糖化血紅蛋白的基礎知識培訓

1、糖化血紅蛋白的基礎知識培訓糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第1頁HbA1c定義 HbA1c: 葡萄糖與血紅蛋白鏈氨基酸末端6個氨基酸結合產生一個特定糖化血紅蛋白血紅蛋白被糖化后，氨基酸末端所帶負電荷會增加 HbA0：沒有結合葡萄糖血紅蛋白鏈氨基酸末端6個氨基酸 HbA1c以百分比表示，即以和葡萄糖結合血紅蛋白占全部血紅蛋白百分比正常參考范圍：4%-6%（NGSP/DCCT標化方法）糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第2頁糖化血紅蛋白-血紅蛋白糖基化產物葡萄糖進入紅細胞，在內部與血紅蛋白發(fā)生反應血紅蛋白葡萄糖紅細胞糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第3頁糖化血紅蛋白生物合成過程（兩步）血紅蛋白葡萄糖中間產物-LA1c

2、 Schiff堿HbA1c第一部：快速反應，生成不穩(wěn)定A1c（LA1c）第二步：遲緩反應，生成穩(wěn)定A1c（HbA1c）糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第4頁糖化和非糖化血紅蛋白HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA()HbA2()HbF()95%2%1-3.5%成人血紅蛋白分三種HbA為主要成人Hb非糖化Hb糖化Hb6-8%87-89%血紅蛋白HbA1c是怎樣計算？A1c%=A1c/A0+HbA1糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第5頁離子交換色譜所分離組分解釋（非糖尿病樣本）Hb組成 % of Hb Hb與糖類結合HbA1a 1% HbA1與1,6-二磷酸果糖結合而成 HbA1b 1%

3、丙酮酸與鏈氨基末端纈氨酸結合而成 HbF 1% 胎兒血紅蛋白LA1c 1% 血紅蛋白形成HbA1c之前中間產物HbA1c 46% 鏈氨基酸端與葡萄糖結合產物HbA0 90% 非糖化血紅蛋白 胎兒血紅蛋白在胎兒及出生6個月以內新生兒體內為高濃度，6個月后基礎降為成人水平婦產科 HbA1c主要用于糖尿病妊娠篩查糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第6頁色譜圖舉例 HbA1a & HbA1b HbA次要組分LA1c (希夫堿) 和氨甲基乙?；?Hb HbA1c A0總面積為 100萬-500萬 A1c 結果糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第7頁小結什么是HbA1c和HbA0？A1c被糖化后什么電荷增加了？為何糖化血

4、紅蛋白在A0峰之前被洗脫下來？測量糖化血紅蛋白為何要先對樣本溶血？HbA1c是怎樣計算？成人血紅蛋白包含哪幾個？HbF是什么？濃度高時是否會對A1c造成干擾？為何？伯樂糖化試劑能匯報HbF嗎？為何？糖化血紅蛋白包含哪幾個？糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第8頁HbA1c試驗室檢測方法糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第9頁常見HbA1c檢測方法 主要有三種檢測方法: 1.離子交換高壓液相色譜（HPLC） 直接分離HbA1c2.硼酸親和高壓液相色譜 檢測產物為總糖化血紅蛋白3. 免疫法 檢測產物為HbA1c糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第10頁各檢測方法精密度 方法 精密度 電泳 +免疫法 +低壓液相色譜（LPL

5、C） +高壓液相色譜（HPLC） + 糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第11頁各檢測方法分析物HbA (a2b2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成份糖化成份離子交換色譜和免疫法檢測物硼酸親和色譜檢測物糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第12頁離子交換HPLC檢測糖化血紅蛋白HbA1c金標準方法 DCCT研究中唯一所采取HbA1c檢測方法 NGSP標準化參考方法 檢測原理： 基于HbA1c 與其它血紅蛋白組分所帶電荷不一樣，在一定緩沖液離子強度下可與分析柱樹脂表面偶聯離子基團有不一樣程度結合，從而將HbA1c與其它組分(HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0) 區(qū)分開而得到分離。糖化

6、血紅蛋白的基礎知識培訓第13頁離子交換HPLC檢測原理色譜圖橫坐標是時間，縱坐標是信號強度，反應Hb各分析峰濃度高低被校準峰被陰影化被校準峰被陰影化糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第14頁離子交換HPLC特點采取離子交換原理基于HPLC平臺HPLC方法試劑組成包含：分析柱、緩沖液、校準品采取分析柱內填充離子交換樹脂作為固定相，樹脂上面偶聯了帶電荷基團以可形成不一樣離子強度洗脫梯度緩沖試劑作為流動相。溯源性由試劑盒配套校準品確保分離效果影響原因分析柱內填充物（顆粒越小，分離效果越好，速度越慢）分析柱柱長（越長，分離效果越好，速度越慢）糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第15頁離子交換HPLC優(yōu)缺點優(yōu)點： 1.

7、全自動 2.結果準確，可靠 分析物為HbA1c。 高分辨率方法可同時區(qū)分常見血紅蛋白變異體，給臨床醫(yī)生已額外醫(yī)療提醒 3. 精密度好 CV5%）只報HbA1c一個數值，不能檢測血紅蛋白變異體高血紅蛋白F樣本HbA1c檢測結果偏低嚴重黃疸和高脂血影響比色結果國產糖化試劑非標準化問題糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第20頁小結糖化血紅蛋白主要檢測方法有什么？檢測產物分別是什么？HPLC漢字全稱是什么？HbA1c檢測金標準方法是？為何？離子交換HPLC檢測原理是基于什么不一樣？檢測試劑應該包含哪些主要組分？分析柱中填充是什么？上面偶聯了什么？不一樣緩沖液區(qū)分是什么？不一樣離子交換HPLC方法分辨率一樣嗎？

8、分辨率關鍵影響原因是什么？糖化血紅蛋白檢測結果溯源性由哪種試劑確保？伯樂糖化產品色譜圖橫坐標是什么？縱坐標是什么？硼酸親和色譜法檢測原理是基于什么？色譜圖有幾個峰？分別是什么？硼酸親和色譜法是怎么檢測HbA1c？免疫法檢測糖化血紅蛋白原理是基于什么反應？國產免疫法試劑缺點有哪些？糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第21頁HbA1c試驗室檢測干擾原因糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第22頁常見檢測干擾原因非方法學特異干擾原因改變紅細胞壽命生理條件可影響 HbA1c結果造成檢測結果假性偏低 鐮刀細胞性貧血和溶血性貧血 維他命 C和 E （抑制糖化作用）造成檢測結果假性偏高 鐵缺乏性貧血，脾切除術后 真性紅細胞增

9、多癥（高原地域）妊娠期 Hb濃度偏低，HbA1c比正常人偏低 糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第23頁方法學特異干擾原因血紅蛋白變異體 (如.HbS, HbC， HbD, HbE)血紅蛋白衍生物 (乙?；⒓柞；苌锏? 長久服用阿斯匹林病人，體內乙酰化Hb高，結果偏高 腎衰病人氨甲?；?，造成結果偏高Schiff堿（A1c中間產物） 一些血糖濃度急劇改變1型糖尿病人，Schiff堿升高，胎兒血紅蛋白HbF嚴重黃疸、高血脂糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第24頁血紅蛋白變異體發(fā)生率全世界已經發(fā)覺了超出一千種血紅蛋白變異體全球血紅蛋白變異體發(fā)生率最新數據是7%*非洲裔美國人：HbS 7.8%；HbC 2.

10、3%1988年,2.5 ,河南*年,3.2 ,絲綢之路*云南：4%云南省阿昌族HbE發(fā)病率為41.2%*Kohne E. Hemoglobinopathies: clinical manifestations, diagnosis, and treatment. 1. Dtsch Arztebl Int. ;108(31-32):532-540.*河南省異常血紅蛋白調查與化學結構分析研究,新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報, 1988, (02) 9-12*中國絲綢之路地域血紅蛋白病遺傳流行病學特點，人類學學報，V20糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第25頁變異體對HbA1c準確性影響Ross J.Molinaro,T

11、argeting HbA1c:standardization and clinical laboratory measurement. MLO Jan,糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第26頁血紅蛋白變異體對HbA1c結果準確性影響對個別方法檢測結果準確性有影響例：A0后有變異體糖尿病人樣本，HbF正常G8標準模式試劑檢測結果偏低1%G8 Variant 模式試劑（1.6分鐘/test）G8 標準模式試劑（1.0分鐘/test）糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第27頁血紅蛋白變異體與血糖監(jiān)控血紅蛋白變異體會影響紅細胞壽命，紅細胞壽命會影響糖化血紅蛋白生成這些病人或許應該有不一樣糖化血紅蛋白監(jiān)控時間或者改用

12、其它指標來評定血糖糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第28頁小結影響HbA1c檢測結果非方法學特異干擾原因影響HbA1c檢測方法學特異干擾原因有哪些？變異體與A0沒有分離開情況下會造成檢測結果偏高還是偏低？為何？變異體與A1c沒有分離開情況下會造成檢測結果偏高還是偏低？為何？血紅蛋白變異體會經過兩個方面影響糖化血紅蛋白，請詳述。臨床上對于有血紅蛋白變異體病人有什么提議？試驗室應該怎么滿足臨床這一需求？糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第29頁糖化血紅蛋白試驗室檢測指南要求年中國糖尿病雜志8月刊糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第30頁分析系統(tǒng)要求測定方法要求溯源到IFCC參考方法，如NGSP認證方法 （NGSP認證使

13、用期是1年）2. 試驗室要知曉所選分析系統(tǒng)可能存在干擾原因3. POCT方法準確性不能滿足臨床要求，當前不能用于糖尿病診療糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第31頁中國三級醫(yī)院試驗室檢測情況數據統(tǒng)計于NCCL歷年室間質評數據采取NGSP標準化方法試驗室占比81%糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第32頁HbA1cTotalGHBHbA1在DCCT和UKPD結果發(fā)表之前，美國有800個試驗室在做A1c檢測，CAP試驗調查顯示在不一樣試驗室，用不一樣檢測方法得出A1c結果存有巨大差異。糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第33頁HbA1c檢測標準化美國從1996年起開展國家糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP），在HbA1c檢

14、測值一致性方面取得了巨大成功在NGSP中心試驗室所采取參考方法是 離子交換HPLC NGSP 由指導委員會和試驗室網絡組成。試驗室網絡包含一級中心參考試驗室（CPRL）、一級參考試驗室（PRL）和二級參考試驗室（SRL）糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第34頁目標: 1. 糖化血紅蛋白檢測項目實現標準化2. 以使各臨床試驗室檢測結果與DCCT匯報結果含有可比性( 該DCCT試驗建立了平均血糖與糖尿病并發(fā)癥發(fā)病風險之間關系) 糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第35頁臨床試驗室NGSP 網絡 廠商 校準品1 新鮮血NGSP 程序(精密度與偏差) 認證2 新鮮血能力比對測試3 新鮮血糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第

15、36頁NGSP標準化對A1c檢測貢獻從無序到有序年調查顯示多家CAP試驗室間使用不一樣檢測方法CVs在1.3-7.1%之間，基于A1c檢測結果已經能夠有效標準化 糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第37頁IFCC標準化年IFCC發(fā)表文件，正式推薦 HbA1c檢測參考方法為HPLC-MS(質譜)或HPLC-CE(毛細管電泳)校準品為純化 HbAo 和 HbA1c 混合物，共 6 個濃度室內CV0.472.07%；室間CV1.352.27%糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第38頁不過，NGSP和IFCC方法檢測HbA1c值存在1%-2%差異IFCC%HbA1c2.13.2 4.3 5.4 6.4 7.5 8.6

16、 9.710.7 NGSP%HbA1c456789101112偏差 1.9 1.8 1.7 1.6 1.6 1.5 1.4 1.3 1.3非糖尿病范圍控制目標需采取治療辦法糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第39頁各個標準與IFCC之間轉換JDS/JSCC% = 0.927*IFCC% + 1.73NGSP% = 0.915 * IFCC% + 2.15Sweden% = 0.989 * IFCC% + 0.88IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.03.64.35.66.47.68.69.610.811.6NGSP%HbA1c4681012糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第40頁HbA1c檢測必須在世

17、界范圍內標準化，包含參考系統(tǒng)和數值匯報 IFCC參考系統(tǒng)是唯一標準化參考系統(tǒng)HbA1c以IFCC單位(mmol/mol)以及轉換NGSP units (%)匯報，使用IFCC-NGSP換算公式 需要確?；鶎犹悄虿≥p易取得IFCC和NGSP轉換公式 雜志編輯和出版物提議采取SI (IFCC) 和NGSP雙重單位匯報HbA1c 糖化血紅蛋白標準化稱謂為HbA1c，在指南或教育材料中也能夠簡寫為A1C 年HbA1c標準化第二次全球共識 (ADA、EASD、IDF、IFCC和ISPAD) in Annals of Clinical Biochemistry, Clinical Chemistry, C

18、linical Chemistry and Laboratory Medicine, Diabetes Care, Diabetes Research and Clinical Practice, Diabetologia, Diabetic Medicine and Pediatric Diabetes. NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152 糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第41頁NGSP和IFCC之間轉換NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152 糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第42頁糖化血紅蛋白HbA1c HbA1c臨床應用與試驗室檢測相符相承試驗室檢測標準

19、化血糖監(jiān)控指標 糖尿病篩查與診療1993糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第43頁分析系統(tǒng)性能指標要求匯報結果：以HbA1c相當于HbA1c匯報結果，因為只有這一個分析項目才有評定并發(fā)癥發(fā)生優(yōu)良數據庫。精密度：室內CV3%, 以小于2%為宜；測定質量目標：0.5% HbA1c準確度：與可接收參考值差值在0.5%HbA1c范圍內準確度驗證方法： 1）參加室間質評活動 2）檢測有證參考物質； 3）與運行經過認證系統(tǒng)有資質試驗室測定結果進行比對注意：沒有直接證據顯示其它檢驗數據與糖尿病長久并發(fā)癥風險相關(比如：總糖化血紅蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白)糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第44頁試驗室不精密度對檢測結果變異性影響6.5% HbA1c在不一樣分析不精密度水平下95.5%離散程度糖化血紅蛋白的基礎知識培訓第45頁不一樣室內CV對 A1C 分析影響（95%可信區(qū)間）CV %6.0% A1C6.5% A1C7.0% A1C25.76-6.246.24 - 6.766.72 - 7.2835.64-6.366.11 - 6.896.58 - 7.4255.4-6.65.85 7.156.3 7.7正常人和病人無法區(qū)分血糖控制好壞無法區(qū)分HbA1c結果不準確對臨床醫(yī)生判斷影響正常值與醫(yī)學決定水平差值小HbA1c可診療DM（只有室內CV3%,才能室間CV5%）