有免疫調(diào)節(jié)功能，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有一定作用。異物進(jìn)入體內(nèi)血循環(huán)系統(tǒng)，可迅速為單核巨噬細(xì)胞吞噬而去除，其主要部位為肝臟和脾臟。測(cè)定血中異物的去除速度可反映網(wǎng)狀

12、內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能。TNF-和IL-6是由單核細(xì)胞分泌的重要的細(xì)胞因子6。TNF-主要通過對(duì)腫瘤區(qū)域血管的影響引起移植腫瘤的出血壞死，TNF-能直接作用于不同靶組織，殺傷腫瘤或誘導(dǎo)某些腫瘤細(xì)胞凋亡7。IL-6的抗腫瘤效應(yīng)，主要通過調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，也可直接或間接增強(qiáng)NK細(xì)胞及TL的殺瘤活性。艾迪注射液是貴州益佰制藥消費(fèi)的臨床廣泛使用的抗腫瘤中藥制劑，具有清熱解毒、消瘀散結(jié)之成效，用于原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤等。處方以斑蝥破血消癥，功毒蝕瘡，引赤發(fā)泡為君藥，發(fā)揮抗腫瘤的作用，以人參為臣藥，輔助君藥發(fā)揮抗腫瘤的作用以到達(dá)祛邪，同時(shí)扶助正氣，刺五加、黃芪為佐使

13、，輔助臣藥，扶助正氣，增強(qiáng)人體的抵抗力。本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示，艾迪注射液對(duì)小鼠移植性H22實(shí)體瘤有顯著的抑瘤作用，抑瘤率47.52%以上抑瘤率實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，其中高劑量每次抑瘤率均超過30%，其余2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果未在本文中列出。荷瘤小鼠胸腺和脾臟的重量顯著降低，而艾迪注射液可以顯著進(jìn)步荷瘤小鼠胸腺和脾臟的指數(shù)；荷瘤小鼠去除速度的K值和吞噬指數(shù)顯著降低，艾迪注射液的去除速度和吞噬指數(shù)明顯高于模型組,說明艾迪注射液能進(jìn)步小鼠非特異性免疫網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能,這對(duì)于去除或抑制腫瘤細(xì)胞可能產(chǎn)生有利的作用；荷瘤小鼠細(xì)胞產(chǎn)生TNF-，IL-6的程度較正常小鼠顯著下降，說明發(fā)生腫瘤時(shí)機(jī)體的免疫才能在下降，這可能

14、是腫瘤免疫逃避抑制的一個(gè)因素。艾迪注射液可以促進(jìn)荷瘤小鼠體內(nèi)TNF-，IL-6的分泌，從而進(jìn)步機(jī)體免疫系統(tǒng)的抗腫瘤才能。綜上所述,艾迪注射液具有明顯的抑制荷瘤機(jī)體腫瘤生長的作用,其作用機(jī)制可能通過調(diào)節(jié)荷瘤機(jī)體異常的特異性與非特異性免疫狀態(tài)而發(fā)揮抗腫瘤作用。其抗腫瘤作用機(jī)制及對(duì)腫瘤和免疫的其它影響,有待進(jìn)一步研究討論?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1黃曉峰,周游.益氣敗毒湯對(duì)S180荷瘤小鼠抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究J.黑龍江中醫(yī)藥,2022,1:53.2韓悅.抗癌藥物研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京:北京醫(yī)科大學(xué)和中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)結(jié)合出版社,1997:295.3梁麗堅(jiān).化積顆粒對(duì)S180肉瘤小鼠抑瘤作用的研究J.時(shí)珍國醫(yī)國藥,2022,18(4):866.4張建峰,昌友權(quán),陳光,等.紅