DB1303-T188-2005牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程

1、B43DB秦皇島市地方標(biāo)準(zhǔn)DB1303/T10-31 實(shí)施牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程2005-10-31 實(shí)施2005-10-31 發(fā)布秦皇島市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布DB1303/T 1882005DB1303/T 188200511本標(biāo)準(zhǔn)由秦皇島市畜牧局提出；本標(biāo)準(zhǔn)在秦皇島市畜牧局歸口 ；本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：秦皇島市畜牧工作站。 本標(biāo)準(zhǔn)起草人：鄭慶豐、郭瑞芬、鮑淑琴、孫紅梅。DBI3O3/T 1882003DBI3O3/T 188200322DBDB13 03/1 1882005牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程1范圍本規(guī)程規(guī)定了牛冷凍胚胎移植的受體牛的選擇及飼養(yǎng)管理、受體牛的同期化發(fā)情

2、處理、受體牛的發(fā) 情鑒定、受體牛的胚胎移植、妊娠受體牛的飼養(yǎng)管理。本規(guī)程適用于秦皇島市規(guī)模養(yǎng)牛場(chǎng)戶的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)冷凍胚胎的移植。2受體牛的選擇及飼養(yǎng)管理2.1受體牛的選擇2.1.1選擇肘間選擇時(shí)間宜確定在實(shí)施胚胎移植以前2個(gè)丿左右(即2個(gè)發(fā)情周期)，以便于觀察受體牛的發(fā)情周期。1.2品種受體牛的品種應(yīng)以體型大小與供體牛相符的黃牛及其改良品種為宜。2. 1.3年齡一般耍求受體牛年齡在3歲6歲之間。1.4體軀結(jié)構(gòu)體型外貌良好、豐滿；長(zhǎng)、寬、深發(fā)育充分；身體前、中、后軀，胸深、四肢比例協(xié)調(diào)；貝.有良好 的乳丿另;被毛要有光澤。2.1.5體況選擇發(fā)育中等以上水平的個(gè)體，有較明顯的品種特征，肢勢(shì)端任，年齡與

3、體重相吻合，膘情在7成 以上，體格健壯、健康無病，具有很好的耐病力。2.1.6繁殖性能應(yīng)充分了解該牛的繁殖性能及是否患有繁殖機(jī)能疾病。選擇經(jīng)產(chǎn)牛肘，應(yīng)選擇分娩在90天以上，產(chǎn) 犢性能和哺乳能力良好，無流產(chǎn)史的牛，同時(shí)應(yīng)了解其發(fā)情周期是否正常、已產(chǎn)胎次、上一胎產(chǎn)犢時(shí)間 及數(shù)量、日前是否受孕等情況，對(duì)于繁殖性能差、有繁殖機(jī)能疾病、二次人工受精不受胎或已受孕的牛 堅(jiān)決不能選用。2.2受體牛的飼養(yǎng)管理2.2.1受體牛的飼養(yǎng)受體牛在移植前6周8周開始補(bǔ)飼,根據(jù)首體牛的膘情日喂精料1. 5kg左右，保持日增重(0. 3-0.4) kg/日。在日糧組成中若不添加苜蓿，則豆餅等蛋白飼料應(yīng)占20-25%,添加苜

4、蓿至粗飼料喂量的40%時(shí), 盤餅給量可降到18-20%。玉米占45%左右，缺皮20%左右為宜。鈣磷比例要合適，如添加磷酸氫鈣可占精 料1T. 5%。食鹽添加量0. 5-1%,同時(shí)保證微量元素及維生素足量供給。2.2.2受體牛的管理受休牛單獨(dú)組群飼養(yǎng)，保持環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，避免應(yīng)激反應(yīng)。3受體牛的同期化發(fā)情處理1同期化處理之前的準(zhǔn)備對(duì)受體牛進(jìn)行直腸觸摸,檢查卵巢是否處于活動(dòng)狀態(tài)。處丁活動(dòng)狀態(tài)的牛方可進(jìn)行同期化發(fā)情處理。3.2同期化發(fā)情處理用藥品及劑量藥品：氯前列烯醇（PG, 0.2mg/2ml/支）；劑量；經(jīng)產(chǎn)牛（0.3-0. 4） mg/次，育成牛（0.2（）.3） mg/次。缺乏n. d.，:的

5、季節(jié)，在注射PG時(shí)同時(shí)注射Va. . “針劑1（）2/頭，但兩種約品不能在同-位置注 射。3.3同期化發(fā)情處理的方法采用二次注射法（肌注）：第一次注射，在任意一大；第二.次注射，在第一次注射后11天。第二次 注射后24小時(shí)96小時(shí)觀察發(fā)情。笫二次注射觀察發(fā)情24小肘后，對(duì)發(fā)情受體牛注射促排3號(hào)12. 5u g/ 頭移植效果更佳。受體牛發(fā)情之日訃為0天，6天8天內(nèi)進(jìn)行胚胎移植。4受體牛的發(fā)情鑒定應(yīng)對(duì)受體牛跟群觀察，以受體牛穩(wěn)定站立接受其他牛爬跨為發(fā)情標(biāo)準(zhǔn)。并準(zhǔn)確記錄開始站立接受爬 跨的時(shí)間（以小時(shí)為單位記錄）。5受體牛的胚胎移植5.1牛胚胎移植的適宜季節(jié)舍飼型牛避開最冷最熱的季節(jié)，可在其他任何季

6、節(jié)進(jìn)行移梢。一般以每年4月-6月和9月-10月比較 理想。5.2受體移植所需器械、藥品移植槍、塑料便外套、近無曲一軟外套、碘酊棉球、剪毛剪、2%利多K因、70%酒精棉球、5ml一次性 注射器、衛(wèi)生紙5.3受體牛移植操作步驟5. 3. 1受體牛在發(fā)情后6大8天之間均可進(jìn)行移植（發(fā)情之時(shí)定為0小時(shí)）。移植前X寸受體牛進(jìn)行 宜腸觸摸，檢查黃體是否合格。合格者用于移植。5.3.2受體牛實(shí)行I2尾椎間硬膜外麻醉，擦拭外陰部。5. 3. 3對(duì)照冷凍胚胎細(xì)管外記錄和合格受體的發(fā)情記錄，合理的搭配受體牛和胚胎。5. 3.4解凍胚胎5. 3. 4.1胚胎解凍所需的儀器、器材。立體顯微鏡、溫度計(jì)、解凍用水杯、0.

7、 25ml塑料細(xì)管、吸卵管、 細(xì)管推桿、裝管器、2100mm塑料培養(yǎng)皿、0. 22 u m針頭式細(xì)歯濾器。5. 3. 4. 2胚胎解凍所需溶液。保存液：含0.4%牛血清句蛋白的PBS液；解凍液：1M蔗糖/保存液。5. 3. 4. 3胚胎解凍方法。10%甘油/保存液冷凍胚胎的解凍：胚胎f空氣浴（18C25C） 1（）秒-32C水浴1（）秒一揩干細(xì)管*剪去細(xì)管塞一推出胚胎*解凍液4 分鐘f保存液，沖洗5次6次一鏡檢一裝管一細(xì)管裝入移植槍f移植（胚胎解凍后30分45分鐘內(nèi)移入 受體）。1.5M乙二醇/保存液（含0. 1M蔗糖）冷凍胚胎的解凍（直接辭凍移植法）：胚胎一32C水浴10秒一揩干細(xì)管一用70

8、%酒精棉球擦拭細(xì)管，晾干f剪去細(xì)管塞把細(xì)管裝入移植 槍f移植（胚胎解凍后5分8分鐘內(nèi)移入受體）。5. 3. 4. 4胚胎發(fā)育期與受體移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系胚胎發(fā)育期受體移植時(shí)間（發(fā)情之肘為（）小時(shí)）緊縮桑篡胚（M）6.()天-*6. 5天一7. 0天早期囊胚（EB）7. 0天7. 25天囊胚（B）7. 25天f 7. 5天擴(kuò)張囊胚（EXB）7. 5天。天5.3.5車新將胚胎裝入0. 25ml塑料細(xì)管（直接解凍移植法不需要重新裝管）。5. 3.6細(xì)管裝入移植槍。DB13O3/T 1882005DB13O3/T 1882005335.3.7把裝有細(xì)管的移植槍套上硬外套，用塑料環(huán)卡緊，再套上軟外套。3.

9、 8將胚胎移植到受體有黃體一側(cè)子宮角的上1/3-1/2處。5.3.9按附錄A （規(guī)范性附錄）做好受體移植記錄。3. 10妊娠檢查在移植后70天90天對(duì)受體牛進(jìn)行妊娠檢查，對(duì)已妊娠的受體應(yīng)單獨(dú)飼養(yǎng)，避免應(yīng)激反應(yīng)。6妊娠的受體牛的飼養(yǎng)管理1加強(qiáng)飼養(yǎng)妊娠受體在產(chǎn)前3個(gè)月應(yīng)補(bǔ)充足量的維生素、微量元素，適當(dāng)限制能量攝入，既要保證胎兒的正常 發(fā)育，乂要避免流產(chǎn)、難產(chǎn)。6.2注重免疫防疫根據(jù)當(dāng)?shù)氐募膊“l(fā)生情況，有目的地注射一些疫苗，以防胎兒流產(chǎn)或傳染病發(fā)生。.同時(shí)，平肘應(yīng)做 好疫病防制，保持環(huán)境衛(wèi)生。DB1303/T 1882003DB1303/T 188200344附錄A（規(guī)范性附錄）受體牛胚胎移植記錄表

10、序 號(hào)牛號(hào)胎 次產(chǎn)犢 日期營(yíng)養(yǎng)補(bǔ) 充及注 射日期氯前列烯 醇注射日 期、劑量發(fā)情 時(shí)間移植 時(shí)間黃體 狀況 左右胚胎數(shù) 量及質(zhì) 量胚胎 譜系 父母技 術(shù) 員備 注牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程編制說明根據(jù)市技術(shù)監(jiān)督局2005年農(nóng)業(yè)地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃，由秦皇島 市畜牧工作站承擔(dān)了牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程的起草工作。通 過深入細(xì)致的總結(jié)近年來我市牛冷凍胚胎移植技術(shù)的推廣經(jīng)驗(yàn)，并 在國(guó)內(nèi)同行專家指導(dǎo)的基礎(chǔ)上，.目前已完成了該標(biāo)準(zhǔn)的制定工作。 現(xiàn)將起草過程的有關(guān)情況說明如下：一、制定本標(biāo)準(zhǔn)的目的和意義牛胚胎移植技術(shù)是當(dāng)今世界應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)的高新生物技術(shù)， 已被證明是一項(xiàng)引進(jìn)優(yōu)良品種、實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)群的快捷、有效途徑

11、。 近年來，我國(guó)為了滿足奶業(yè)迅猛發(fā)展對(duì)優(yōu)秀奶牛資源的需求，繼牛 人工授精技術(shù)之后，牛胚胎移植技術(shù)在生產(chǎn)中已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。 生產(chǎn)實(shí)踐證明，推廣應(yīng)用牛胚胎移植技術(shù)加快了我市奶牛業(yè)實(shí)現(xiàn)跨 越式發(fā)展的步伐，提高了全市奶牛的整體生產(chǎn)水平。但由于胚胎移植是一項(xiàng)高新生物技術(shù)，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，雖 然進(jìn)行了精心組織，但經(jīng)常在受體牛選擇利用率、同期發(fā)情率、藥 物處理后可移植利用率、移植準(zhǔn)胎率、流產(chǎn)及難產(chǎn)率五個(gè)方面里的 某個(gè)或多個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，最后往往出現(xiàn)產(chǎn)犢率低的局面。為了促 進(jìn)這一技術(shù)的推廣，實(shí)現(xiàn)新技術(shù)向生產(chǎn)力的轉(zhuǎn)化，特制定本規(guī)程。二、制定本標(biāo)準(zhǔn)的主要依據(jù)和原則自2000年以來，我站先后派專人到內(nèi)蒙古大學(xué)

12、、河北大學(xué)等院 校學(xué)習(xí)高產(chǎn)奶牛的胚胎移植技術(shù)，并在北京相中公司、中國(guó)農(nóng)科院 畜牧研究所等專家的指導(dǎo)下進(jìn)行具體的生產(chǎn)實(shí)踐。目前，體外凍胚 的移植已達(dá)到了國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平，并摸索出了 一套適于在生產(chǎn)中大面 22積推廣的實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)。在本規(guī)程在制定過程中，我們?cè)诳偨Y(jié)生產(chǎn) 經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，借鑒了內(nèi)蒙古自治區(qū)家畜改良站制定的技術(shù)規(guī)程。該標(biāo)準(zhǔn)遵循可靠、先進(jìn)、實(shí)用的原則設(shè)定項(xiàng)目與指標(biāo)，對(duì)于不 適于或在當(dāng)前生產(chǎn)中難以推廣的指標(biāo)均舍棄不列。三、與國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)比較現(xiàn)階段我國(guó)部分省份制定了一些牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程，但 在規(guī)程中試演成分居多，不適于在生產(chǎn)中大規(guī)模的推廣應(yīng)用。尤其 是近年來，隨著在生產(chǎn)的不斷深入開展，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿

13、足不了當(dāng)前生產(chǎn) 的需要。本規(guī)程的制定，是經(jīng)過多年的生產(chǎn)實(shí)踐證明了的，適于在 生產(chǎn)中大規(guī)模推廣，尤其是適于在我市推廣的技術(shù)操作。通過該標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行，可有效地規(guī)范當(dāng)前胚胎移植技術(shù)的推廣， 進(jìn)一步提高牛冷凍胚胎移植的成功率，為促進(jìn)全市奶牛業(yè)的更快發(fā) 展起到積極的推動(dòng)作用。牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程審定會(huì)議紀(jì)要時(shí)間：2005年10月28日地點(diǎn)：秦皇島市畜牧局會(huì)議室參加人員：郭永生閆勝.劉天健叢思茲李鶴飛 張志金鄭慶豐李光宇常俊景編寫人員：鄭慶豐記錄：?？【敖Y(jié)論：經(jīng)過對(duì)牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程的認(rèn)真審議, 一致同意該技術(shù)規(guī)程作為秦皇島市地方標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施，認(rèn)為 發(fā)布后能指導(dǎo)實(shí)踐，提高畜牧生產(chǎn)水平。附：審定專家簽字表牛冷凍胚胎移植技術(shù)規(guī)程地方標(biāo)準(zhǔn)審定委員會(huì)名單日期：2005年10月28日序號(hào)審定會(huì)職務(wù)姓名工作單位所學(xué)專業(yè)現(xiàn)從事專業(yè)職稱j孌字1主任委員劉天健秦