正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選參芪補(bǔ)血顆粒的提取工藝

1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選參芪補(bǔ)血顆粒的提取工藝【關(guān)鍵詞】參芪補(bǔ)血顆粒；,正交實(shí)驗(yàn)；,高效液相色譜法；,黃芪甲苷摘要：目的研究參芪補(bǔ)血顆粒劑的最正確提取工藝。方法選用L934正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，并以黃芪甲苷(41H6814)和干膏得率作為考察指標(biāo)，考察乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響。結(jié)果參芪補(bǔ)血顆粒的最正確提取工藝為用65%的乙醇8倍量，回流提取3次，1.5h/次。結(jié)論采取正交設(shè)計(jì)挑選出最正確提取方法較好，操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，有效成分提取率高，工藝可行。關(guān)鍵詞：參芪補(bǔ)血顆粒；正交實(shí)驗(yàn)；高效液相色譜法；黃芪甲苷Abstrat：bjetiveTdevelptheptialextrative

2、tehniquesfShenqibuxueGranules.ethdsL934rthgnalexperientasappliedtnedevelpentsinextrativetehniques.Theyieldfastragalside(41H6814)anddryextratnditinedextratingrudedrugsfralhl.never,inthelightfntentindexes,furfatrsustbetakenintnsideratin:thefrequenyandtiefextrating,thequantityandnentratinfalhl.ResultsT

3、heptialextrativetehniqueserethenadvaned.8fldsf65%alhlererefluxedfr3ties,eahtiefr1.5h.nlusinTheprpsedethdsresultingdreprduibilityasellashighyieldfativenstituents.Thus,itisfeasibletflltheptialextrativetehniques.Keyrds：ShenqibuxueGranules;rthgnalexperient;HPL;Astragalside參芪補(bǔ)血顆粒是由黃芪、當(dāng)歸、制首烏、黨參等6味中藥組成的中藥復(fù)

4、方制劑。主要用于治療貧血和放射、化療時(shí)引起的白細(xì)胞、血小板減少等血虛癥。黃芪系方中君藥，黃芪甲苷為其活性成分之一，對(duì)藥物和放射所致白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞降低具有明顯的改善作用1，并且其穩(wěn)定性好。因此，測(cè)定提取液中黃芪甲苷的含量可作為評(píng)價(jià)本制劑質(zhì)量的客觀指標(biāo)之一，浸膏提取量也可作為有效成分提取率的指標(biāo)。故為了發(fā)揮藥物的最正確療效，優(yōu)化制備工藝，本文以黃芪甲苷含量為指標(biāo)、結(jié)合浸膏得率，用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選本制劑的最正確提取工藝，為工業(yè)化消費(fèi)提供根據(jù)。1儀器與試劑DINEXSuit680高效液相色譜儀(美國(guó))：DINEXP680HPLPUP，TherstattedlunpartetT-100，Allteh20

5、00ES型ELSD、DINEXhrenlenhratgraphyanageentSyste；SK250LH型超聲波清洗器上?？茖?dǎo)超聲儀器；ZRBAXExtend184.6150，5美國(guó)安捷倫科技色譜柱。黃芪甲苷對(duì)照品0781202211中國(guó)藥品生物制品檢定所；參芪補(bǔ)血顆粒由第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所和化學(xué)教研室研制；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1高效液相色譜方法的建立2.1.1色譜條件流動(dòng)相乙腈水3268；流速：1.0lin-1；柱溫：25；Allteh2000ES型ELSD；飄移管溫度：100.6；氣體流速：2.7Lin-1；進(jìn)樣量：20l；理論塔板數(shù)以黃芪甲苷峰

6、計(jì)算大于5000。色譜圖見(jiàn)圖1。a-對(duì)照品b-供試品圖1色譜圖略2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精細(xì)稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品12.5g置于25l容量瓶中，參加無(wú)水甲醇定容至25l，配制為0.5gl-1的黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液。用移液管分別精細(xì)移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0l黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液置10l容量瓶中，加甲醇定容，分別得到濃度為0.05，0.10，0.15，0.20，0.25,0.30gl-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用0.45微孔濾膜濾過(guò)，進(jìn)樣20l在給定色譜條件下進(jìn)展測(cè)定。以進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)值x為橫坐標(biāo)，蒸發(fā)光峰面積的常用對(duì)數(shù)值y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，其回歸方程為：y=0.957+1

7、.635x，r=0.9992，黃芪甲苷在1.06.0g的范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。2.2提取方法的選擇2.2.1醇提正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)研究及預(yù)實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)提取工藝的正交實(shí)驗(yàn)因素程度，結(jié)果見(jiàn)表1。表1因素程度表略根據(jù)因素程度表，選用L934正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)展實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表2。每份稱(chēng)取參芪補(bǔ)血顆粒原藥材36g，按正交表實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)展提取，提取液減壓濃縮并用雙蒸水定容到200l的容量瓶中，超聲溶解，以供測(cè)定兩個(gè)檢測(cè)指標(biāo)的含量。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.2提取液中黃芪甲苷和干浸膏得率的測(cè)定提取液中黃芪：甲苷含量測(cè)定用移液管精細(xì)移取2.2.1項(xiàng)下定容到200l的提取液50l到250l圓底燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)蒸干

8、，殘?jiān)铀?0l超聲溶解后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，以水飽和的正丁醇萃取4次，30l/次，合并正丁醇萃取液，用氨試液40l濃氨水加水配成100l充分洗滌2次，30l/次，棄去氨液，將正丁醇層在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓回收至干，用甲醇超聲溶解并定容至10l，搖勻，用0.45微孔濾膜濾過(guò)，得供試品溶液2。在選定的色譜條件下測(cè)定，進(jìn)樣量20l，記錄色譜峰面積，根據(jù)回歸方程計(jì)算提取液中黃芪甲苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。干浸膏得率測(cè)定：用移液管精細(xì)移取2.2.1項(xiàng)下定容到200l的提取液50l置于已枯燥至恒重的蒸發(fā)皿中，先于水浴上揮干，然后按2022年版中國(guó)藥典一部附錄H烘干法進(jìn)展測(cè)定，即將盛有樣品溶液的蒸發(fā)皿置于烘箱中，在

9、100105下枯燥5h，然后移置于枯燥器中冷卻30in，精細(xì)稱(chēng)定重量，再在上述溫度枯燥1h，冷卻，稱(chēng)重，至連續(xù)兩次稱(chēng)重的差異不超過(guò)5g為止。根據(jù)所得的干膏重量計(jì)算藥材干浸膏的得率。結(jié)果見(jiàn)表2。表2正交實(shí)驗(yàn)黃芪甲苷得率測(cè)定結(jié)果略2.3提取工藝的優(yōu)化利用直觀分析和方差分析對(duì)表2中的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)展數(shù)據(jù)分析，直觀分析結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表34。通過(guò)黃芪甲苷含量、干膏率雙指標(biāo)進(jìn)展考察，兩者在醇的用量上存在差異，但通過(guò)方差分析可以看出醇的用量對(duì)黃芪甲苷含量、干膏率兩者的測(cè)定結(jié)果并無(wú)顯著性影響，故從節(jié)約本錢(qián)的角度考慮，優(yōu)選出最正確工藝為A1B23D2，即用65%的乙醇8倍量，回流提取3次，1.5h/次，

10、所得樣品上述成分提取率最高。2.4最正確工藝驗(yàn)證為驗(yàn)證所優(yōu)選工藝的可靠性和重復(fù)性，我們按最正確工藝平行制備3份樣品，測(cè)定黃芪甲苷得率平均為0.107%，干膏平均得率為42.76%，均高于正交9份樣品的得率，說(shuō)明本工藝結(jié)果可靠，適用于工業(yè)消費(fèi)。表3正交實(shí)驗(yàn)黃芪甲苷含量方差分析略表4正交實(shí)驗(yàn)干膏得率方差分析略3討論黃芪系方中君藥，在造血功能方面的作用包括：小鼠灌服膜莢黃芪煎煮劑，對(duì)失血性貧血以及環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞和血小板的減少均有促進(jìn)恢復(fù)作用3，對(duì)環(huán)磷酰胺TX所致小鼠造血功能損傷，灌服黃芪煎劑可使增加骨髓造血干細(xì)胞和粒單系造血祖細(xì)胞集落數(shù)顯著增加4等。而黃芪甲苷是黃芪中的主要有效成分，并且其穩(wěn)定性較好。因此,本試驗(yàn)以黃芪甲苷含量測(cè)定作為評(píng)價(jià)有效成分提取率的客觀指標(biāo)之一。由于黃芪甲苷僅在200n左右有弱的末端吸收，如用紫外檢測(cè)法進(jìn)展含量的測(cè)定，那么存在著噪音對(duì)結(jié)果影響較大，靈敏度較低的缺陷。作者曾用甲醇代替乙腈進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷易受到試劑的干擾，因此，本文采用ELSD測(cè)定黃芪甲苷的含量。ELSD是一種新型的檢測(cè)器，適用于不揮發(fā)或半揮發(fā)樣品的檢測(cè)，而不受被測(cè)組分在一樣條件下無(wú)其色譜峰的出現(xiàn)及化學(xué)構(gòu)造的影響，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。參考文獻(xiàn)：1張銀娣，徐勤娥，劉小浩，等.黃芪苷升高白細(xì)胞及抗應(yīng)激作用的研究J.南京醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1992