瘦素及其受體在椎間盤組織的表達(dá)及意義

1、瘦素及其受體在椎間盤組織的表達(dá)及意義瘦素及其受體在椎間盤組織的表達(dá)及意義【關(guān)鍵詞】瘦素;椎間盤;免疫組織化學(xué)【摘要】目的討論瘦素及其受體在椎間盤組織表達(dá)及意義。方法采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)正常椎間盤(21個(gè))與退變椎間盤(39個(gè))組織中瘦素及其受體的表達(dá)，用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)體外培養(yǎng)的纖維環(huán)細(xì)胞中瘦素及其受體的表達(dá)。結(jié)果退變椎間盤組織中瘦素及其受體的表達(dá)高于正常椎間盤組織，差異有顯著性(t=3.223、5.553,p0.05)。體外培養(yǎng)的纖維環(huán)細(xì)胞中可以檢測(cè)到瘦素及其受體表達(dá)。結(jié)論椎間盤組織存在瘦素及其受體;瘦素可能在椎間盤退變中發(fā)揮作用?！娟P(guān)鍵詞】瘦素;椎間盤;免疫組織化學(xué)keyrdsle

2、ptin;intervertebraldis;iunhistheistry瘦素是肥胖基因編碼的肽類激素，體內(nèi)許多組織中有瘦素及其受體的表達(dá)。瘦素具有很多重要的生理作用，包括調(diào)節(jié)食欲、控制體質(zhì)量、調(diào)節(jié)機(jī)體炎性反響和免疫功能及促細(xì)胞增殖等1。瘦素在肥胖的發(fā)生過程中扮演重要的角色。同時(shí)，研究證明肥胖也是椎間盤蛻變的重要危險(xiǎn)因素。椎間盤退變與骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程極為相似，其機(jī)制除了傳統(tǒng)的生物力學(xué)因素外,目前研究較多的生物化學(xué)因素可能也起著比擬重要的作用?，F(xiàn)已證明關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞可以表達(dá)瘦素及其受體，并且瘦素可以刺激軟骨細(xì)胞的體外增殖，通過促進(jìn)骨贅形成參與骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程2，而瘦素在椎間盤退變過程中的作用

3、報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)旨在討論瘦素系統(tǒng)在椎間盤中的表達(dá)及其在椎間盤退變發(fā)生開展中的作用。1材料與方法1.1標(biāo)本及其來源1.2方法1.2.2免疫組織化學(xué)染色瘦素兔抗人多克隆抗體和瘦素受體羊抗人多克隆抗體購(gòu)自santaruze公司;iunstainspkit試劑盒和dab顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。載玻片均經(jīng)多聚賴氨酸浸泡24h防脫片處理,60烤箱烘烤枯燥。切片常規(guī)進(jìn)展脫蠟、阻斷內(nèi)源性過氧化酶的活性、抗原修復(fù)和封閉，采用sp法進(jìn)展免疫組織化學(xué)染色，dab顯色。實(shí)驗(yàn)中采用pbs代替一抗作為陰性對(duì)照，以脂肪組織的染色結(jié)果作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果斷定：瘦索及其受體表達(dá)陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞內(nèi)，陽(yáng)性結(jié)果為棕黃色

4、。每張切片隨機(jī)選取纖維環(huán)區(qū)域10個(gè)高倍鏡視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，再將10個(gè)高倍鏡視野細(xì)胞數(shù)相加，得出每個(gè)樣本陽(yáng)性纖維環(huán)細(xì)胞數(shù)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所測(cè)數(shù)據(jù)采用s表示,以微軟公司exel2000studenttest作樣本均數(shù)t檢驗(yàn),p0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果退變組椎間盤組織表現(xiàn)為膠原纖維增多，排列紊亂，血管組織浸潤(rùn)，纖維環(huán)板層狀構(gòu)造破壞，肉芽組織形成。正常組均表現(xiàn)為纖維環(huán)板層狀構(gòu)造明顯，軟骨細(xì)胞多見，且較均勻，基質(zhì)較少。2.2瘦素及其受體在椎間盤組織表達(dá)正常椎間盤組織，瘦素在纖維環(huán)中表達(dá)較均勻，從纖維環(huán)外層向內(nèi)層表達(dá)逐漸減弱，而在髓核的軟骨樣細(xì)胞中無表達(dá);退變椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞中

5、瘦素表達(dá)增強(qiáng)，且不均勻，以細(xì)胞簇及纖維軟骨細(xì)胞增生的區(qū)域明顯，髓核細(xì)胞無表達(dá)。瘦素受體的表達(dá)情況與瘦素相似。退變組與正常組比擬差異有顯著意義(t=3.223、5.553，p0.05)，見表1。表1兩組瘦素及其受體的表達(dá)情況2.3瘦素及其受體在體外纖維環(huán)細(xì)胞中的表達(dá)體外培養(yǎng)的纖維環(huán)細(xì)胞中可以檢測(cè)到瘦素及其受體的表達(dá)，位于細(xì)胞漿內(nèi)。3討論人群中椎間盤退變現(xiàn)象相當(dāng)普遍。退變椎間盤的組織學(xué)特點(diǎn)包括髓核脫水，糖蛋白降解，纖維環(huán)的板層狀構(gòu)造破壞等。椎間盤蛻變的危險(xiǎn)因素包括吸煙、飲酒、遺傳因素、過勞、糖尿并高血壓等，這些因素導(dǎo)致了椎間盤細(xì)胞代謝程度的改變，干擾椎間盤細(xì)胞增殖與凋亡的平衡3。使得椎間盤中一些炎

6、性遞質(zhì)過表達(dá)，影響椎間盤的修復(fù)才能。最終導(dǎo)致椎間盤蛻變。目前認(rèn)為椎間盤退變的關(guān)鍵因素為椎間盤在纖維環(huán)反復(fù)損傷后引起損傷修復(fù)的炎癥反響，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞聚集，釋放大量的細(xì)胞因子，使椎間盤內(nèi)的細(xì)胞增生和分化，血管、神經(jīng)和纖維沿撕裂的纖維環(huán)裂隙長(zhǎng)入，最終導(dǎo)致椎間盤退變。組織學(xué)上病理椎間盤中存在自纖維環(huán)外層到內(nèi)層的肉芽組織條帶區(qū)，對(duì)應(yīng)于腰椎間盤造影術(shù)顯示的裂隙。正常椎間盤僅纖維環(huán)表層有血管分布，這些肉芽組織條帶區(qū)最可能起源于外層纖維環(huán)的機(jī)械性創(chuàng)傷和隨之的創(chuàng)傷修復(fù)過程。瘦素可直接參與創(chuàng)傷組織的修復(fù)過程，其與促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)細(xì)胞因子構(gòu)造上的相似性提供了瘦素可能參與創(chuàng)傷愈合反響的物質(zhì)根底，瘦素調(diào)控血管生成

7、及免疫反響的外周作用也與創(chuàng)傷愈合過程關(guān)系親密7。urad等8認(rèn)為，瘦素由于在組織修復(fù)時(shí)促進(jìn)了新血管的生成從而參與了傷口組織修復(fù)的調(diào)控。他們發(fā)現(xiàn)不僅肉芽組織中的免疫細(xì)胞及修復(fù)細(xì)胞有瘦素受體的表達(dá)，而且皮膚組織受損后傷口中的細(xì)胞就積極參與瘦素的合成，說明瘦素是創(chuàng)傷愈合過程的自分泌或旁分泌調(diào)節(jié)物。本研究中體外培養(yǎng)的纖維環(huán)細(xì)胞中同時(shí)檢測(cè)到瘦素及其受體的表達(dá)，提示椎間盤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖過程中可能存在自分泌或旁分泌機(jī)制。綜上所述，椎間盤組織中有瘦素系統(tǒng)的表達(dá)，蛻變椎間盤組織中瘦素表達(dá)的程度與形式均與正常椎間盤有明顯差異，并且體外培養(yǎng)的細(xì)胞同時(shí)檢測(cè)到瘦素及其受體的表達(dá)。提示瘦素系統(tǒng)很有可能通過自分泌或旁分泌機(jī)制參與了椎間盤蛻變過程。瘦素系統(tǒng)有可能成為椎間盤退變生物學(xué)治療新的靶點(diǎn)。【參考文獻(xiàn)