防曬化妝品中15種紫外線吸收劑的檢測

1、防曬化妝品中紫外線吸收劑的檢測防曬劑即紫吸收劑。它能吸收紫外線中可引起人產(chǎn)生急性皮炎（紅斑）和皮膚灼傷的波長為280320nn的中波紫外線（即和（或）可使皮膚變黑的波長32400nn的長波紫紫外線（即）?；瘖y品中紫外線吸收劑用量過多對皮膚有不利影響，因此，化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了防曬劑的使用量（見附錄1中的表5）、對甲氧肉桂酸乙氧乙酯高效液相色譜法（L對甲氧肉桂酸乙氧乙酯：（4-甲氧肉桂酸-2-乙氧乙酯，C14H18O4,分子量是淡黃色透明的粘稠性液體,266Pa時(shí)沸點(diǎn)為184187.；在水中溶解度為，在甘油中為,在丙二醇中約5%,能經(jīng)任意比例與其它醇類、植物油相混合；吸收波長280320nm，常

2、作紫外吸收劑。我國化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定最大允許濃度為10%。應(yīng)用范圍本方法適用于化妝品中對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的測定。原理樣品中的對甲氧肉桂酸乙氧乙酯溶解于四氫呋喃等有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑提取后用高效液相色譜定性、定量。試劑四氦呋喃：色譜純。（1）乙腈。對甲氧肉桂酸乙氧乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液:精確稱取對甲氧肉桂酸乙氧酯,用少量四氫呋喃溶解,移入容量瓶中并定容至刻度。移取置于容量瓶中，用四氫呋喃定容至刻度。此溶液含1000g對甲氧肉桂酸乙氧乙酯。儀器高效液相色譜儀：具紫外分光光度檢測器超聲波儀。分析步驟樣品預(yù)處理液體、乳液、膏霜(2)：稱取約(3)樣品于50m1離心管中，加20m1四氫呋喃。用超聲波充分溶解混勻后

3、加四氫呋喃至。溶液中有不溶物時(shí)離心分離。取上清液用。(4)5.1.2指甲油：稱取約樣品于50ml離心管中，加15ml乙腈，攪拌均勻，加水至，3000r/min離心10min,或用聚四氟乙烯濾膜過濾，取上清液備用。(4)(5)色譜條件色譜柱：碳十八結(jié)合硅膠(idx250mm)。流動(dòng)相：乙腈+水(64)。(7)流速：/min。檢測器波長：310nm。測定定性取標(biāo)準(zhǔn)溶液，加四氫呋喃稀釋至，取53注入HPLC,求出保留時(shí)間，取樣品溶液51同樣操作，以保留時(shí)間進(jìn)行比較和定性。（8）定量移取標(biāo)準(zhǔn)溶液用四氫呋喃稀釋，配制成1ml相當(dāng)于、g的標(biāo)準(zhǔn)系列，依次取53注入HPLC，繪制濃度-峰高（或峰面積）標(biāo)準(zhǔn)曲線

4、。取樣品溶液51注入HPIC，記錄峰高或峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出對應(yīng)的對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的含量A（|ig/m1）。6計(jì)算c=AxV/mxl/l000式中：c一一對甲氧基肉桂酸乙酸乙酯含量，%；A一一由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出的樣液中對甲氧基肉桂酸乙氧乙酯含量，用/ml;V樣品溶液總體積，ml；m樣品質(zhì)量，g。注解：（1）四氫呋喃中常常加入抗氧化劑，必須采用色譜純試劑。（2）乳液、膏霜指防曬油、擦手香酯、夜霜等。（3）稱取的樣品量根據(jù)對甲氧肉桂酸乙氧乙酯含量來決定，應(yīng)含14mg。（4）樣液中若仍有不溶物，用聚四氟乙烯濾膜（5m）過濾。(5)指甲油的預(yù)處理方法除用乙腈外，還可用下法：即取苯或醚10ml,水20

5、ml與樣品充分混合，離心分離(3000r/min)10min，或靜置分層后，取苯或醚層，將有機(jī)相揮干，用乙腈稀釋至一定體積備用。(6)常用的色譜柱還有TSK凝膠柱LS410及等效物。(7)流動(dòng)相乙腈和水的比例范圍在7+31+1之間都可得到良好的分離。(8)用本法測定時(shí)，對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的保留時(shí)間是10min,能與其同分異構(gòu)體完全分離。以對甲氧肉桂酸乙氧乙酯的相對保留時(shí)間作為時(shí)，2-乙基己基-對2-甲基胺基苯甲酸酯(ESOALOL507)是，2-乙基己基對甲氧肉桂酸酯是，同時(shí)和其它紫外吸收劑也能完全分離。二、羥苯甲酮高效液相色譜法()羥苯甲酮即2-羥-4甲氧二苯甲酮。(oxybenzone,

6、2-hydroxy-4-methoxybenzophenoneC14Hl2。3,)是微黃色結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)66(MerekIndex),6066(化妝品原料標(biāo)準(zhǔn)口)在100g不同溶媒中溶解的克數(shù)分別為：水,95乙醇,正己烷,苯,二甲苯,二硫化碳,四氯化碳。羥苯甲酮的最大吸收波長(乙醇溶液)為2424nm,2884nm,32514nm,在化妝品中用作紫外線吸收劑。我國化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的最大允許濃度為10。應(yīng)用范圍本方法適用于不同類型化妝品中羥苯甲酮的測定。原理用有機(jī)溶劑提取化妝品中的羥苯甲酮,用高效液相色譜進(jìn)行測定,以保留時(shí)間定性,以標(biāo)準(zhǔn)峰高(或峰面積)進(jìn)行定量。3試劑四氫呋喃：色譜純。(1)羥

7、苯甲酮標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取羥苯甲酮，加少量四氫呋喃溶解，移置于100ml容量瓶中。加四氫呋喃定容至刻度。移取置于容量瓶中，用四氫呋喃定容至刻度。此液含250g羥苯甲酮。儀器高效液相色譜儀：具紫外分光檢測器。超聲波儀。分析步驟樣品預(yù)處理液體、乳狀樣品：準(zhǔn)確稱取約(2)樣品于50m1離心管中，加四氫呋喃40.0ml,用超聲波儀分散或溶解，加四氫呋喃至50ml,如樣液混濁離心分離，取上清液備用。指甲油：稱取約1.0g樣品，置于離心管中，加四氫呋喃經(jīng)超聲波儀超聲提取后，加氯仿至20ml,3000r/min離心10min,取上清液備用。色譜條件色譜柱：不銹鋼填充柱(idx25Onm)填充C8(5m)o流動(dòng)

8、相：甲醇+四氫呋喃+水+60過氯酸(502030)。(5)流速，/min。檢測器：紫外吸收檢測器，波長288nm。測定定性吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液置于容量瓶中，加四氫呋喃定容至刻度，取53注入HPLC,求出保留時(shí)間。取53樣品待測溶液注入HPLC，求出保留時(shí)間，與標(biāo)準(zhǔn)保留時(shí)間，與標(biāo)準(zhǔn)保留時(shí)間比較進(jìn)行定性。（6,7）定量配制每毫升含羥甲氧基苯酮g的標(biāo)準(zhǔn)系列，分別取53注入HPLC。繪制峰高（或峰面積）-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，取樣品待測溶液53注入HPLC，以標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品溶液中的羥苯甲酮含量（g/ml）。6計(jì)算c%=AxV/mxl/l0000式中：c羥苯甲酮含量，%；A以標(biāo)準(zhǔn)曲線查出的樣品溶液中羥苯甲酮含量，用/

9、ml；V一一樣品溶液稀釋的總體積，ml;m一一樣品質(zhì)量，g。注解：（1）一般在四氫呋喃中加入了微量的抗氧化劑，故要使用色譜純的四氫呋喃。（2）進(jìn)行樣品預(yù)處理時(shí)，稱取的樣品質(zhì)量應(yīng)含羥苯甲酮。（3）稱取指甲油時(shí)，由于樣品中的溶媒易揮發(fā)，稱取操作應(yīng)敏捷。(4)可用LichrosorhRP-18色譜柱(公司制品)或NueleosilC色譜柱(MachereyNagel公司制品)。(5)如用乙腈+水(7+3)作流動(dòng)相，不能將ESCALOL506紫外吸收劑與羥甲氧基苯酮分離。(6)本方法選擇的儀器條件，羥苯甲酮與其它異構(gòu)體分離良好，羥苯甲酮的相對保留時(shí)間為時(shí)，其它異構(gòu)體的相對保留時(shí)間如下：2-羥基-4甲氧

10、基二苯甲酚-5磺酸是0.48，2-羥基二苯甲酮是，2,2羥基二苯甲酮是，2,2、4,4-四羥基二苯甲酮是，2,2羥基4,甲氧苯酮是。三、水楊酸高蓋酯等14種防曬劑反相高效液相色譜法防曬化妝品的組分含有紫外線吸收劑。常用的紫外線吸收劑為水楊酸、對氨基苯甲酸、肉桂酸、二苯甲酮等的衍生物。此外,為了完全防止紫外線,防曬化妝品中還加有能使紫外線散亂起到遮蔽作用的無機(jī)覆蓋劑，如氧化鋅、氧化鈦、滑石粉、高嶺土等，我國化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB791687對紫外線吸收劑的使用量做了限制。本法使用高效液相色譜,一次進(jìn)樣同時(shí)測定2,4-二羥基二苯甲酮等14種紫外吸收劑,分離效果好。本法簡單、快速、靈敏、實(shí)用。1應(yīng)用范圍

11、本法適用于防曬化妝品中紫外線吸收劑的檢測,可檢測14種紫外線吸收劑,其最低檢測量見表2-3-27。表2-3-27紫外吸收劑及化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB9716-87)中規(guī)定的化妝品中最大允許濃度序號代號物質(zhì)名稱英文名稱本法檢出限(g/g)最大允許濃度(%)供應(yīng)商保留時(shí)間(min)(nm)5-11SALA9水楊酸高()(此Homomenthylsalicylate2510Quest字由H和孟組成）脂In-ternational(NL)5-20SALA9水楊酸-4-異丙基芐酯4-Isopropylbenzylsalicylate4Vebvy(I)5-3PABA8對-二甲按基苯甲酸-2-乙酸已酯2-ehy

12、lhexyl4-dime-thylaminobenzoate8VanDyk(NL)BENZ12,4-二羥基二苯甲酮2,4-Dithydroxyben-zophenone5Sigma(I)BENZ22,2-二羥基-4-甲氧基二苯甲酮2,2-Dihydroxy-4-methoxyben-zophenoneSaipo(I)BENZ322-二羥基-4,4-二甲氧基二苯甲酮-5-磺酸（鈉鹽）2,2-Dehydroxy-4,4-dimethoxyben-zophenone-5-sulfon-icacid(sodiumsalt)10Saipo(I)BENZ42,2,4,4-甲羥基二苯甲酮2,2,4,4-Te

13、trahy-droxybenzophenone5Saipo(I)5-32BENZ52-羥基-4-甲氧基二苯甲酮2-Hydroxy-4-methoxyeben-zophenon510Sigma(I)2845-33BENZ62-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸（鈉鹽）2-Hydroxy-4-methoxy-benzophe-none-5-sulfonicacid(sodiumsalt)5（酸）Sigma(I)5-17CAMP43-（4-甲基亞芐基茨烷-2-酮）3-(4-Methylbenzy-lidene)-bornan-2-one6Merck(D)5-27SSCR12-苯基苯咪唑2-Pheny

14、lbenz-imidazole-5-sulphnicacid8（酸）Saipo(I)-5-磺酸5-14CINA7對-甲氧基肉桂酸二乙酸銨Diethanolammonium4-methoxycinnamate3(酸)Saipo(I)5-18CINA10對-甲氧基Isoamyl4-methoxycinnamate10Haarman&Reimer(NL)肉桂酸異戊酯5-5CINA11對-甲氧基2-Ethylhexyl4-methoxy-cinnamate10Givaudan(CH)肉酸-2-乙酸已酯此序號為化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB7916-87)中表5的序號,5-11即表5中的序號11。2原理化妝品中各

15、種紫外吸收化合物由于其結(jié)構(gòu)上的差異可被反相高效液相色譜分離。根據(jù)其保留時(shí)間及其紫外可見吸收光譜進(jìn)行定性；峰面積進(jìn)行定量。3試劑甲醇:色譜級。乙腈:色譜級。紫外吸收劑貯備液:取表2-3-27紫外線吸收化合物各，用甲醇溶解并定容至。濃度為ml。紫外吸收劑標(biāo)準(zhǔn)溶液：取上述紫外吸收貯備液,用甲醇定容至100ml,濃度為ml。高氯酸:分析純。高氯酸鈉:分析純。硫酸:分析純。水、去離子水及二次重蒸水。所有溶劑和溶液在進(jìn)行HPLC分析前都經(jīng)m的微孔濾膜過濾及真空脫氣。儀器高效液相色譜儀：Varian5000型（Zg，Switzerland）。檢測器：Varianpolychrom9060型二極管珍列陣檢測器

16、。積分儀：Varian4290型。微量進(jìn)樣器：10l。分析步驟（1）稱取1g防曬化妝品于離心管中，加2mol/L硫酸和10ml甲醇,30.恒溫超聲水浴30min，然后以900r/min離心10min，提取上清液；殘留物按上述方法重新萃取一次，合并二次萃取液，用甲醇定容至25ml。色譜條件色譜柱：LichrosorbRP-18柱（250mmxid.，10m，Merck，Darmstadt，）。流動(dòng)相流動(dòng)相A：10-3mol/L的高氯酸和5“0-2mol/L高氯酸鈉的乙腈-水溶液（5+95，V/V）；流動(dòng)相B：1x10-3mo1/L高氯酸和5x10-2mo1/L高氯酸鈉的乙腈-水溶液35+65，V

17、/V】。流動(dòng)相C：1x10-3mo1/L的高氯酸和5x10-2mo1/L高氯酸鈉的乙腈-水溶液（80+20，V/V）。起始為流動(dòng)相A,在20min內(nèi)線性梯度變換到流動(dòng)相B：保持流動(dòng)相B5min,然后在40min內(nèi)梯度變換到流動(dòng)相C。流速：min。柱溫：30a。進(jìn)樣體積：101。檢測波長：311nm。檢測器靈敏度：。紙速：/min。測定定性取101樣品處理液（），注入高效液相色譜儀。根據(jù)其保留時(shí)間（參照表2-3-27）及紫外可見吸收光譜定性。定量標(biāo)準(zhǔn)曲線移取0紫外吸收劑標(biāo)準(zhǔn)液于10ml具塞刻度管中，用甲醇稀釋至刻度。取101進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄各峰面積，用峰面積與對應(yīng)的紫外吸收劑濃度作圖獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。取制備的樣品處理液，進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄其各峰面積。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的紫外吸收劑濃度。計(jì)算按下式計(jì)算防曬吸收劑含量：c=Ax25/(mx10000)式中：c一一樣品中紫外吸收劑的濃度，%；A從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的紫外吸收劑濃度，g/m1；m樣品質(zhì)量，g。7方法的準(zhǔn)確度、精密度樣品加標(biāo)加回收率為97100%,平均變異系數(shù)不大于2%(n=5)。注解：(1)由于PABA8和CINAII在所用色譜條件下不能分離(如圖2-3-36),在進(jìn)行分析之前確定樣品中是否同時(shí)存在這兩種物質(zhì)是必要的?？捎帽訉游鰧ζ溥M(jìn)行快速掃描。(2)若樣品中PABA