葉下珠有效部位總提取物對比格犬的長期毒性實驗

1、葉下珠有效部位總提取物比照格犬的長期毒性實驗【摘要】目的觀察葉下珠有效部位總提取物長期毒性實驗可能造成對機體的毒性反響。方法葉下珠有效部位總提取物470，210，90g/kg每天口服給藥1次；連續(xù)給藥45，90，180d及停藥后30d，觀察比照格Beagle犬生長發(fā)育以及血液學常規(guī)、血液生化指標、心電圖的影響；以及連續(xù)給藥180d和停藥后30d對主要臟器體重比、主要臟器病理形態(tài)的影響。結果對生長發(fā)育、血液學常規(guī)、心電圖均無影響。90g/kg：連續(xù)給藥90d，BUN，TP，Glu升髙明顯，T-H下降；但給藥180d及停藥后30d均恢復正常。210，470g/kg：ALT，ALP，Glu均顯著升髙

2、，TP，Alb，T-H顯者下降；肝細胞輕度濁腫、空泡變性。但上述毒性改變均于停藥后30d恢復正常。結論90g/kg組為平安劑量；210g/kg以上劑量為中毒劑量；停藥后可恢復正常?！娟P鍵詞】葉下珠提取物長期毒性StudynthehrniTxiityfTtalExtratsfYexiazhu(TEY)inBeagleDgKeyrds：TtalextratsfYexiazhu(TEY)inbeagledg；hrnitxiityinbeagledg筆者先后曾報道葉下珠有效部位總提取物一般藥理作用1，對大鼠長期毒性實驗結果2，均未發(fā)現(xiàn)本品對機體的毒性反響。國內(nèi)外均未見有關葉下珠長期毒性實驗的研究報道，

3、為更準確討論長期服用本品對機體的毒性反響，本研究報道葉下珠有效部位總提取物對Beagle犬長期毒性實驗結果。1材料1.1藥物葉下珠有效部位總提取物(下簡稱葉下珠)。每克相當于34g原生藥。藥物溶于水批號：9601。四川省中藥研究所藥化室提供。1.2動物Beagle犬，46月齡；雌8雄12；體重36kg/只左右。動物標準：一級；合格證號：川實動管質第63；四川養(yǎng)麝研究所供。飼料：按四川養(yǎng)麝研究所提供的飼料配方配制。1.3設施一級標準，合格證號為醫(yī)動字24103115號。地點：四川實驗動物中心。室溫控制在1629，相對濕度為70%75%。1.4試劑丙氨酸氨基轉移酶(ALT)，批號961101；門冬

4、氨酸氨基轉移酶(AST)，批號961101；堿性磷酸酶(ALP)，批號961101；尿素氮(BUN)，批號961014；肌酐(r)，批號961022；總蛋白(TP)，批號961007；白蛋白(Alb)，批號961007；葡萄糖(Glu)，批號961101；總膽固醇(T-H)，批號960627。以上檢測試劑盒均由重慶醫(yī)學試劑研制所提供。隱血試紙(大、小便)，批號96010315；三聯(lián)試紙(pH、蛋白、葡萄糖)，批號96040212。由廣州越秀區(qū)東方新科技研究所產(chǎn)。1.5儀器UV-730半自動生化分析儀，日本島津產(chǎn)；心電圖機(EG-6511)，上海光電儀器股份產(chǎn)；電子天平：EB-3200D型，日本

5、SHIADZU產(chǎn)；光鏡：德國LEITZ產(chǎn)。2方法132.1動物分組20條安康犬隨機分成4組，受試藥組設大、中、小3個劑量組，劑量分別為：470，210，90g/kg，分別相當于擬用臨床劑量的47，21，9倍；另設正常對照組，每組5只，雌雄均有。動物單籠飼養(yǎng)，每天定時籠外自由活動2h。藥前飼養(yǎng)7d，適應環(huán)境。受試藥物各劑量組和正常對照組于用藥180d各剖殺3只(21)，停藥后30d各剖殺2只(11)。2.2給藥途徑每天上午以少量飼料與受試藥拌飼。吃完后再飼喂飼料。每周按體重調整用藥量1次。2.3檢測工程及檢測時間實驗犬于用藥前，用藥45d、3個月、6個月及停藥后30d，抽靜脈血檢查血液學、血液生

6、化學、尿常規(guī)等。各項指標檢測方法分別為：ALT、AST，賴氏法；rea，堿性苦味酸法；BUN，二乙酰乙肟法；ALP，磷酸苯二鈉法；TP，雙縮脲法；Alb，溴甲酚綠法；T-H，氧化酶法；Glu，GD-PD法。尿常規(guī)用試紙法。心電圖，在站立清醒狀態(tài)下測二導聯(lián)心電圖。用藥過程中每天觀察動物外觀病癥，包括食欲，大、小便，毛色，活動情況。定時稱體重。藥后6個月及停藥后30d分別處理兩批動物。于抽血后股動脈放血處死動物。解剖后肉眼觀察各主要臟器有無病變，同時取心、肝、脾、肺、腎、胃、十二指腸、甲狀腺、胸腺、腎上腺、前列腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢等臟器稱重；所有臟器10%甲醛固定，石臘切片，HE染色；光鏡檢

7、查病變。所有數(shù)據(jù)以t檢驗處理。3結果3.1一般狀況給藥180d期間及恢復期各劑量組、正常犬的行為、活動、攝食、飲水、毛色、眼、耳、鼻、口及分泌物、大小便未見異常。藥前、給藥45，90，180d及停藥后30d檢查尿液隱血、蛋白質、葡萄糖均為陰性，pH68，均在正常范圍。3.2對犬體重的影響結果見表1。結果顯示各劑量組和正常對照組的犬根本保持同步增長的變化。給藥期間及恢復期，藥物對體重根本無影響。表1葉下珠有效部位總提取物對Beagle犬長期毒性實驗體重變化(略)3.3對犬血象的影響前肢靜脈采血，檢查血液學6項指標結果見表25。表2葉下珠有效部位總提取物對Beagle犬長期毒性實驗藥前血液學指標檢

8、查結果(略)表3葉下珠有效部位總提取物對Beagle犬長期毒性實驗給藥90d血液學指標檢查結果(略)表4葉下珠有效部位總提取物對Beagle犬長期毒性實驗給藥180d血液學指標檢查結果(略)表5葉下珠有效部位總提取物對Beagle犬長期毒性實驗停藥后30d血液學指標檢查結果(略)結果顯示，給藥90d，小劑量組的白細胞總數(shù)較正常對照犬有明顯下降，但與劑量未顯相關。大、中劑量組的凝血時間比正常對照組明顯減少。給藥180d小劑量組的凝血時間那么明顯延長，但均在3in范圍內(nèi)，且停藥后30d恢復?？梢哉J為各劑量組對血象未產(chǎn)生影響。3.4對犬血液生化指標的影響血液生化指標檢查10項結果見表69。結果顯示給

9、藥45d僅發(fā)現(xiàn)大劑量組肌酐偏高，其余各劑量組10項指標均未出現(xiàn)異常。表6對Beagle犬血液生化的影響藥前0d(略)表7對Beagle犬血液生化的影響藥后90d(略)表8對Beagle犬血液生化的影響藥后180d(略)表9對Beagle犬血液生化的影響(略)上述各項指標，停藥后30d恢復正常。說明其改變是可逆的。大、中劑量出現(xiàn)毒性反響，小劑量根本是正常的。3.5對犬心電圖、心率的影響給藥45，90，180d及停藥后30d，用EG-6511心電圖機測定清醒狀態(tài)下站立式的標準導聯(lián)犬心電圖，結果見表10。結果顯示，各劑量組心率、心電圖均未見異常。表10對Beagle犬心電圖的影響(略)3.6對犬臟器

10、體重比的影響股動脈放血處死動物。首先剖取甲狀腺、胸腺、腎上腺；剖腹檢查胸腔、腹腔、盆腔，未發(fā)現(xiàn)積液、炎癥；先后剖取心、肺、肝、脾、腎、胃、十二指腸、睪丸、附睪、前列腺、卵巢、子宮，并用EB-3200D型電子天平稱量。臟器體重比結果按t檢驗統(tǒng)計處理。結果見表11。表11對Beagle犬臟器指數(shù)的影響(略)主要臟器脾、肺、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺、睪丸、前列腺、子宮、卵巢的臟器體重比均未出現(xiàn)異常。心臟體重比：大、小劑量組未見異常，中劑量組明顯減小，但停藥后恢復。病理切片未發(fā)現(xiàn)病變。肝臟體重比：大、中劑量組未見異常；小劑量組偏大，停藥后恢復，病理切片未發(fā)現(xiàn)病變。腎臟體重比:3個劑量組藥后180d均未

11、發(fā)現(xiàn)異常，但停藥后30d，大劑量組偏大，病理切片檢查結果未發(fā)現(xiàn)病變。鑒于心、肝、腎臟器體重比異常均發(fā)如今個別劑量組，與劑量大小不相關，且停藥后恢復，其病理切片光鏡檢查又未發(fā)現(xiàn)病變，我們確定該藥對臟器體重比未產(chǎn)生影響。3.7主要臟器光鏡病理形態(tài)學檢查結果見表1213。表12對Beagle犬肝臟組織病理檢查結果略表13對Beagle犬甲狀腺、子宮、腎上腺組織病理檢查結果略結果顯示：各劑量組心、腎、腦、肺、脾、胃、十二指腸、卵巢、睪丸、附睪、前列腺、腎上腺、胸腺、甲狀腺均未發(fā)現(xiàn)毒理病變。肝臟病理切片檢查結果：小劑量組與正常對照組相似，未發(fā)現(xiàn)病變；大、中劑量組肝細胞發(fā)現(xiàn)輕度細胞濁腫，空泡變性，個別動物匯管區(qū)纖維增生，病變程度與劑量相關。但停藥后根本恢復。子宮病理切片光鏡檢查發(fā)現(xiàn)：中劑量組與正常對照組相似，未發(fā)現(xiàn)病變。大、小劑量組各有個別雌犬子宮肌層增厚，但增厚的肌細胞大小正常，停藥后根本恢復。與子宮相關的卵巢病理切片鏡檢均有不同時期卵泡，說明不影響排卵。病理切片光鏡檢查發(fā)現(xiàn)大劑量組有1只甲狀腺橋本氏變，另1只有子宮肌瘤，小劑量組1只有腎上腺囊腫1個，以上改變均為自發(fā)，與藥物無關。4結論犬長期口服大、中、小劑量毒性實驗證明：小劑量為無毒性劑量；大、中劑量為中毒劑量，主要表現(xiàn)為：ALT，ALP顯著升高，TP，Alb，T-H下降，Glu增高