食品中獸藥殘留檢驗(yàn)

1、第七章 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第1頁一 、概述經(jīng)典獸藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病藥品。不過，伴隨集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)開展，一些化學(xué)、生物藥用成份被開發(fā)成含有一些功效動(dòng)物保健品或飼料添加劑，也屬于獸藥范圍。獸藥主要用途有防病治病、促進(jìn)生長、提升生產(chǎn)性能、改進(jìn)動(dòng)物性食品品質(zhì)等。獸藥殘留(residues of veterinary drug)是指用藥后蓄積或存留于畜禽機(jī)體或產(chǎn)品(如雞蛋、奶品、肉品等)中原型藥品或其代謝產(chǎn)物，包含與獸藥相關(guān)雜質(zhì)殘留。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第2頁獸藥最高殘留限量(MRLVD)是指某種獸藥在食物中或食物表面產(chǎn)生最高允許獸藥殘留量(單位gkg，以鮮重計(jì))。 獸藥殘留可

2、分為7類：抗生素類;驅(qū)腸蟲藥類;生長促進(jìn)劑類;抗原蟲藥類;滅錐蟲藥類;鎮(zhèn)靜劑類;-腎上腺素能受體阻斷劑年農(nóng)業(yè)部頒布動(dòng)物性食品中最高殘留限量要求： 可用于食品動(dòng)物，不需要制訂最高殘留量限量藥品有88種 可用于食品動(dòng)物，需要制訂最高殘留限量藥品有94種 能夠使用，但不得在動(dòng)物性食品中檢出獸藥殘留藥品有9種 禁止使用，且在動(dòng)物性食品中不得檢出藥品有31種食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第3頁獸藥殘留產(chǎn)生原因 養(yǎng)殖步驟用藥不妥是產(chǎn)生獸藥殘留最主要原因。產(chǎn)生獸藥殘留主要原因大致有以下幾個(gè)方面 非法使用違禁或淘汰藥品 不恪守休藥期要求 濫用藥品 違反相關(guān)標(biāo)簽要求 屠宰前用藥 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第4頁獸藥殘留危害1.毒性

3、作用：急、慢性中毒，致畸、致突變或致癌作用（簡(jiǎn)稱“三致”作用）2.耐藥性3.過敏反應(yīng)4.激素樣作用5.污染環(huán)境影響生態(tài)食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第5頁獸藥殘留分析技術(shù)獸藥殘留分析是復(fù)雜混合物中痕量組分分析技術(shù)。殘留分析既需要精細(xì)微量操作伎倆,又需要高靈敏痕量檢測(cè)技術(shù)。樣品分離純化技術(shù)（提取和凈化方法）簡(jiǎn)單化、微型化和自動(dòng)化，提升了提取或凈化效率及自動(dòng)化水平。如固相萃取法（SPE）、固相微萃?。⊿PME），超臨界流體萃取(SFE)、微波萃取法（MAE）、免疫親和色譜（IAC）技術(shù)、基質(zhì)固相分散（MSPD）技術(shù)，凝膠滲透色譜（GPC）凈化，分子印跡技術(shù)等。在定量分析上新技術(shù)包含毛細(xì)管電泳、超臨界流體色譜、

4、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、免疫分析技術(shù)和生物傳感器等。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第6頁樣本前處理 1. 1提取 提取是使用適當(dāng)溶劑將待測(cè)物連同部分樣本基質(zhì)從固態(tài)樣本轉(zhuǎn)至易于凈化或分析液態(tài),通常可除去99%樣本雜質(zhì)。依據(jù)樣本性質(zhì)選擇溶劑,如脂肪或水分含量。使用水溶性有機(jī)溶劑(乙腈、甲醇、丙酮等)有許多優(yōu)點(diǎn):溶劑和動(dòng)物樣本易混合,提取速度快;溶劑溶解作用強(qiáng);提取液pH值能夠調(diào)整,適用范圍廣;提取同時(shí)兼脫蛋白和脫脂;待測(cè)物在樣本提取液中均勻分布,可只移取部分上清液或?yàn)V液進(jìn)行分析,無需 重復(fù)提取將待測(cè)物全部轉(zhuǎn)出。 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第7頁1. 2凈化 凈化即將待測(cè)物與提取液中樣本干擾雜質(zhì)分離。獸藥殘留分析中慣用

5、凈化方法是液- 液分配和固相萃取。 液- 液分配:等體積分配體系中溶質(zhì)分配平衡后溶解在非極性或極性較弱溶劑中溶質(zhì)百分比稱為p值,利用p值能夠選擇萃取系統(tǒng)、計(jì)算萃取次數(shù)和抽出率。經(jīng)過調(diào)整溶液pH值、極性、離子對(duì)形成等伎倆選擇性地改變待測(cè)物p值.固相萃取: 其基本原理與開放式柱色譜相同。固相萃取中樣本與微細(xì)顆粒填料(70150m)接觸面積大,凈化速度快,分離效能高;操作簡(jiǎn)便,溶劑用量少,回收率高。薄層色譜 :含有直觀、速度快、樣本容量大和分離效能高(顆粒3050 m)等優(yōu)點(diǎn)。但對(duì)紫外- 可見區(qū)無吸收待測(cè)物卻難以定位,有些待測(cè)物可經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)品顯色來處理。 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第8頁1. 3濃縮 濃縮是待

6、測(cè)物富集或轉(zhuǎn)溶慣用方法。前處理中以濃縮過程待測(cè)物損失最大。應(yīng)防止樣品液被直接蒸干,不然待測(cè)物可能附著于器皿上或與樣本基質(zhì)結(jié)合使回收率下降,高極性待測(cè)物如磺胺類藥品較為嚴(yán)重。 1. 4衍生化 衍生化提升檢測(cè)靈敏度和選擇性已成為殘留分析中衍生化最主要目標(biāo),如給待測(cè)物連接強(qiáng)電負(fù)性基團(tuán)以適于氣相色譜電子捕捉檢測(cè)器檢測(cè)、HPLC紫外或熒光衍生化等。 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第9頁測(cè)定方法 氣相色譜法 ：氣相色譜法有許多高靈敏、通用性或?qū)Ｒ恍詮?qiáng)檢測(cè)器供選取,如氫焰離子化檢測(cè)( FID) 、氮磷檢測(cè)器(NPD)等,檢測(cè)限普通為g/kg級(jí)。不過大多數(shù)獸藥極性或沸點(diǎn)偏高,需繁瑣衍生化步驟,限制了GC應(yīng)用。 食品中獸藥

7、殘留檢驗(yàn)第10頁 幾乎全部化合物均可用HPLC進(jìn)行測(cè)定。HPLC分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同,但填料愈加精細(xì)(510m) ,可重復(fù)進(jìn)樣,分析速度快。HPLC至今仍缺乏可滿足獸藥殘留分析要求通用型檢測(cè)器。紫外檢測(cè)器(UVD)最普及,其次是熒光檢測(cè)器和電化學(xué)檢測(cè)器。大部分抗生素在高于230 nm光譜區(qū)無吸收,而在低于230 nm紫外區(qū)許多樣本基質(zhì)和流動(dòng)相產(chǎn)生干擾,需衍生化后測(cè)定,限制了紫外檢測(cè)器應(yīng)用。(大多數(shù)動(dòng)物源性食品中獸藥殘留分析采取HPLC法，不過對(duì)于一些獸藥殘留，HPLC檢出限達(dá)不到要求） 高效液相色譜法 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第11頁 HPTLC出現(xiàn)使TLC進(jìn)入了復(fù)興時(shí)期,現(xiàn)已成為僅次于HPLC

8、和GC殘留分析方法。HPTLC斑點(diǎn)原位掃描定量、定性和高效分離材料(310m) 。改變了常規(guī)TLC在靈敏度和重現(xiàn)性方面不足,但保持了TLC簡(jiǎn)便、快速和樣品容量大優(yōu)點(diǎn),可使用正相或反相板,分辨率幾乎與HPLC相當(dāng)。HPTLC在獸藥殘留快速篩選性檢測(cè)方面應(yīng)用廣泛。 高效薄層色譜(HPTLC) 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第12頁超臨界流體色譜( SFC) SFC可填補(bǔ)GC和HPLC不足,但不可能取代二者。SFC最大優(yōu)點(diǎn)是能夠方便地連接各種靈敏檢測(cè)器(MS, ECD等) ,如豬組織中磺胺類藥品等抗菌素殘留SFC -MS分析。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第13頁 CZE是20世紀(jì)90 年代以來研究最活躍分析技術(shù)之一。CZ

9、E不一樣于傳統(tǒng)凝膠電泳技術(shù), CZE使用直徑僅2550m毛細(xì)管而不用載體,待測(cè)組分在高壓(2030 kV)下泳動(dòng),截面積小,熱量和泳速均勻。所以, CZE兼有高壓電泳高速、高分辨和HPLC靈活、高效優(yōu)點(diǎn),柱效高達(dá)106塔板/m。向電解質(zhì)中加入超臨界膠束濃度表面活性劑,如十二烷基硫酸鈉( SDS) ,即為毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜( cap illarymi - cellarelectrokineticchromatography,CMEC) ,分離范圍可擴(kuò)展至中性或兩性分子,分離效能亦深入提升。CZE將在簡(jiǎn)化樣本前處理、多殘留分析和分析自動(dòng)化方面發(fā)揮主要作用。當(dāng)前CZE主要問題是樣品量太小,限制了檢測(cè)

10、靈敏度。毛細(xì)管區(qū)域電泳(CZE)食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第14頁免疫分析技術(shù) 免疫分析是以抗原與抗體特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)新型分析技術(shù)。獸藥殘留免疫分析方法建立步驟包含待測(cè)物選擇、半抗原及人工抗原合成、抗體制備和測(cè)定方法建立免疫分析技術(shù)不論作為獸藥殘留分析檢測(cè)伎倆還是樣本凈化方法,都能使分析過程尤其是前處理步驟大大簡(jiǎn)化。當(dāng)前幾乎全部主要獸藥已建立或試圖建立免疫測(cè)定法(多數(shù)是ELISA) ,ELISA 缺點(diǎn)在于影響原因較多，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第15頁色譜-質(zhì)譜連用技術(shù) 藥品殘留研究中，慣用色譜法含有高效分離能力和高靈敏度定量檢測(cè)能力，但僅顯示色譜峰和保留值，不能提供待測(cè)物殘留組

11、分結(jié)構(gòu)信息或?qū)ξ粗衔镞M(jìn)行結(jié)構(gòu)判定。質(zhì)譜等含有很強(qiáng)結(jié)構(gòu)判定能力，但只適合用于純物質(zhì)分析，本身不具備分離能力，二者結(jié)合尤其是聯(lián)用儀器能夠集高效分離和結(jié)構(gòu)判定于一體，是生物樣品復(fù)雜混合物中痕量組分定性和定量分析最有效伎倆之一。 獸藥多殘留IAC 分離純化技術(shù)是LC-MS-MS 和GC-MS 檢測(cè)獸藥殘留時(shí)最有效分離純化伎倆。建立動(dòng)物性食品中藥品多殘留定量確證檢測(cè)技術(shù)（IAC-GC-MS、IAC-LC-MS-MS），是殘留分析研究領(lǐng)域一個(gè)主要發(fā)展方向。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第16頁一.抗生素類藥品 這類藥品多為天然發(fā)酵產(chǎn)物，是臨床應(yīng)用最多一類抗菌藥品，如青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、螺旋

12、霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等。青霉素類最輕易引發(fā)超敏反應(yīng)，四環(huán)素類、鏈霉素有時(shí)也能引發(fā)超敏反應(yīng)。輕至中度超敏反應(yīng)普通表現(xiàn)為短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)血壓下降、皮疹、身體發(fā)燒、血管神經(jīng)性水腫、血清病樣反應(yīng)等，極度超敏反應(yīng)可能造成過敏性休克甚至死亡。長久攝入含氨基糖苷類殘留超標(biāo)動(dòng)物性食品，可損害聽力及腎臟功效。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第17頁四環(huán)素類 四環(huán)素類抗生素是由放線菌產(chǎn)生一類廣譜抗生素，包含金霉素、土霉素、四環(huán)素等，其結(jié)構(gòu)均含并四苯基本骨架。廣泛用于各種細(xì)菌及立克次氏體、衣原體、支原體等所致之感染。名稱理化性質(zhì)用途土霉素OTC淡黃色粉末,鹽酸鹽易溶于水,溶液不穩(wěn)定,臨用現(xiàn)配腹瀉、氣喘病、產(chǎn)道疾病等金霉素CT

13、C鹽酸鹽為黃色結(jié)晶，微溶于水，水溶液不穩(wěn)定與土霉素相同四環(huán)素TC鹽酸鹽為黃色結(jié)晶粉末，有引濕性，溶于水腹瀉、氣喘病、產(chǎn)道疾病等食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第18頁歐盟與中國關(guān)于四環(huán)素類抗生素最大殘留限量（GB/T5009.116-)食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第19頁氯霉素類抗生素 包含有氯霉素、甲砜霉素及無味氯霉素等。（現(xiàn)已被禁用氯霉素對(duì)哺乳動(dòng)物大腸桿菌病基本失去治療作用，且能抑制蛋白質(zhì)合成和骨髓造血功效，造成血小板降低性紫斑、粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血和溶血性貧血。）檢測(cè)見GB/T18932.19-食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第20頁二.磺胺類藥品 主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、新諾明等

14、。近年來，磺胺類藥品在動(dòng)物性食品中殘留超標(biāo)現(xiàn)象，在全部獸藥當(dāng)中是最嚴(yán)重。長久攝入含磺胺類藥品殘留動(dòng)物性食品后，藥品可不停在體內(nèi)蓄積。磺胺類藥主要經(jīng)腎臟排出，在尿中濃度較高，其溶解度又較低，尤其當(dāng)尿液偏酸性時(shí)，可在腎盂、輸尿管或膀胱內(nèi)析出結(jié)晶，產(chǎn)生刺激和阻塞，造成泌尿系統(tǒng)損傷，引發(fā)結(jié)晶尿、血尿、管型尿等。 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第21頁三.硝基呋喃類藥品 主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。經(jīng)過食品攝入超量硝基呋喃類殘留后，對(duì)人體造成危害主要是胃腸反應(yīng)和超敏反應(yīng)。劑量過大或腎功效不全者，可引發(fā)嚴(yán)重毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為周圍神經(jīng)炎、嗜酸性白細(xì)胞增多、溶血性貧血等。長久攝人可引發(fā)不可逆性末

15、端神經(jīng)損害，如感覺異常、疼痛及肌肉萎縮等， 中國和歐美大多數(shù)國家要求禁止使用這類獸藥，在動(dòng)物性食品和飼料中不得檢出。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第22頁鹽酸克倫特侖殘留檢驗(yàn) 一個(gè)平喘藥。該藥品既不是獸藥，也不是飼料添加劑，而是腎上腺類神經(jīng)興奮劑.能夠促進(jìn)瘦肉生長抑制肥肉生長飼料添加劑。理化特征：白色或類白色結(jié)晶粉末，無臭、味苦，熔點(diǎn)161，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。檢測(cè)方法GB/T 5009.192- 食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第23頁四.抗寄生蟲類藥品 主要用于驅(qū)蟲或殺蟲，而慣用苯并咪唑類抗寄生蟲藥品有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。食用殘留有苯并咪唑類藥品動(dòng)物性食品，對(duì)人主

16、要潛在危害是致畸作用和致突變作用。對(duì)于妊娠期孕婦有可能發(fā)生胎兒畸形，如短肢、兔唇等；對(duì)全部消費(fèi)者來說，可能因?yàn)槠渲峦蛔冏饔檬瓜M(fèi)者發(fā)生癌變和性染色體畸變，從而其后代有發(fā)生畸形危險(xiǎn)。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第24頁五.激素類藥品 這類藥品主要用于提升動(dòng)物繁殖和加緊生長發(fā)育速度，使用于動(dòng)物激素有性激素和皮質(zhì)激素，而以性激素最慣用，如孕酮、睪酮、雌二醇等。正常情況下，動(dòng)物性食品中天然存在性激素含量是很低，因而不會(huì)干擾消費(fèi)者激素代謝和生理機(jī)能。 但攝入性激素殘留超標(biāo)動(dòng)物性食品，可能會(huì)影響消費(fèi)者正常生理機(jī)能，并含有一定致癌性，可能造成兒童早熟、兒童發(fā)育異常、兒童異性趨向等。食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第25頁二.我國出

17、口食品到國外檢出問題：90年輸歐凍兔肉因農(nóng)殘超標(biāo)，被拒之門外，致出口量從7萬噸銳減至2萬噸90年出口日本凍雞肉，被檢出克球酚殘留，上萬噸貨在日本被扣留，國內(nèi)庫存上萬噸貨不能出口96年因殘留監(jiān)控和防疫體系方面問題，歐盟從當(dāng)年8月1日起禁止中國全部禽肉進(jìn)口，直到年5月才對(duì)中國開放市場(chǎng)。受其涉及，我國出口到日本凍雞腿出口價(jià)格從 2100/T降到1450/T食品中獸藥殘留檢驗(yàn)第26頁三、怎樣應(yīng)對(duì)獸藥殘留 加緊立法，健全獸藥使使用方法規(guī)中華人民共和國商品檢驗(yàn)法、食品衛(wèi)生法、動(dòng)物防疫法、獸藥管理?xiàng)l例建立健全畜產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系和藥品殘留監(jiān)控、監(jiān)測(cè)體系建設(shè)獸藥安全監(jiān)測(cè)信息網(wǎng)絡(luò)加強(qiáng)藥品殘留檢測(cè)工作大力推廣綠色畜產(chǎn)品生產(chǎn)技術(shù)加大對(duì)畜牧業(yè)相關(guān)行業(yè)