液相色譜基本概念和術(shù)語

1、II基本概念和理論 一、基本概念和術(shù)語色譜圖和峰參數(shù)色譜圖(chromatogram)-樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器，所得到的信號一 時間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile).基線(base line)流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出 一段時間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時間軸。噪音(noise)基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、 檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。漂移(drift )基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫 度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來也 會產(chǎn)生漂移。色譜峰(peak)-組分流經(jīng)檢測

2、器時相應(yīng)的連續(xù)信號產(chǎn)生的曲線。流出 曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱性正態(tài)分布曲線(高斯Gauss曲 線)。不對稱色譜峰有兩種：前延峰(leading peak)和脫尾峰(tailing peak ) o拖尾因子(tailing factor,T) T=B/A,用以衡量色譜峰的對稱性。也稱 為對稱因子(symmetry factor)或不對稱因子(asymmetry factor)中國藥 典規(guī)定T應(yīng)為0.951.05。T1.05為拖尾峰。峰底一一基線上峰的起點至終點的距離。峰高(Peak height,h)峰的最高點全峰底的距離。標準偏差(standard deviation, o)-正

3、態(tài)分布曲線x= 1時(拐 點)的峰寬之半。正常峰寬的拐點在峰高的0.607倍處。峰寬(peak width,W)-峰兩側(cè)拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點 間的距離。W=4o。半峰寬(peak width at half-height,Wh/2)-峰高一半處的峰寬。W h/2 = 2.3550。峰面積(peak area,A)峰與峰底所包圍的面積。A=2.507oh=1.O64W h/2h定性參數(shù)(保留值)死時間(dead time,t0)-不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑) 通過色譜柱的時間。在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來測定死時間。死體積(dead volume,V。)由進樣器進樣口到

4、檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分：進樣器全色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆 粒間隙(被流動相占據(jù)，Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只 有Vm參與色譜平衡過程，其他3部粉只起峰擴展作用。為防止峰擴展，這3部 分體積應(yīng)盡量減小。V0 = FXt0 (F為流速)保留時間(retention time,tR)-從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃 度極大值的時間。保留體積(retention volume,VR)-從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn) 濃度極大值時流出溶劑的體積。又稱洗脫體積。VR = F*tR .調(diào)整保留時間(adjusted retention time,tR)-扣

5、除死時間后的保留 時間。也稱折合保留時間(reduced retention time)。在實驗條件(溫度、 固定相等)一定時，tR只決定于組分的性質(zhì)，因此，tR(或tR)可用于定性。 TR=tR-t0調(diào)整保留體積(adjusted retention volume,VR)-扣除死體積后的保 留體積。Vr=Vr-V0 或 VR=F*tR柱效參數(shù)理論塔板數(shù)(theoretical plate number,N)用于定量表示色譜柱的分 離效率(簡稱柱效)。N=(tR/o) 2=16(tR/W)2 =5.54(tR/W1/2)2理論塔板高度(theortical plate height,H)每單位

6、柱長的方差。實際 應(yīng)用時往往用柱長L和理論塔板數(shù)計算：H=L/N相平衡參數(shù)容量因子(capacity factor,K)-化合物在兩相間達到平衡時，在固定 相與流動相中的量之比。K=(tR-t0) /t0=tR/t0 (或溶質(zhì)在固定相中的量/溶質(zhì)在流動相中的量)，因 此，容量因子也稱質(zhì)量分配系數(shù)。選擇性因子(selectivity factor, a)-相鄰兩組份的分配系數(shù)或容量 因子之比。a=k2/k1 (設(shè)k2k1), a又稱為相對保留時間(美國藥典)。要使 兩組分得到分離，必須使a#1o a與化合物在固定相和流動相中的分配性質(zhì)、 柱溫有關(guān)，與柱尺寸、流速、填充情況無關(guān)。分離參數(shù)分離度(resolution)-相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比 值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R= (tR2-tR1)/(W1+W2)/2。，當W1=W2，R=1時，稱為4a分離，兩峰基本分離，裸露鋒面積為95.4%， 內(nèi)測峰基重疊約2%。當R=1.5時，稱為6a分離，裸露鋒面積為99.7%。RN1.5稱為完全分 離。中國藥典規(guī)定R應(yīng)大于1.5?；痉蛛x