大鼠腹主動(dòng)脈慢性移植物血管病模型的建立

1、大鼠腹主動(dòng)脈慢性移植物血管病模型的建立【關(guān)鍵詞】腹主動(dòng)脈移植慢性移植物血管病慢性排擠反響慢性排擠反響已成為阻礙移植物長(zhǎng)期存活的重要原因，慢性排擠反響最主要的病理特征是慢性移植物血管玻免疫性和非免疫性因素共同作用導(dǎo)致發(fā)生慢性移植物血管病1，2，至今無(wú)有效的藥物應(yīng)用于臨床，加強(qiáng)這方面的根底研究已經(jīng)顯得日益重要。通過(guò)建立簡(jiǎn)單、實(shí)用的動(dòng)物模型能更好開展慢性移植物血管病的根底研究。筆者建立大鼠腹主動(dòng)脈慢性移植物血管病模型，報(bào)告如下。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組隨機(jī)采用清潔級(jí)安康雄性封閉近交系Brn-Nray大鼠和近交系Leis大鼠。近交系Brn-Nray大鼠為供者，體重200350g，近交系Leis

2、大鼠為受者，體重200350g。所有大鼠均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)。實(shí)驗(yàn)分三組：對(duì)照組A為L(zhǎng)eis大鼠假手術(shù)組；對(duì)照組B為L(zhǎng)eisLeis大鼠間的同系腹主動(dòng)脈移植；實(shí)驗(yàn)組為Brn-Nray到Leis大鼠的異系腹主動(dòng)脈移植。三組分術(shù)后3、7、15、30、45、60d6個(gè)時(shí)相點(diǎn)，每個(gè)時(shí)相點(diǎn)各8對(duì)。1.2大鼠腹主動(dòng)脈移植模型的制備供、受體術(shù)前均予1%戊巴比妥鈉40g/kg腹腔注射麻醉，剪取供鼠Brn-Nr-ay腹主動(dòng)脈23，原位移植到受鼠Leis腹主動(dòng)脈。手術(shù)總時(shí)間5060in，血管吻合共約1618針，吻合約需2535in，大鼠一般術(shù)后2030in可以自行翻身。1.3病理組織標(biāo)本采集和形態(tài)學(xué)分析

3、手術(shù)后3、7、15、30、45、60d切取三組大鼠腹主動(dòng)脈，肝素鹽水沖洗血管腔，標(biāo)本置于4%甲醛固定后石蠟包埋，切片，并進(jìn)展HE染色，封片。應(yīng)用HIAS-2000顯微圖像分析系統(tǒng)采集圖片，每個(gè)標(biāo)本高倍視野下隨機(jī)取5處，測(cè)量增厚內(nèi)膜厚度，取平均值。2結(jié)果2.1成功率及存活情況共行96對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈移植實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組B和實(shí)驗(yàn)組分別6個(gè)時(shí)相點(diǎn)各8對(duì)，共成功施行72對(duì)，平均手術(shù)時(shí)間565in，平均冷缺血時(shí)間353in，其中麻醉意外3只，術(shù)后吻合口血栓9只，術(shù)后出血8只，術(shù)后腹腔膿腫4只，手術(shù)成功率75.0%。2.2組織學(xué)檢查對(duì)照組A血管內(nèi)膜無(wú)變化，內(nèi)膜細(xì)胞呈單層，排列整齊，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，中膜和外膜無(wú)明

4、顯改變。對(duì)照組B術(shù)后3、7、15、30、45、60d，血管內(nèi)膜無(wú)明顯變化，內(nèi)膜細(xì)胞呈單層，排列整齊，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，中膜和外膜無(wú)明顯改變，與對(duì)照組A管腔內(nèi)膜厚度比擬差異無(wú)顯著性P0.05。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后30d移植動(dòng)脈內(nèi)膜開場(chǎng)出現(xiàn)增厚，血管內(nèi)膜有淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。術(shù)后60d呈現(xiàn)出典型的移植相關(guān)血管硬化，內(nèi)膜明顯增生并呈同心圓增厚，管腔狹窄，大量成纖維細(xì)胞增生，內(nèi)膜可見少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，中層細(xì)胞壞死遷移，內(nèi)彈力纖維有斷裂，與實(shí)驗(yàn)組B管腔內(nèi)膜比擬差異有顯著性P0.01。2.3移植動(dòng)脈形態(tài)學(xué)測(cè)量HIAS-2000顯微圖像分析系統(tǒng)采集圖片，每個(gè)標(biāo)本高倍視野下隨機(jī)取5處，測(cè)量增厚內(nèi)膜厚度，取平均值見表1

5、。3討論1991年ennaander3首次報(bào)道建立大鼠腹主動(dòng)脈移植的方法。移植物冠狀血管病的動(dòng)物模型有同種異體腹主動(dòng)脈移植和同種異體心臟移植、腎臟移植模型。心臟和腎臟移植均需要純熟的顯微手術(shù)技巧，而且移植物血管病的改變易受到其他因素的影響4。目前最成熟的是同種異體腹主動(dòng)脈移植，這是一種簡(jiǎn)化的慢性移植物血管硬化模型，與以前的模型相比擬，手術(shù)操作相對(duì)簡(jiǎn)單。在手術(shù)過(guò)程中腹主動(dòng)脈與腔靜脈需別離清楚，一般需別離出1.01.5左右，由于靜脈壁極薄，腹主動(dòng)脈又緊貼腔靜脈，別離需要格外小心。同時(shí)游離腹主動(dòng)脈時(shí)容易損傷小動(dòng)脈及腔靜脈分支，而血管損傷容易造成術(shù)中出血。這部分在整個(gè)手術(shù)過(guò)程中是難度最大的地方。移植動(dòng)脈放置有利于縫合，進(jìn)出針順手，端端連續(xù)縫合，縫針不需要過(guò)密，總1618針即可。吻合方式根據(jù)個(gè)人習(xí)慣，筆者體會(huì)將上下兩端分別左右兩點(diǎn)固定后，用連續(xù)縫合方法分別將上下兩端的前層血管先吻合，然后穿插換線翻轉(zhuǎn)后暴露后層血管，連續(xù)吻合兩端的后層血管。這樣做的好處是在縫合的過(guò)程中血管始終保持一定張力，有利于分清兩層血管層次，更好暴露管腔吻合血管。模型建立初始