HBVDNA檢測(cè)在乙肝治療中應(yīng)用醫(yī)學(xué)課件

1、 HBV DNA檢測(cè)在乙肝治療中的應(yīng)用羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司王亞雄2019年8月11日 上海 HBV DNA檢測(cè)在乙肝治療中的應(yīng)用羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有為什么進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)HBV DNA檢測(cè)帶給我們的益處目前HBV DNA的檢測(cè)方法羅氏COBAS Amplicor系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)新一代技術(shù)COBAS TaqMan主要內(nèi)容為什么進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)主要內(nèi)容乙型肝炎：全球性的健康問題目前HBV攜帶者超過 350 million 2540% HBsAg 陽(yáng)性人群會(huì)死于肝硬化或肝癌全球350 million HBV 攜帶者, 75% 在亞洲乙型肝炎：全球性的健康問題目前HBV攜帶者超過 35

2、0 mi中表面抗原（S+preS2）核蛋白殼HBcAg (HBeAg)DNA聚合酶膜蛋白基因組 DNA小表面抗原HBsAg (S)RNA 引物大表面抗原（S+preS2+preS1)乙肝病毒顆粒示意圖中表面抗原（S+preS2）核蛋白殼DNA膜蛋白基因組 D慢性乙肝檢測(cè)指標(biāo)HBsAg 確定慢性乙肝HBeAg/ anti-HBe 區(qū)分感染的不同時(shí)期HBV 聚合酶 檢測(cè)病毒的酶活性HBV DNA 檢測(cè)病毒載量 (病毒轉(zhuǎn)錄活性)HBcAg 檢測(cè)病毒蛋白 (病毒翻譯活性) 慢性乙肝檢測(cè)指標(biāo)HBsAg 確定慢性乙肝HBV 病毒基因HBV 病毒基因慢性乙型肝炎暴露后時(shí)間滴度ALTAnti-HBcSympt

3、oms 5 601234 6 71 2 345 8 9 10HBsAgHBeAg月年HBV DNAAnti-HBe慢性乙型肝炎暴露后時(shí)間滴度ALTAnti-HBcSympto慢性乙肝的三種臨床表現(xiàn)HBeAg 陽(yáng)性慢性乙肝 HBeAg, ALT升高, HBV-DNA 107 to 1011 拷貝每毫升 ， 病理切片指征明顯HBeAg 陰性慢性乙肝 Anti-HBe, ALT升高 ， HBV-DNA 104 to 108拷貝每毫升 ,病理切片指征明顯HBsAg 陰性攜帶期 Anti-HBe, ALT正常, HBV-DNA 2ULN, 要考慮治療治療期間， ALT、 e抗原和HBV-DNA至少每3個(gè)

4、月檢測(cè)一次 亞太乙肝防治共識(shí)2019Journal of Gastroenterology and Hepatology (2019) 18, 239245亞太乙肝防治共識(shí)2019Journal of Gastroe抗病毒一般適應(yīng)癥主要指標(biāo)：HBV DNA 105 拷貝/mL病毒學(xué)應(yīng)答重要指標(biāo)包括血清HBV，DNA 檢測(cè)不到 (PCR 法)或低于檢測(cè)下限，或較基線下降2log10中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)/中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì)慢性乙肝防治指南health.people/GB/14740/21474/56295/index.html抗病毒一般適應(yīng)癥主要指標(biāo)：HBV DNA 105 拷貝/m為什么進(jìn)行H

5、BV DNA檢測(cè)HBV DNA檢測(cè)帶給我們的益處目前HBV DNA的檢測(cè)方法羅氏COBAS Amplicor系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)新一代技術(shù)COBAS TaqMan主要內(nèi)容為什么進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)主要內(nèi)容HBV DNA檢測(cè)帶給我們的益處 監(jiān)測(cè)抗病毒治療效果早期確定病毒學(xué)應(yīng)答預(yù)測(cè)治療后反應(yīng) (HBsAg 消失)預(yù)測(cè)耐藥突變預(yù)測(cè)肝移植后復(fù)發(fā)檢測(cè)HBsAg 攜帶者的病毒的活動(dòng)情況HBV DNA檢測(cè)帶給我們的益處 監(jiān)測(cè)抗病毒治療效果指標(biāo)正常/ HBeAg 陽(yáng)性 (n.31) anti-HBe 陽(yáng)性 (n. 15)轉(zhuǎn)陰ALT 12 7HBeAg 12 NDdot-blot hybridization. 12 7

6、IgM anti-HBc ND 5Amplicor HBV Monitor 5 2HBsAg 3 2經(jīng)治療生化指標(biāo)正常病人中病毒清除率指標(biāo)正常/ HBeAg 陽(yáng)治療中/后，應(yīng)答者與不應(yīng)答者HBV DNA水平的比較baseline1-3wks4-7wks8-11wks12-15wks16-24wks0-5mths6-11mths12-18mths1x1021x1041x1061x1081x1010HBV DNA levelscopies/mlmeanSEMp=0.07p=0.2p0.01p0.001p0.001p0.001p0.001p0.001p0.001-不應(yīng)答者-應(yīng)答者-治療中治療后治療中

7、/后，應(yīng)答者與不應(yīng)答者HBV DNA水平的比較base監(jiān)測(cè)抗病毒治療，預(yù)測(cè)耐藥Puchhammer-Stockl E. at al. J Infect Dis 181:2063, 2000監(jiān)測(cè)抗病毒治療，預(yù)測(cè)耐藥Puchhammer-Stockl HBV DNA 載量顯示攜帶者處于活動(dòng)或非活動(dòng)狀態(tài)HBV DNA copies/mlManesis K. et al.Gastroenterology 122 (7): 2092-3, 2019.1.E+021.E+031.E+041.E+051.E+061.E+071.E+081.E+09非活動(dòng)狀態(tài)活動(dòng)狀態(tài)HBV DNA 載量顯示攜帶者處于活動(dòng)或非

8、活動(dòng)狀態(tài)HBV DHBV DNA載量在肝移植中的應(yīng)用 在肝移植中 (Liver Transplantation)為防治肝移植后的復(fù)發(fā)所采取的預(yù)防性治療需要達(dá)到HBV DNA 95% 檢出率線性范圍 300- 200,000 copies/mL同等定量亞型 A-F 血清或血漿100 ul 樣本6 小時(shí)檢測(cè)時(shí)間, 30 分鐘手工準(zhǔn)備內(nèi)部定量標(biāo)準(zhǔn)防污染系統(tǒng)COBAS AMPLICOR HBV Monitor特點(diǎn)檢測(cè)COBAS Amplicor VS bDNACOBAS Amplicor VS bDNACOBAS Amplicor vs bDNACOBAS Amplicor vs bDNACOBAS

9、Amplicor vs bDNACobas AmplicorbDNA標(biāo)本準(zhǔn)備乙醇沉淀磁珠吸附擴(kuò)增靶序列光信號(hào)線性范圍300200,0002000-100,000,000 特異性100%99.2%（96-98%)亞型AFAF污染控制有無(wú)定量方案內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品外部標(biāo)準(zhǔn)曲線Control數(shù)量3個(gè)12個(gè)報(bào)告時(shí)間8小時(shí)24小時(shí)COBAS Amplicor vs bDNACobas AmCOBAS Amplicor HBV 靈敏度vs 其它測(cè)試?- 預(yù)測(cè)反跳？- 預(yù)測(cè)突變？- 預(yù)測(cè)肝移植復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)？其他測(cè)試的靈敏度COBAS Amplicor HBV 靈敏度1101001,00010,000100,0001,0

10、00,00010,000,000100,000,000048122024Weeks of therapyHBVDNA copies/mLCOBAS Amplicor HBV 靈敏度vs 其它測(cè)試?為什么進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)HBV DNA檢測(cè)帶給我們的益處目前HBV DNA的檢測(cè)方法羅氏COBAS Amplicor系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)新一代技術(shù)COBAS TaqMan主要內(nèi)容為什么進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)主要內(nèi)容COBAS TaqMan 實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)系統(tǒng)COBAS TaqMan 實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)系統(tǒng)COBAS TaqMan特點(diǎn)及益處動(dòng)態(tài) PCR整合定量標(biāo)準(zhǔn)，不需外標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)管封閉，無(wú)需開蓋四色熒光通道 (計(jì)

11、劃升級(jí)到六色)檢測(cè)管: k-tube or k-plate寬廣的動(dòng)力學(xué)范圍連續(xù)檢測(cè)檢測(cè)時(shí)間從6小時(shí)減少到23小時(shí)增加通量提供內(nèi)質(zhì)控減少污染風(fēng)險(xiǎn)允許多重PCR靶標(biāo)檢測(cè)可用于其他檢測(cè)模式 (雜交探針)處理過程簡(jiǎn)單可與AmpliPrep聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化益 處特 點(diǎn)COBAS TaqMan特點(diǎn)及益處益 處特 點(diǎn)COBAS TaqMan定量原理0510152025300102030405060相對(duì)熒光強(qiáng)度None1ThresholdCycle Threshold (Ct)for 108 C/PCRHBV DNALog C/PCR2876543循環(huán)數(shù)COBAS TaqMan定量原理05101520253001COBAS TaqMan HBV檢測(cè)線性范圍COBAS TaqMan HBV檢測(cè)線性范圍COBAS TaqMan HBV檢測(cè)各亞型表現(xiàn)COBAS TaqMan HBV檢測(cè)各亞型表現(xiàn)COBAS TaqMan HBV Test vs CA HBMCOBAS TaqMan HBV TestCOBAS AMPLICOR HBV Monitor TestReporting UnitIU/mL(5.82 copies/IU)Copies/mLLinearity6 1.10E8300 2.00E5Sample Volume500 uL100 uLTar