關(guān)木通及其炮制品中馬兜鈴酸A的含量變化

1、關(guān)木通及其炮制品中馬兜鈴酸A的含量變化【摘要】目的考察關(guān)木通藥材及其炮制品中馬兜鈴酸A的含量變化。方法采用高效液相色譜法HPL檢測。色譜條件：色譜柱為Lihrspher-18柱4.6200，5，流動相為甲醇-0.1%冰醋酸溶液(7030)，流速1.0l/in,檢測波長310n，柱溫為30。結(jié)果炒焦、滑石粉炒、麩炒3種炮制品中的馬兜鈴酸A含量均較生品有所降低,并且滑石粉炒后的炮制品降低率最高。結(jié)論這3種炮制方法可以降低關(guān)木通中馬兜鈴酸A的含量，到達了降低毒性的目的?！娟P(guān)鍵詞】關(guān)木通炮制品馬兜鈴酸A關(guān)木通為馬兜鈴科植物東北馬兜鈴AristlhiaanshuriensisK.的枯燥藤莖，主要含馬兜鈴

2、酸類化合物。近年來，關(guān)于馬兜鈴酸引起腎損害的報道較多，稱之為馬兜鈴酸腎病1。雖然含馬兜鈴酸的中藥腎毒性是確定無疑的，但同時該類中藥使用歷史悠久，療效確切，臨床使用廣泛，假如因噎廢食，采取一刀切的方法，全部取消含馬兜鈴酸中藥在臨床上的使用，既不可能，也不現(xiàn)實。中藥的應用是以傳統(tǒng)炮制和復方配伍為特色的。關(guān)于關(guān)木通的復方配伍降低毒性的研究目前有很多，但是用傳統(tǒng)炮制方法是否能降低其毒性尚未見系統(tǒng)研究報道。為降低毒性，本實驗以炒焦、滑石粉炒和麥麩炒這3種方法對關(guān)木通進展處理2，并采用HPL法測定了關(guān)木通藥材及其炮制品中馬兜鈴酸A的含量，定量分析關(guān)木通炮制前后其馬兜鈴酸A的含量變化，從一個側(cè)面討論中藥炮制

3、理論的根據(jù)。1儀器與試藥日本島津L-10ADVP高效液相色譜儀，島津SPD-10AVP紫外檢測器，H色譜工作站。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水，其余試劑均為分析純。馬兜鈴酸A對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110746-202206)；關(guān)木通藥材經(jīng)南京中醫(yī)藥大學藥學院生藥教研室王春根教授鑒定。2方法與結(jié)果2.1色譜條件采用Lihrspher-18柱4.6200，5,流動相為甲醇-0.1%冰醋酸溶液(7030)；流速1.0l/in；檢測波長310n；柱溫為30；進樣20l。色譜圖見圖12。圖1馬兜鈴酸A對照品的HPL圖略圖2關(guān)木通藥材的HPL圖略2.2溶液的制備2.2.1供試品及炮制品的制備取

4、關(guān)木通原藥材，除去雜質(zhì)，過40目篩。炒焦：稱取關(guān)木通飲片100.0g，置炒制容器內(nèi)，用中火加熱，炒至外表焦黃或焦褐色，斷面深黃色，有香氣逸出，取出，晾涼，裝至密封袋封口。滑石粉炒：稱取關(guān)木通飲片50.0g，滑石粉20.0g。先將滑石粉至熱鍋內(nèi)，用中火加熱炒至靈敏狀態(tài)時，投入關(guān)木通飲片，不斷翻炒，炒至飲片外表顏色加深時，取出，篩去滑石粉，晾涼，裝至密封袋封口。麩炒：稱取關(guān)木通飲片100.0g，麥麩10.0g。先將鍋燒熱，撒入麥麩，用中火加熱，待冒煙時投入關(guān)木通飲片，不斷翻炒，炒至深黃色時，取出，篩去麥麩，晾涼，裝至密封袋封口。2.2.2對照品溶液的制備精細稱取在五氧化二磷枯燥器中真空枯燥至恒重的

5、馬兜鈴酸A對照品適量，加甲醇溶解，制成每毫升含1.025g的溶液，作為母液。精細汲取1.025g/l的母液4l，加甲醇定容至50l的量瓶，得0.082g/l的對照品溶液，備用。2.2.3供試品溶液的制備精細稱取關(guān)木通樣品粉末2g，置圓底燒瓶中，參加甲醇30l/20l，水浴加熱回流提取2次，第1次2h，第2次1h，濾過,合并濾液，回收甲醇后，定容至25l量瓶中；取1l并定容至10l量瓶中，即作為藥材供試品溶液。按該法制得“2.2.1項下3種炮制品的供試品溶液。每種供試品均按此法做3份。2.3線性關(guān)系考察精細汲取濃度為0.082g/l的對照品溶液1，2，3，4，5，6l，甲醇稀定容釋至10l。在上

6、述色譜條件下進樣20l進展測定。以濃度g/l為橫坐標，以馬兜鈴酸A平均峰面積Y為縱坐標進展線性回歸，得回歸方程，=410-5Y-0.4665，r=0.9998，線性范圍是8.249.2g，結(jié)果說明馬兜鈴酸A在8.249.2g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4精細度實驗精細汲取濃度為24.6g/l的對照品溶液20l，連續(xù)進樣5次，測得馬兜鈴酸A峰面積值的RSD為1.11%,結(jié)果說明精細度良好。2.5穩(wěn)定性實驗精細汲取同一份藥材供試液20l，分別于0，3，6，9，12，15h進樣，記錄峰面積,其RSD為1.15%，結(jié)果說明在15h內(nèi)根本穩(wěn)定。2.6重復性實驗精細稱取同一批關(guān)木通藥材2g,共5份，用與“2.

7、2.3項下一樣的方法制得供試液，測得的馬兜鈴酸A的含量RSD=2.80%，結(jié)果說明重復性良好。2.7加樣回收率實驗精細稱取含量的關(guān)木通藥材1g，共6份，分別置圓底燒瓶中，各精細參加一定量的馬兜鈴酸A對照，用與“2.2.3項下一樣的方法制得供試液。結(jié)果見表1。表1馬兜鈴酸A加樣回收率實驗結(jié)果略2.8藥材及炮制品的測定精細汲取各供試液20l，注入液相色譜儀，各進3針，樣品色譜圖見附圖用外標一點法計算含量見表2。由關(guān)木通生藥材和炮制品含量測定結(jié)果計算，生藥材與各炮制品之間馬兜鈴酸A含量有顯著性差異(P0.01)。表2關(guān)木通原藥材及炮制品中馬兜鈴酸A的含量略3討論穩(wěn)定性實驗結(jié)果說明，供試品溶液立即測定

8、與放置24h后測定的相對標準差在測定誤差范圍內(nèi)，供試液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。馬兜鈴酸是3，4-次甲二氧基-10-硝基-1-菲酸的衍生物，具有羧基3。本實驗供試品圖譜中主成分峰前有一雜質(zhì)峰，最初采用甲醇-水作為流動相，結(jié)果峰形對稱性不好，峰形寬，理論塔板數(shù)低，別離度達不到1.5以上，同一份樣品屢次進樣重復性和穩(wěn)定性差，參加冰醋酸后，別離度到達1.7，峰形可以得到改善，樣品重復性好，穩(wěn)定性好，隨著甲醇的比例增大，保存時間縮短。本法簡單，準確，快捷，可作為關(guān)木通藥材中馬兜鈴酸A的含量測定方法。關(guān)木通在中國有悠久的用藥歷史和堅實的臨床根底,常配伍使用,幾乎不單獨應用。本實驗中考察了關(guān)木通炮制前、后馬兜鈴酸A煎出量的變化,結(jié)果說明,炮制后馬兜鈴酸A的煎出量較炮制前關(guān)木通藥材明顯降低,從一個側(cè)面說明了通過炮制降低關(guān)木通毒性的合理性。另外,這3種炮制方法均是以藥化的角度來考慮的，但是藥理上是否一致，還需要進一步的實驗研究?！緟⒖嘉墨I】