免疫學(xué)實驗：沉淀反應(yīng)(Precipitation)

1、沉淀反應(yīng)(Precipitation)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，經(jīng)過一定時間，出現(xiàn)肉眼可見不透明的沉淀物。單向免疫擴散試驗(Single immuno- diffusion test):在抗原抗體反應(yīng)時，只有其中的一種成分發(fā)生擴散。 雙向免疫擴散試驗(Double immuno- diffusion test):抗原和抗體在瓊脂內(nèi)各自向?qū)Ψ綌U散，在最恰當(dāng)?shù)谋壤幮纬煽乖贵w沉淀線。免疫電泳(Immunoelectrophoresis):將免疫擴散和電泳相結(jié)合的一種免疫學(xué)分析技術(shù)?；鸺庖唠娪?Rocket Immunoelectrophoresis):將單向免疫擴散和電

2、泳相結(jié)合的一種定量檢測技術(shù)。對流免疫電泳試驗(Counter Immunoelectrophoresis):將雙向免疫擴散與電泳相結(jié)合的定向加速的免疫擴散技術(shù)。 環(huán)狀沉淀試驗單向免疫瓊脂擴散試驗Radial immunodiffusion. The patients serum is placed in the wells cut out of the agarose gel. The agarose gel contains antibodies to the test antigen (CRP in this case). The antigen diffuses into the aga

3、rose and forms precipitin rings. The diameter of the rings is directly proportional to the amount of antigen in the serum and is quantified by comparing the size of the ring to that of simultaneously tested standards.雙向免疫瓊脂擴散試驗相應(yīng)的抗原與抗體在瓊脂凝膠板中的相應(yīng)孔內(nèi)，分別向周圍自由擴散。在抗原和抗體孔之間，擴散的抗原與抗體相遇時發(fā)生特異性反應(yīng)，在濃度比例合適處出現(xiàn)可見的

4、白色沉淀線。根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對比關(guān)系，可對抗原或抗體進行定性分析。雙向免疫擴散試驗火箭免疫電泳電泳時，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而在電場作用下促使樣品孔中的抗原向陽極泳動。當(dāng)抗原與抗體分子達到適當(dāng)比例時，形成一個狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰。峰的高度與檢樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。因此，當(dāng)瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計算出待檢抗原的含量。 Diluted plasma is electrophoresed into a gel containing antibody to vWF

5、antigen utilizing the Laurell rocket immunoassay technique. A standard curve is prepared by plotting the height of the rockets formed with known quantities of vWF in normal plasma and comparing to this normal curve the height of the rocket formed using the patients plasma. This assay is designed to

6、detect the presence of vWF protein but cannot differentiate between functional and non-functional protein. The assay is used to help diagnose von Willebrand disease. 免疫電泳試驗將蛋白質(zhì)抗原在瓊脂糖凝膠上進行電泳，樣品中不同的抗原成分因所帶電荷、分子量及構(gòu)型不同，電泳遷移率各異，而被分離成肉眼不可見的若干區(qū)帶。停止電泳后，在與電泳方向平行的瓊脂槽內(nèi)加入相應(yīng)抗體進行雙向免疫擴散。分離成區(qū)帶的各種抗原成分與相應(yīng)抗體在瓊脂中擴散后相遇，

7、在二者比例合適處形成肉眼可見的弧形沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置和形狀，即可對樣品中所含成分的種類及其性質(zhì)進行分析、鑒定。 Serum from a normal control was placed in the top well and the patients undiluted serum was placed in wells 2, 3, 5, and 7, reading down. Wells 4, 6, and 8 contained a 1:5 dilution of the patients serum. The top trough contained antibodie

8、s to whole human serum. The third trough contained antibodies to human IgG; the fifth trough, antibodies to human IgA; and the seventh trough, antibodies to human IgM. The varied positions of the precipitin bands indicate the differences in migration of the proteins in an electric field. 對流免疫電泳在pH8.6的緩沖液中，蛋白質(zhì)抗原帶負電荷向正極泳動；而抗體大部分屬于Ig，由于分子量大，暴露的極性基團較少，在離子瓊脂中泳動緩慢，同時受電滲作用的影響向負極泳動(電滲是指在電場中液體對于一個固定固體的相對移動。瓊脂是一種酸性物質(zhì)，在堿性溶液中帶負電荷，而與它接觸的溶液帶正電荷，因此液體向負極泳動，產(chǎn)生電滲)在抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉淀線。 材料 抗原 (Ag): HBsAg抗體 (Ab):抗HBsAg免疫血