大花惠蘭、石斛蘭的組織培養(yǎng)

1、大花惠蘭、石斛蘭的組織培養(yǎng)（1）材料與方法材料：大花蕙蘭大花品種嫩芽。將母株放在溫室內(nèi)盆栽培養(yǎng),于25 月陸續(xù)從母株上取8 cm 左右的新芽,剝?nèi)プ钔鈳讓尤~片,去芽的上半段，然后在超凈工作臺上采用三步滅菌處理法處理:先在70 %的酒精中處理6 s ,立即投入10 %的次氯酸鈉溶液中10 min ,稍加搖動,取出后用無菌水沖洗,剝?nèi)ネ鈱?3 枚葉片;再放入5 %的次氯酸鈉溶液中5 min ,取出后無菌水沖洗,剝至最后1 枚葉片;再放入1 %的次氯酸鈉溶液中1 min ,取出后無菌水沖洗數(shù)次。以上次氯酸鈉溶液中均加入Tween20 以利殺菌劑更有效地發(fā)揮作用,在無菌條件下剝出約5 mm長地莖尖,以

2、生長點為中心,用解剖刀把莖尖切成4 個小方塊,分別接入已經(jīng)準備好的培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基：原球球莖誘導導培養(yǎng)基基配方: MSS + 0. 5 mmg/ L BBA +1. 0 mmg/ L KKT + 2 g/ L 活活性炭（ HYPERLINK /active/ acttivee HYPERLINK /carbon/ carrbonn，AC）。原球球莖增殖殖培養(yǎng)基基配方為為:MSS + 0. 5 mmg/ L BBA + 0. 8 mg/ L22 ,442D +2 g/ L AAC,。幼苗苗分化及及生根養(yǎng)養(yǎng)基配方方為:MMS + KTT 1 mg/ L + NNAA 0. 5mgg/ LL +22

3、 g/ L AC。培培養(yǎng)條件件培養(yǎng)基ppH 55. 445. 8 ,瓊脂脂粉0. 6 %00. 88 %,活性炭炭0. 2 %的,防防止褐變變,培養(yǎng)養(yǎng)室溫度度2225,相對對濕度440 %,光照照12 h/ d ,光照強強度為22 0000 llx。結果觀察察原球球莖誘導導：把莖尖尖切成的的小塊,接入圓圓球莖誘誘導培養(yǎng)養(yǎng)基上，20天天后（或或更長時時間）觀觀察有無無圓球莖莖出現(xiàn)。結果調(diào)調(diào)查:圓圓球莖的的誘導率率= 產(chǎn)產(chǎn)生圓球球莖的莖莖尖數(shù)/ 接種種莖尖數(shù)數(shù)1000 %。原原球莖增增殖：將誘導導形成的的較大原原球莖塊塊切割成成直徑338 mm左左右的小小塊,接接種在圓圓球莖增增殖培養(yǎng)養(yǎng)基上。1

4、個個月后統(tǒng)統(tǒng)計增殖殖量，結果調(diào)調(diào)查:原原球莖增增殖率= 有新新原球莖莖的塊數(shù)數(shù)/ 接接種塊數(shù)數(shù)1000 %。幼幼苗分化化及生根根：將增殖殖的充分分成熟的的較大原原球莖塊塊切割成成直徑338 mm的的小塊,接種在在原球莖莖分化及及生根培培養(yǎng)基上上。455 d 后統(tǒng)計計分化率率、生根根率及根根系生長長狀態(tài)。結果調(diào)調(diào)查:幼幼苗分化化率= 出芽數(shù)數(shù)/ 圓圓球莖個個數(shù)1000 %。幼苗生生根率= 生根根幼苗數(shù)數(shù)/ 幼幼苗數(shù)1000 %。 壯苗、馴化與與移栽：壯苗。1/2MSS，7 %瓊脂, pHH 5.455.6，566周后植植株長出出粗壯的的根系。光照22 0000 llx；容器：23 cm30 cm

5、8 ccm四周周鏤空的的塑料框框；將瓶苗苗從培養(yǎng)養(yǎng)室(恒恒溫室)移至與與外界相相通的室室內(nèi)放置置2 d后后,去瓶瓶蓋煉苗苗3 - 7 d,洗洗凈瓶苗苗根部的的培養(yǎng)基基,用110000倍甲基基托布津津或多菌菌靈浸泡泡組培苗苗根部,放置于于通風陰陰涼處晾晾干水分分至根系系發(fā)白變變軟,即即可用于于移栽；基質。水苔和和谷(麥麥)殼22：河沙11：珍珠巖巖1（體積,是大花花蕙蘭組組培苗假假植的理理想基質質；白天平平均溫度度在200 以上,夜間溫溫度在115 左右。假植相相對濕度度控制在在80%以上。晴天上上午100: 000至下下午5: 000,作770%的的遮蔭處處理，大花蕙蕙蘭剛出出瓶的植植株很小小

6、、十分分脆弱, 放置置處要求求光照弱弱，種后用用噴霧器器將苗株株與植材材噴灑到到濕潤為為止。每每天向葉葉片噴水水數(shù)次, 保持持濕潤, 切忌忌過干或或過濕。10 天后才才逐漸增增加給水水量。良良好的澆澆水管理理措施、可大大大提高瓶瓶苗移栽栽成活率率。瓶苗苗移栽220 天天以后新新根長出出, 可可逐漸增增加光照照強度。每周進進行1 次根外外追肥，可用“花寶11 號”或“通用肥肥”20000 倍倍液噴灑灑。（3）討論論在原球球莖增殖殖的繼代代培養(yǎng)中中,200255 d 繼代11 次較較為合適適,此時時產(chǎn)生的的原球莖莖未充分分成熟,增殖率率較高,且顏色色為鮮綠綠色;330 dd 以后后新生的的原球莖莖

7、充分成成熟,增增殖率會會有所降降低,顏顏色轉為為深綠色色;原球球莖切割割塊的大大小以直直徑0. 5 cm為為適宜,過小易易死亡降降低增殖殖率,過過大增殖殖率也有有所降低低；在培養(yǎng)養(yǎng)基中加入22 g/ L AC活活性碳可可以有效效的降低低褐變率率；分化及及生根培培養(yǎng)時原原球莖切切割的塊塊越大分分化的越越早,幼幼苗長得得越壯;同一培培養(yǎng)基中中培養(yǎng)的的時間越越長分化化率越高高;分化化和生根根可以同同步進行行。（4）實例例大花花蕙蘭雜雜交新品品種西維亞亞、瑪利蓮蓮夢露、蒙米拉拉絲、女皇為材料料，把母株株放在溫溫室內(nèi)盆盆栽培養(yǎng)養(yǎng),于22 月底底4 月初陸陸續(xù)從母母株上取取8 ccm 左左右的新新芽,從從

8、基部切切離,用用自來水水沖洗,再用洗洗潔凈溶溶液浸泡泡5 mmin ,自來來水沖洗洗10 minn ,剝剝?nèi)プ钔馔鈳讓尤~葉片,并并剪去芽芽的上半半段. 然后在在超凈工工作臺上上采用33 步滅滅菌處理理法處理理:先在在70 %的酒酒精中處處理6 s ,立即投投入100 %次次氯酸鈉鈉溶液中中10 minn ,稍稍加搖動動,取出出后用無無菌水沖沖洗,剝剝?nèi)ネ鈱訉?33 片葉葉; 再再放入55 %的的次氯酸酸鈉溶液液5miin ,取出后后無菌水水沖洗,剝至最最后一枚枚葉片;再放入入1 %的次氯氯酸鈉溶溶液1 minn ,取取出后無無菌水沖沖洗數(shù)次次.以上上次氯酸酸鈉溶液液中均加加入Twweenn -

9、 60 以利殺殺菌劑更更有效地地發(fā)揮作作用. 在無菌菌條件下下剝出約約5 mmm 長長的莖尖尖,以生生長點為為中心,用解剖剖刀把莖莖尖切成成4 個個小方塊塊,分別別接入已已準備好好的培養(yǎng)養(yǎng)基上.培養(yǎng)養(yǎng)條件：pH 5. 255. 66 ,蔗蔗糖2 % ,瓊脂條條0. 6 %0. 855 % ,溫度度2225,光照照強度22 0000 llx ,每日光光照122 h。培養(yǎng)基基配方：誘導原原球莖最最佳激素素配比為為KT 0. 05 mg/L ,NAAA 0. 5 mg/L，利于原原球莖增增殖的培培養(yǎng)基為為改良KKC + KTT 0. 055 mgg/L + NAAA 00. 55 mgg/L ,以半

10、固固體培養(yǎng)養(yǎng),加香香蕉泥為為佳,增增殖率為為4. 1. 利于生生根壯苗苗的培養(yǎng)養(yǎng)基為改改良KCC + NAAA 0. 2 mg/L ,以固體體培養(yǎng)為為佳。討論：滅菌處處理：大花蕙蕙蘭屬熱熱帶氣生生蘭,靠靠根系附附著在林林中樹木木及巖石石上生長長,多數(shù)數(shù)種類有有內(nèi)生菌菌共生. 因此此外植體體滅菌采采用3 步處理理. 據(jù)據(jù)筆者經(jīng)經(jīng)驗,大大花蕙蘭蘭外植體體滅菌比比其它植植物有一一定難度度. 我我們曾采采用抗生生素處理理,效果果不佳. 對于于供試品品種是否否由于存存在內(nèi)生生菌而引引起外植植體滅菌菌處理困困難,以以及內(nèi)生生菌在植植物體內(nèi)內(nèi)的分布布傳播情情況有待待進一步步研究； 培養(yǎng)養(yǎng)基添加加香蕉泥泥：對

11、大花花蕙蘭增增殖和分分化有明明顯的促促進作用用,這與與香蕉泥泥中的有有機質和和天然激激素有關關,同時時能使培培養(yǎng)物在在適宜的的酸性條條件下生生長；原球莖莖切塊細細小、稀稀疏的培培養(yǎng)瓶內(nèi)內(nèi),群體體生長較較慢,而而切塊較較大且密密集的瓶瓶內(nèi),生生長十分分健壯,表現(xiàn)類類似于群群體生長長效應. 因此此切割時時不可過過細,直直徑要在在2 mmm 以以上,每每瓶可接接種300 多個個培養(yǎng)塊塊,可使使瓶內(nèi)營營養(yǎng)得以以充分利利用；接種時時,采用用大罐頭頭瓶把培培養(yǎng)塊11 次夾夾入或鏟鏟入,稍稍加晃動動半固體體培養(yǎng)基基即可使使培養(yǎng)塊塊分散開開來,既既節(jié)約時時間、成成本,又又降低了了污染率率； 用改改良KCC(無

12、機機鹽減半半) 培培養(yǎng)大花花蕙蘭,無機鹽鹽用量比比其它報報道用MMS 培培養(yǎng)基大大大減少少,增殖殖分化效效果均佳佳. 采采用降低低瓊脂用用量制成成半固體體培養(yǎng)基基可簡化化接種步步驟,而而且培養(yǎng)養(yǎng)塊浸在在培養(yǎng)基基內(nèi),降降低了培培養(yǎng)塊黃黃枯和切切口褐化化的機會會. 定定期搖動動培養(yǎng)瓶瓶,能使使培養(yǎng)瓶瓶內(nèi)營養(yǎng)養(yǎng)得以充充分利用用. 無無機鹽和和瓊脂在在培養(yǎng)成成本中占占有很高高的比例例,采用用以上技技術可大大大節(jié)約約成本,利于大大規(guī)模生生產(chǎn)應用用；用自來來水代替替蒸餾水水,用綿綿白糖代代替蔗糖糖,用廉廉價的瓊瓊脂條代代替瓊脂脂粉,降降低了成成本,效效果沒有有絲毫降降低. 由于大大花蕙蘭蘭原球莖莖增殖不不

13、必用小小容器和和相對較較高的罐罐頭瓶,可用透透光性好好的大容容器代替替； 采用用1 次次定植,不經(jīng)移移栽,可可以減少少對幼苗苗根系的的損傷和和節(jié)約人人力. 只要保保證溫室室內(nèi)相對對濕度,對成活活率無顯顯著影響響,但組組培苗前前期生長長緩慢。石斛蘭的的組織培培養(yǎng)石石斛蘭為為蘭科(Orcchiddaceeae)石斛屬屬(Deendrrobiium)植物物,為附附生蘭,與卡特特蘭(CCatttleyya)、蝴蝶蝶蘭( Phaalaeenoppsiss) 、萬代蘭蘭(Vaandaa)并列列為觀賞賞價值最最高的“四大觀觀賞洋蘭蘭”。石斛屬屬是蘭科科中僅次次于石豆豆蘭屬(B uulboophyylluum

14、 )的第二二大屬,全世界界共有11 0000多個個原生種種,分布布區(qū)域廣廣,主要要在亞洲洲的熱帶帶和太平平洋島嶼嶼的東亞亞、東南南亞及澳澳大利亞亞等地區(qū)區(qū)。我國石斛斛屬植物物共有774種22變種,主要分分布于秦秦嶺以南南諸省區(qū)區(qū),尤以以云南南南部最多多。石斛中中的鐵皮皮石斛、金釵石石斛等是是名貴藥藥材，石解蘭蘭卻是一一種觀賞賞價值很很高的花花卉, 其花色色繁多艷艷麗、 花型型大、 花枝枝長、 花多多。 春石石斛節(jié)生生型主要要作為盆盆栽品種種, 秋秋石斛蝶蝶花型主主要作為為切花， 也可可以用來來進行造造型后盆盆栽。在繁殖殖上, 因為幾幾乎所有有的觀賞賞類石解解都是雜雜種, 不能用用種子播播種得到

15、到大量與與親代形形狀一致致的植株株，分株和和高位芽芽扦插繁繁殖則速速度很慢慢，一般在在1年中的的繁殖速速度為22-3倍倍， 通過過莖尖組組織培養(yǎng)養(yǎng)技術產(chǎn)產(chǎn)生原球球莖，在原球球莖階段段進行增增殖培養(yǎng)養(yǎng)和分化化，使原球球莖繁育育成小植植株，效效率很高高。石斛斛蘭增殖殖的另一一途徑就就是用通通過芽的的增殖方方式形成成再生植植株。1石石斛蘭組培快快繁材料料與方法法材材料：選取生生長健壯壯的3-5cmm石斛蘭蘭新生芽芽，取莖莖尖為材材料，先先用自來來水沖洗洗干凈，再用775的的酒精處處理8ss；后用用0.11升汞汞滅菌110miin，最最后用無無菌水沖沖洗4、5次，在無菌菌的環(huán)境境里在顯顯微鏡下下剝?nèi)∏o

16、莖尖組織織作為外外植體，接種于于無菌的的設計的的培養(yǎng)基基上。培養(yǎng)基基及培養(yǎng)條件件：芽的誘誘導。MsNAAA1.00mg/L66-BAA4.00mg/LKKT1.0mgg/L，pH55.0-5.44，溫度度為2552，漫射射光（不不開日光光燈）。芽的增增殖和分分化。MsNAAA1.00mg/L66-BAA4.00mg/LKKT1.0mgg/L，pH55.0-5.44。壯苗生根根。1/22MsIBAA2.00mg/L 肌醇22.0mmg/LL水水解酪蛋蛋白1.0g/L+ 香蕉泥泥1.00g/LL 。移栽基質質。磚粒：木炭炭： 椰糠糠為4：1：11（體積積比）結果觀觀察芽芽的誘導導。將莖尖尖接于芽芽

17、的誘導導培養(yǎng)基基，經(jīng)過400d的培培養(yǎng)，誘誘導出不不定芽。石斛蘭蘭為復莖莖性蘭花花，較適適于用莖莖尖作為為其快速速繁殖的的外植體體。研究究表明，帶1-2個葉葉原基的的莖圓錐錐成活率率高，不不易褐化化而致死死亡。 芽的的增殖培培養(yǎng)。將生長長至1-1.55cm 的不定定芽切下下，分別別轉接于于芽的增增殖和分分化培養(yǎng)養(yǎng)基，30dd，芽芽增殖倍倍數(shù)為12倍倍。壯苗苗生根。選取生生長健壯壯、高22cm以以上的單單個芽體體接入壯壯苗生根根培養(yǎng)基基，60dd，生根根率達1100，且植植株根系系發(fā)達粗粗壯，形形成完整整的石斛斛蘭小植植株。由由于根的的分化形形成，加加快了植植株對營營養(yǎng)的吸吸收，促促進了莖莖葉的

18、生生長，達達到了壯壯苗生根根的目的的。添加加一定量量的香蕉蕉泥有助助于石斛斛蘭根系系的分化化。試管苗苗的移栽栽。當石斛斛蘭試管管苗長55-7ccm高高， 有3片以上上真葉/ 時，就可進進行移栽栽。出瓶瓶前將瓶瓶苗移至至自然漫漫射光的的室內(nèi)煉煉苗7dd，以增增強試管管苗對室室外環(huán)境境的適應應力，提提高其移移栽成活活率。移移栽前先先洗凈試試管苗根根部培養(yǎng)養(yǎng)基，用用0.22甲基基托布津津溶液浸浸泡155minn，然后后移栽基基質中。小苗移移栽后應應澆透水水，放入入溫室大大棚內(nèi)，定根前前要控制制水分，只要保保持葉面面及基質質濕潤即即可。石石斛蘭較較適宜生生長的溫溫度為115-225，空氣氣相對濕濕度為

19、770-880。 討論：春石斛用用芽增殖殖方式獲獲得再生生植株以春石斛斛盆苗的的莖段側側芽為材材料。剪剪取春石石斛的莖莖,剝離離葉片后后流水沖沖洗300 miin 以以上,770 %的酒精精浸數(shù)秒秒,用無無菌水沖沖洗1次次,再用用0. 1 %的升汞汞液浸88minn ,最最后用無無菌水沖沖洗8 次,獲獲得無菌菌外植體體。將經(jīng)經(jīng)過滅菌菌處理后后的春石石斛的莖莖在無菌菌培養(yǎng)皿皿內(nèi)切成成222. 55 cmm的莖段段,每一一莖段上上有1 個莖節(jié)節(jié)。將此此莖段接接種在培培養(yǎng)基中中誘導側側芽生長長,培養(yǎng)養(yǎng)條件均均為:溫溫度(225 2),光照照為122 h/ d，光強116000Lx，誘導培培養(yǎng)基：MS

20、 + BBA0. 5 mg/ L + NNAA00. 11 mgg/ LL。90dd后誘導導出芽，轉接至至MS + BBA0. 5 mg/ L + 22 ,44-D 00. 22 mgg/ LL促芽生長長，90dd長至約約2cmm，轉接接于增殖殖培養(yǎng)基基MS + BBA 33. 00 mgg/ LL + NAAA 0. 2 mg/ L，30dd，增殖殖約2倍；鐵皮石斛斛根尖誘誘導后用用芽增殖殖選擇生長長健壯、根長為為3 ccm 左左右的鐵鐵皮石斛斛無菌苗苗, 用用刀片小小心切除除根冠后后, 取取長約00. 330. 5 cm 的根尖尖分生組組織平放放于培養(yǎng)養(yǎng)基中培培養(yǎng)。基基本培養(yǎng)養(yǎng)基為BB5，

21、入蔗糖糖30 g/L , 瓊脂脂6.11 g/L , pHH 5.8。 培養(yǎng)養(yǎng)條件為為(2551), 光光照強度度為8000Lx, 持續(xù)光光照。誘導培培養(yǎng)基：B5+0. 5mgg/L224-DD+ 0. 5mmg/LLNAAA+ 3. 0mmg/LL6-BBA，出出愈率、類原球球莖形成成率、芽形成成率最好好。將類原原球莖轉轉接到BB5+ NNAA 0. 5mgg/L + 100% 椰椰子汁的的培養(yǎng)基基中進行行分化增殖殖培養(yǎng), 類原原球莖逐逐漸變長長, 其其頂端分分生組織織先分化化出芽, 然后后葉原基基進一步步發(fā)育成成幼葉。稍后, 在其其基部出出現(xiàn)根原原基, 根原基基細胞分分裂延伸伸為根, 內(nèi)部

22、部分化出出維管束束, 最最后形成成完整的的幼苗。同時，類原球球莖在分分化的同同時, 也會不不斷增殖殖, 產(chǎn)產(chǎn)生許多多新的類類原球莖莖, 最最后逐漸漸形成叢叢生小芽芽。兩種種不同途途徑產(chǎn)生生的類原原球莖的的分化能能力有明明顯不同同, 由由根尖直直接產(chǎn)生生的類原原球莖在在分化培培養(yǎng)基中中絕大多多數(shù)都能能分化成成小苗, 而由由愈傷組組織分化化而來的的類原球球莖分化化能力很很弱, 大多數(shù)數(shù)最終褐褐化死亡亡。根尖尖直接再再生芽:根尖, 除產(chǎn)產(chǎn)生一定定比例的的類原球球莖外, 還出出現(xiàn)根尖尖分生組組織直接接分化成成芽的現(xiàn)現(xiàn)象，適宜培培養(yǎng)基是是B5 (微微量元素素減為11/3 ) + 1% 芋頭汁汁，但頻頻率

23、低；鐵皮石斛斛叢生芽芽的增殖殖：將從日本本引進的的生長旺旺盛的鐵鐵皮石斛斛健康植植株,以以莖芽為為中心剪剪下,芽芽的上下下各留00. 55 cmm的莖段段,用洗洗衣粉浸浸泡200 miin左右右, 取取出后再再用自來來水反復復沖洗數(shù)數(shù)次,用用75%的酒精精溶液滅滅菌300 s,然后用用無菌水水沖洗11次,將將莖段腋腋芽的苞苞葉撥去去,然后后將0. 1%的HggCl22 溶液液倒入燒燒杯中滅滅菌100 miin,滅滅菌過程程中不斷斷搖動燒燒杯使滅滅菌更加加徹底,最后用用無菌水水沖洗556次次將HggCl22 溶液液沖凈并并接種到到培養(yǎng)基基上。培培養(yǎng)條件件，溫度222 ,光照照12 h/dd,光照

24、照強度為為2 0000 lx。鐵皮石石斛叢生生芽的增增殖培養(yǎng)養(yǎng)基為MSNAAA0. 3 mmg/LL 6-BA55 mgg/L，一個芽芽30 d后芽增殖殖數(shù)可達155個。當當生長到到60 d時達達到鐵皮皮石斛的的最高生生長點。將大小小達34 ccm的無無根苗切切割成單單苗，轉轉培養(yǎng)基基為MSS + 6-BA22 mgg/L+ 200%香蕉蕉汁，20 d左右右小苗的的莖節(jié)上上開始出出現(xiàn)根的的分化,接種330 dd后小苗苗長出淺淺綠色長長度0. 81 ccm、直直徑0. 10. 2 ccm的小小根, 60 d后根根長度最最長可達達5 ccm以上上，生根率率95%，平均根根數(shù)4. 5條條。2實例鐵皮

25、石石斛的愈愈傷組織織的誘導導鐵鐵皮石斛斛采自野野生。嫩嫩葉用自自來水沖沖洗干凈凈，先用775%的的乙醇對對鐵皮石石斛嫩葉葉進行表表面消毒毒, 再再用0.1%的的HgCCl2 滅菌菌588minn, 用用無菌水水沖洗33次。將將已滅菌菌的石斛斛嫩葉, 在無無菌條件件下切成成3mmm2。培養(yǎng)養(yǎng)基為N66-BA11.0mgg/L蔗糖220 gg/L和和瓊脂88 g/L, pH55.8，培養(yǎng)溫溫度255 , 日日光燈照照射, 光照強強度1 50002 0000 lx, 122 h /d。接種99 d后后,嫩葉葉開始出出現(xiàn)愈傷傷組織。紫皮石石斛蘭其其原球莖莖的增殖殖和分化化材材料是紫皮石石斛蘭的的種子無

26、無菌苗 ，將紫紫皮石斛斛蘭無菌菌苗的原原球莖接接入增殖殖培養(yǎng)基基中，培養(yǎng)基基為MS，pH 5. 4 ,蔗糖220330 gg/ LL , 活性碳碳5 gg/ LL,瓊脂脂7 gg/ LL 。溫度224226 ,133 h/d,光光照強度度3 0000 lx。1 個個月后增增殖倍數(shù)為99. 55 倍。將增殖殖后的紫紫皮石斛斛蘭原球球莖接種種于分化化培養(yǎng)基基上：6-BA 0. 2 mmg/ L + NAAA 11. 55 mgg/ LL ，40 d 后后調(diào)查分分化率，達到887.55%。將將分化的苗苗轉入440g/ LMS 脫水培培養(yǎng)基（商店可可買）作作為生長長培養(yǎng)基基 ,11個月后后苗粗壯壯、根

27、系發(fā)發(fā)達、葉片紫紫綠,長長勢比較較好。移栽栽，將組培培所得的的紫皮石石斛蘭苗苗移入溫溫室,練練苗3 d 后后移栽。移栽前前先洗凈凈組培苗苗根部培培養(yǎng)基,用500 %的的多菌靈靈可濕性性粉劑11 0000 倍倍液浸泡泡10 minn ,然然后移入入苔蘚基基質中,移栽成成活率為為32 %。廣東石石斛的組組織培養(yǎng)養(yǎng)將將約3 cm長長且生長長健壯的的幼芽從從母株上上采下，自來水水沖洗11 h，去掉外外部葉片片，先用用75% 酒精精消毒330 ss，再用用0.11% 升升汞溶液液(加11 滴吐吐溫)消消毒100 miin，無無菌水沖沖洗68次，用消毒毒濾紙吸吸干表面面水分，接種到到原球莖莖誘導培培養(yǎng)基：

28、1/22MS+6-BBA3.0 mmg/L+NNAA 0.55mg/L，蔗糖濃濃度3.0%，瓊脂77.0 g/L，ppH 55.8。培養(yǎng)溫溫度(2262)，連續(xù)續(xù)光照112 hh/d，光光照強度為22 0000Lx。115 dd 左右右莖節(jié)處處開始膨膨大，330 dd 以后后逐漸有有綠色原原球莖長長出。將將獲得的的原球莖莖轉接叢叢生芽誘誘導及增增殖培養(yǎng)養(yǎng)基：花花寶1 號3 g/L+66-BAA 1.0 mmg/L+NNAA00.055 mgg/L+ 椰汁1100 g/L+ 活性炭炭(ACC) 00.5 g/L，蔗糖濃濃度3.0%，瓊脂77.0 g/L，ppH 55.8，進行叢叢生芽誘誘導培養(yǎng)養(yǎng)

29、，培養(yǎng)環(huán)境境同上，20 d 時時由原球球莖上長長出綠色色叢生芽芽。將叢叢生芽再再次轉入入新鮮叢叢生芽誘誘導及增增殖培養(yǎng)養(yǎng)基：即即花寶11 號33 gL-11+6-BA 1.00mg/L+NNAA00.055mg/L+ 椰汁1100 g/L+ 活性炭炭(ACC) 00.5 g/L中繼繼續(xù)培養(yǎng)養(yǎng)，300 d 為1 個繼代代增殖周周期，增增殖倍數(shù)數(shù)可達55倍。將叢叢生芽接接到壯苗苗培養(yǎng)基基：1/2MSS+6-BA 0.55mg/L+NNAA 0.005mgg/L+ 椰汁1100 g/L+AAC 00.5 g/L，蔗蔗糖濃度度3.0%，瓊脂脂7.00 g/L，ppH 55.8培培養(yǎng)叢生生芽逐漸漸長大成成苗。將將大約33 cmm長且生生長健壯壯的無根根苗切割割成單個個苗接入入生根培