凝膠的選擇、處理和保存

1、PAGE 1PAGE 凝膠的選擇、處理和保存 1. 凝膠的選擇 通過前面的介紹可以看到凝膠的種類、型號很多。不同類型的凝膠在性質(zhì)以及分離范圍上都有較大的差別，所以在進行凝膠層析實驗時要根據(jù)樣品的性質(zhì)以及分離的要求選擇合適的凝膠，這是影響凝膠層析效果好壞的一個關(guān)鍵因素。一般來講，選擇凝膠首先要根據(jù)樣品的情況確定一個合適的分離范圍，根據(jù)分離范圍來選擇合適型號的凝膠。一般的凝膠層析實驗可以分為兩類：分組分離（group separations）和分級分離（fractionations），分組分離是指將樣品混合物按分子量大小分成兩組，一組分子量較大，另一組分子量較小。例如蛋白樣品的脫鹽或蛋白、核酸溶液

2、去除小分子雜質(zhì)以及一些注射劑去除大分子熱源物質(zhì)等等。分級分離則是指將一組分子量比較接近的組分分開。在分組分離時要選擇能將大分子完全排阻而小分子完全滲透的凝膠，這樣分離效果好。一般常用排阻極限較小的凝膠類型。分級分離時則要根據(jù)樣品組分的具體情況來選擇凝膠的類型，凝膠的分離范圍一方面應(yīng)包括所要的各個組分的分子量，另一方面要合適，不能過大。如果分離范圍選擇過小，則某些組分不能得到分離；如分離范圍選擇過大，則分辨率較低，分離效果也不好。選擇凝膠另外一個方面就是凝膠顆粒的大小。顆粒小，分辨率高，但相對流速慢，實驗時間長，有時會造成擴散現(xiàn)象嚴重；顆粒大，流速快，分辨率較低但條件得當也可以得到滿意的結(jié)果。選

3、擇時要依據(jù)分離的具體情況而定，例如樣品中各個組分差別較大，則可以選用大顆粒的凝膠，這樣可以很快的達到分離的目的；如果有個別組分差別較小，則要考慮使用小顆粒凝膠以提高分辨率。由于凝膠一般都比較穩(wěn)定，所以它在一般的實驗條件下都可以正常的工作。如果實驗條件比較特殊，如在較強的酸堿中進行或含有有機溶劑等等，則要仔細查看凝膠的工作參數(shù)，選擇合適的類型的凝膠。 2. 凝膠的處理 凝膠使用前要首先要進行處理。選擇好凝膠的類型后，首先要根據(jù)選擇的層析柱估算出凝膠的用量。由于市售的葡聚糖凝膠和丙烯酰胺凝膠通常是無水的干膠，所以要計算干膠用量：干膠用量（g）柱床體積（ml）/ 凝膠的床體積（ml / g）。 由于

4、凝膠處理過程以及實驗過程可能有一定損失，所以一般凝膠用量在計算的基礎(chǔ)上再增加1020。 葡聚糖凝膠和丙烯酰胺凝膠干膠的處理首先是在水中膨化，不同類型的凝膠所需的膨化時間不同。一般吸水率較小的凝膠（即型號較小、排阻極限較小的凝膠）膨化時間較短，在20 C條件下需34小時；但吸水率較大的凝膠（即型號較大、排阻極限較大的凝膠）膨化時間則較長，20 C條件下需十幾個到幾十個小時，如Sephadex G-100以上的干膠膨化時間都要在72小時以上。如果加熱煮沸，則膨化時間會大大縮短，一般在15小時即可完成，而且煮沸也可以去除凝膠顆粒中的氣泡。但應(yīng)注意盡量避免在酸或堿中加熱，以免凝膠被破壞。瓊脂糖凝膠和有些市售凝膠是水懸浮的狀態(tài)，所以不需膨化處理。另外多孔玻璃珠和多孔硅膠也不需膨化處理。 膨化處理后，要對凝膠進行純化和排除氣泡。純化可以反復(fù)漂洗，傾瀉去除表面的雜質(zhì)和不均一的細小凝膠顆粒。也可以一定的酸或堿浸泡一段時間，再用水洗至中性。排除凝膠中的氣泡是很重要的，否則會影響分離效果，可以通過抽氣或加熱煮沸的方法排除氣泡。 3. 凝膠的保存 凝膠的保存一般是反復(fù)洗滌去除蛋白等雜質(zhì)，然后加入適當?shù)目咕鷦?，通常加?.02的疊氮化鈉，4 C下保存。如果要較長時間的保存，則要將凝膠洗滌后脫水、干燥，可以將凝膠過濾抽干后浸泡在50的乙醇中脫水，抽干后再