高效液相色譜法測定烏梅中檸檬酸的含量

1、高效液相色譜法測定烏梅中檸檬酸的含量【摘要】目的采用高效液相色譜法測定中藥烏梅中檸檬酸的含量。方法選用HypersilDS柱4.6200，5，流動相為0.025l/LNa2HP4溶液pH=2.5，流速為0.7l/in，柱溫為25，檢測波長為214n，外標法定量。結(jié)果檸檬酸線性范圍為3.09.0g，r=0.9998，平均回收率為99.86%RSD=2.0。結(jié)論該方法簡便、準確、穩(wěn)定、可靠，可用于烏梅的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜法；烏梅；檸檬酸DeterinatinfitriaidntentinfrutusuebyHPL【Abstrat】bjetiveTdeterinethententfit

2、riaidntentinFrutusuebyHPL.ethdsAHypersilDSlun(4.6200，5)asusedasstatinaryphaseand0.025l/LNa2HP4(pH=2.5)asusedasbilphaseith214nfrdetetinavelength.Theflrateas0.7l/inandthelunteperatureas25.Thequantitativeanalysisusedexternalstandardethd.ResultsThelinearrangefitriaidas3.09.0g(r=0.9998).Theaveragereverya

3、s99.86%(RSD=2.0).nlusinTheethdissiple，aurate，stableandreprduible，andanbeappliedtqualityntrlfFrutusue.【Keyrds】HPL;frutusue;itriaid烏梅Frutusue為薔薇科植物梅PrunusueSieb.Sibe.EtZu.的枯燥近成熟果實，酸、澀，平，歸肝、脾、肺、大腸經(jīng)，具有斂肺，澀腸，生津，安蛔之成效1。用于肺虛久咳，久痢滑腸，虛熱消渴，蛔厥嘔吐腹痛，膽道蛔蟲等癥。果實含有機酸如檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸等，萜類，甾醇，氨基酸，糖類，揮發(fā)性成分，黃酮類，生物堿，微量元素Fe、g、

4、u等2。?中國藥典?2022年版采用電位滴定法測定烏梅中總有機酸的含量，本文采用HPL法測定烏梅中檸檬酸的含量，為中藥烏梅及含烏梅的中藥制劑的含量測定提供根據(jù)。1儀器與試劑1.1儀器aters高效液相色譜儀：aters515泵、aters2487雙波長檢測器，Eper2色譜工作站，DHG-9240A型電熱恒溫鼓風枯燥箱，BS224S型萬分之一電子天平，回流裝置等。1.2藥品與試劑檸檬酸AR，含一分子結(jié)晶水；烏梅：產(chǎn)地峨眉，經(jīng)本院中藥鑒定教研室宋良科副教授鑒定，符合中國藥典要求；水為超純水；其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為HypersilDS柱2004.6，5；柱溫為25；

5、流動相為0.025l/LNa2HP4溶液pH=2.5；流速0.7l/in；檢測波長214n；進樣量20l。2.2溶液的配制2.2.1檸檬酸對照品溶液的配制精細稱取檸檬酸AR適量，加水溶解，制成0.5g/l的檸檬酸對照品溶液。2.2.2供試品溶液的制備分別取烏梅粗粉約4g，精細稱定，置錐形瓶中，精細加水100l，稱定重量，加熱回流4h，放冷，補足重量，濾過，搜集續(xù)濾液。精細量取續(xù)濾液1l于25l容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。2.3標準曲線分別精細量取0.5g/l檸檬酸對照品溶液3l、4l、5l、6l、7l、8l、9l于10l容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得7個不同濃度的對照品溶

6、液。分別進樣各20l，測定峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結(jié)果，檸檬酸在39g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：Y=4376.107+1824436X，r=0.9998。2.4精細度試驗精細量取0.5g/l檸檬酸對照品溶液6.0l，加水定容至10l，連續(xù)進樣5次進樣量20l，結(jié)果見表1、圖1，其峰面積的RSD=0.1%n=5。表1精細度試驗結(jié)果圖1檸檬酸對照品HPL圖略2.5供試品溶液的測定取烏梅藥材約4g，精細稱定，按2.2.2法制備，分別測定其檸檬酸含量。結(jié)果見表2、圖2，RSD=1.36%n=6。表2烏梅中檸檬酸含量測定結(jié)果圖2烏梅HPL圖略2.6穩(wěn)定性試驗精細汲取按

7、2.2.2制備的供試品溶液20l，每隔2h進樣2次，測定其峰面積，取其平均值，結(jié)果樣品峰面積在10h內(nèi)穩(wěn)定；RSD%=0.25%n=6。2.7回收率試驗取含量的烏梅藥材各2g，精細稱定，精細參加50.06g/l檸檬酸溶液10.0l、10.0l、7.5l、7.5l、5.0l、5.0l；按供試品溶液測定項測定，結(jié)果見表3。檸檬酸平均回收率為99.86%，RSD=2.0n=6。表3烏梅中檸檬酸含量測定結(jié)果3討論3.1?中國藥典?2022年版采用電位滴定法測定烏梅中總有機酸的含量據(jù)報道，有人曾在烏梅中別離出近10種有機酸：蘋果酸、檸檬酸、草酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、焦精谷氨酸、甲酸、乙酸、丙酸。其中最

8、主要的是蘋果酸和檸檬酸，且隨果實的不斷成熟，二者含量會有所變化，早期的蘋果酸含量大于檸檬酸，后期那么是檸檬酸含量大于蘋果酸。此外，烏梅藥材中還含有綠原酸、延胡索酸、酒石酸等有機酸3。因此，測定烏梅中檸檬酸的含量比測定總有機酸的含量對烏梅質(zhì)量更具可控性。3.2實驗所用檸檬酸為分析純，含有一分子結(jié)晶水一水檸檬酸容易失去結(jié)晶水，為確保所柄制的對照品溶液的濃度準確，采用了0.1l/L氫氧化鈉滴定液滴定檸檬酸的含量，再進展準確配制檸檬酸對照品溶液。3.3最大吸收波長檸檬酸的最大吸收波長為190n，經(jīng)實驗驗證在214n處吸收較好，峰形穩(wěn)定，而在其他波長處測定時效果較差。3.4檸檬酸為含有羧基和鄰二酚羥基的極性有機酸本實驗選用0.025l/L的Na2HP4溶液為流動相，將其pH調(diào)為2.5后，檸檬酸在酸性環(huán)境下能較好的游離出來，與其他物質(zhì)能很好地別離，出峰效果好?！緟⒖嘉墨I】1國家藥典委員會