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![(人教版)DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件1_第2頁(yè)](http://file4.renrendoc.com/view/6c3376d706dee98b3f7d746ade264601/6c3376d706dee98b3f7d746ade2646012.gif)
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1、專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1 DNA的粗提取與鑒定專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(一)實(shí)驗(yàn)材料的選取1、材料:魚(yú)卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。(從中選取23種實(shí)驗(yàn)材料)2、原則:凡是含有DNA的生物材料都可以考慮,但選用DNA含量相對(duì)較高的生物組織,成功的可能性更大1、材料:魚(yú)卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。(從中選取23種實(shí)驗(yàn)材料)2、原則:凡是含有DNA的生物材料都可以考慮,但選用DNA含量相對(duì)較高的生物組織,成功的可能性更大 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(一
2、)實(shí)驗(yàn)材料的選取1、材料:魚(yú)卵、豬肝、菜花(二)破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液1、動(dòng)物細(xì)胞的破碎:2、植物細(xì)胞的破碎: 以雞血為例,在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水,同時(shí)用玻璃棒攪拌,過(guò)濾后收集濾液即可。 提取洋蔥DNA時(shí),在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽,進(jìn)行充分的攪拌和研磨,過(guò)濾后收集研磨液。(二)破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液1、動(dòng)物細(xì)胞的破碎:2、植加入洗滌劑和食鹽的作用分別是?如果研磨不充分,會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生什么影響?洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細(xì)胞膜,有利于DNA釋放;食鹽有利于DNA溶解會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)DNA釋放不完全,提取DNA量變少,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺
3、鑒定不顯示藍(lán)色等加入洗滌劑和食鹽的作用分別是?洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解(三)去除濾液中的雜質(zhì)方案一:在濾液中加入NaCl,使NaCl溶液濃度為2mol/L,過(guò)濾除去不溶的雜質(zhì),再調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度為0.14mol/L,析出DNA,過(guò)濾去除溶液中的雜質(zhì),再用2mol/L的NaCl溶解DNA。(三)去除濾液中的雜質(zhì)方案一:在濾液中加入NaCl,使NaC方案二:直接在濾液中加入嫩肉粉,反應(yīng)10-15min,嫩肉粉中木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)。方案三:將濾液放在60-75的恒溫水浴中保溫10-15,注意嚴(yán)格控制溫度范圍。方案二:直接在濾液中加入嫩肉粉,反應(yīng)10-15min,嫩肉粉-濃度可使DNA
4、溶解; -濃度可使DNA析出?;A(chǔ)知識(shí)一、DNA的溶解性0溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L 2mol/L0.14mol/L-濃度可使DNA溶解;基礎(chǔ)知識(shí)一、D二、酒精是一種常用有機(jī)溶劑,但-卻不能溶于酒精;三、蛋白酶能水解蛋白質(zhì),但是對(duì)-沒(méi)有影響四、大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080的高溫,而-在80以上才會(huì)變性DNADNADNA二、酒精是一種常用有機(jī)溶劑,但-卻不能溶于酒精;D五、洗滌劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞膜,去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對(duì)DNA沒(méi)有影響五、洗滌劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞膜,去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對(duì)DNA(四) DNA的析出與鑒定1、DNA的析出:將處理后的溶液過(guò)濾,加入與濾液體積相
5、等的、冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%),靜置23min,溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物,這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸去上面的水分。(四) DNA的析出與鑒定1、DNA的析出:2、DNA的鑒定:取兩支20mL的試管,各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解。然后,向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?;旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min,待試管冷卻后,比較兩支試管中溶液顏色的變化,看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。2、DNA的鑒定:六、DNA的鑒定DNA與-(沸水浴加熱)會(huì)被染成-,因此,二苯
6、胺可以作為鑒定DNA的試劑。-二苯胺藍(lán)色甲基綠(綠色)六、DNA的鑒定DNA與-(沸水浴加熱)會(huì)被染成操作提示2.加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí),動(dòng)作要輕緩,以免加劇DNA分子的斷裂,導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3.二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會(huì)影響鑒定的效果。1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料,每100ml加入3g檸檬酸鈉,作為抗凝劑。操作提示2.加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí),動(dòng)作要輕緩,以免加劇D方法步驟 加入物質(zhì) 目的 1.制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液 2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì) 20 m1蒸餾水 3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA 2 m1L的NaCI溶液40mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸餾水 5.濾取含DNA的
7、黏稠物 6.將DNA的黏稠物再溶解 2 molL的NaCl溶液20 mL 7.過(guò)濾含DNA的NaCl溶液 8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA 冷卻的95的酒精50 mL A:(1)向試管中加入0.015 molL的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺試劑 9.DNA的鑒定 B:(1)向試管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺試劑 方法步驟 加入物質(zhì) 目的 1.制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固 加速血細(xì)胞破裂 溶解DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地釋出 使含DNA的黏稠物
8、被留在紗布上 使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中 除去含DNA的濾液中的雜質(zhì) 提取DNA A出現(xiàn)藍(lán)色 B無(wú)變化 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固 加速血細(xì)胞破裂 2、實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對(duì)DNA有何影響?1、在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答:B答:前者是溶解DNA,后者是使DNA析出2、實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 3、DNA遇二苯胺(沸水浴)
9、會(huì)染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍(lán)色4、提取雞血中的DNA時(shí),為什么要除去血液中的上清液?答:DNA的提取,關(guān)鍵是對(duì)雜質(zhì)的去除,由于上清液是血液中的血漿部分,不含DNA,所以要除去上清液(含有蛋白質(zhì))。答:D3、DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成( ) 4、提取雞血1.懷古思今,激發(fā)科技報(bào)國(guó)熱情,科技創(chuàng)新助推中華民族偉大復(fù)興的夢(mèng)想早日實(shí)現(xiàn)2、歐共體形成、日本成為經(jīng)濟(jì)大國(guó)、不結(jié)盟運(yùn)動(dòng)興起和中國(guó)的振興,這些共同構(gòu)成了世界的多極化趨勢(shì)。3、多極化趨勢(shì)還只是一種趨勢(shì)和方向,不是一種成熟的國(guó)際關(guān)系格局。4、兩極格局雖然受到多極化的沖擊,在當(dāng)時(shí)仍是國(guó)際關(guān)系格局的總體的、基本的特征,因而多極化趨勢(shì)是兩極格局下的多極化趨勢(shì)。5、蘇聯(lián)解體后,兩極格局雖然瓦解,但多極化的世界格局并沒(méi)有最終形成,直到今天,仍處于向.6.這首題畫(huà)詩(shī)寫(xiě)景兼抒情,并未刻
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