PCR培訓(xùn)班考試題

1、.填空（每空0.5分，共15分）1.為加強(qiáng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室規(guī)范化管理，衛(wèi)生部于2010年發(fā)布醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室管理辦 法_上，北京市衛(wèi)生局為做好實驗室備案工作，于2012年發(fā)布了北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室技 術(shù)審核暫行規(guī)定。（2019）2,北京市衛(wèi)生局及各區(qū)縣衛(wèi)生局負(fù)責(zé)所轄行政區(qū)域內(nèi)地方醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的備案和監(jiān)督管理工 作。其中備案的技術(shù)審核工作流程主要包括：申報、一資料審核、現(xiàn)場驗收、整改_通知實驗室資料審核結(jié)果。醫(yī)療機(jī)構(gòu)的醫(yī)學(xué)檢驗科應(yīng)當(dāng)設(shè)有臨床細(xì)胞分子遺傳學(xué) 專業(yè)診療科目。備案的臨床基因擴(kuò) 增檢驗實驗室參加醫(yī)療機(jī)構(gòu)的年度校驗。（2019）.臨床基

2、因擴(kuò)增檢測的分析中質(zhì)量保證關(guān)鍵內(nèi)容包括：室內(nèi)質(zhì)控一和室間質(zhì)評。其中前者監(jiān)測和控制的是實驗室測定的重復(fù)性，而后者則通過對不同的實驗室測定結(jié)果的比對而評價實驗室測定的一準(zhǔn)確 度。（2019）. DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點是：螺旋中的兩條鏈為_ 反向平行 _，其中一條鏈的方向為 5-3 ，另一條 鏈的方向為 3-5。（2019）.核酸包括兩種類型：脫氧核糖核酸 和 核糖核酸，二者的主要區(qū)別為：前者由 ATCG四種堿基組成，而后者由AUCG四種堿基組成。（2019）.根據(jù)遺傳中心法則，遺傳信息的流動方向為DNA= RNA = 蛋白質(zhì)。（2019）.普通臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室一般包括下面四個分區(qū)：.試劑儲存

3、和準(zhǔn)備區(qū) 標(biāo)本制備區(qū)、, 擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。（2019）.提純的核酸樣品可根據(jù)OD260波長的光吸收值算出其含量，通過計算260/280的比值計算出其純度。（2019）.臨床基因擴(kuò)增實驗室檢測用的試劑應(yīng)當(dāng)經(jīng)國家藥監(jiān)局 批準(zhǔn)。（2019）. cfDNA的和中文名稱是細(xì)胞游離DNA，ctDNA的中文名稱是 循環(huán)腫瘤DNA。（2019）.在PCR前，為保護(hù)操作者和樣本，手工處理樣本應(yīng)該在樣本制備區(qū)的 生物安全柜中進(jìn)行，并使用帶濾芯的移液吸頭進(jìn)行樣本操作。（2020）.醫(yī)療廢物垃圾袋結(jié)扎采用“鵝口頸”套扎結(jié)扎形式。（2020）.銳器盒容積達(dá)到總體積的3/4時需要更換。（2020）.核酸檢測中，全

4、血樣本采集一般使用 EDTA 或枸櫞酸鹽抗凝，不使用 肝素 抗凝。（2020）.熒光定量PCR使用的Taqman探針兩端標(biāo)記有報告熒光R 5基團(tuán)和熒光 粹滅。3基團(tuán)。(2020).新冠病毒核酸檢測應(yīng)該在生物安全 11 級實驗室開展，同時采用生物安全一Q 級實驗室的個人防護(hù)。 (2020). PCR的基本反應(yīng)過程包括 變性 、 退火 、 延伸 。(2020). DNA/RNA的紫外吸收在2紫nm附近有最大吸收值。(2020).核酸的基本結(jié)構(gòu)單位是：核苷酸 ，其組成包括 堿基 、核糖或脫氧核糖和 磷酸(2020).是非題(在你認(rèn)為正確的句子后面打J,錯誤的后面打X,每題1分，共15分). 0附雙鏈

5、中，堿基A-T之間以三個氫鍵相連，G-C以兩個氫鍵相連。( X ) (2019).與細(xì)胞學(xué)初篩相比較，HPV核酸檢測初篩具有更高的敏感性。(7 ) (2019).使用有防“污染”作用的尿甘糖基酶( UNG)的PCR試劑盒，該酶可以降解含有UTP的擴(kuò)增產(chǎn)物。(7)(2019). DNA變性是指在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價鍵同時 也受影響。(X ) (2019).自制室內(nèi)質(zhì)控品時，應(yīng)對質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評價。 (7) (2019).定量PCR與定性PCR測定原理的最主要的區(qū)別點在于前者的測定點在PCR的指數(shù)擴(kuò)增期，而后者多為擴(kuò)增平臺 期。

6、(X ) (2019).處理PCR標(biāo)本時，在沒有生物安全柜的情況下，可用超凈臺操作。(X ) (2019 ).臨床檢驗中的系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定結(jié)果的SD增大。(X ) (2019 ).擴(kuò)增管沒有蓋好會造成PCR反應(yīng)液熱蒸發(fā)，直接影響結(jié)果，但不會成為一個污染源。(X ) (2019 ).核酸是極性化合物，溶于水，不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。(7 ) (2019 ).核酸的解鏈溫度(Tm )與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈低。 (X )(2019 ).無法參加室間質(zhì)量評價計劃時，可以用室內(nèi)質(zhì)控替代。(X ) (2019 ).一般進(jìn)行HCV-RNA檢測時宜采用EDTA抗凝血，不宜采用肝素抗

7、凝。(7) (2019 ).以次氯酸為主要成分的清潔劑在配制后可以長期使用。(X ) (2019 ).質(zhì)量管理體系的要素包括質(zhì)量方針、質(zhì)量目標(biāo)和質(zhì)量指標(biāo)。(7) (2019 ).核酸的復(fù)制是由3-5方向進(jìn)行。5-3( X ) (2020 ).核酸的解鏈溫度(Tm )與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈高。(7) (2020 ).標(biāo)本差錯率和實驗室布局的合理性均為實驗室質(zhì)量體系監(jiān)控指標(biāo)。(7) (2020 ).實驗室質(zhì)量體系文件無統(tǒng)一格式，無標(biāo)準(zhǔn)文件，應(yīng)切合實際，怎么做怎么寫。(X ) (2020)有標(biāo)準(zhǔn)文件.進(jìn)行新冠病毒核酸檢測時，采集鼻咽拭子標(biāo)本可使用棉簽。(X ) (2020)植絨拭子

8、.在常規(guī)應(yīng)用前，可由制造商對實驗室未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)行獨立驗證。(X ) (2020). DNA在中性或弱堿性溶液中易水解，但在酸性溶液中較穩(wěn)定，RNA在堿性溶液中穩(wěn)定。(X ) (2020) 答案：在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定，DNA在堿中變性，但不水解，RNA水解。. DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。( V ) (2020). DNA微溶于水，可溶于有機(jī)溶劑。( X ) (2020 )溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑.單選題(請將所選答案填寫在題后的括號中，每題1分，共25分).PCR技術(shù)的發(fā)明人是：A. Watson J.D.;B.

9、 .PCR技術(shù)的發(fā)明人是：A. Watson J.D.;B. Crick F. H.C.;C. Kary Mullis;D. Rosalind Franklin .二級生物安全柜能對以下哪些進(jìn)行防護(hù)：A.人員B.實驗品C.環(huán)境D.以上都是.在生物界尚無充足證據(jù)的信息流動過程的是A.蛋白質(zhì)RNAB. RNADNAC. DNADNAD. DNARNA4.核酸提取純化中，RNase潛在污染源是：(C ) (2019)(D ) (2019)(A ) (2019 )( D ) (2019)A.實驗室環(huán)境；B.實驗用品如吸頭、離心管等；C.實驗人員的手；D.以上都是.生物安全水平的級別共分為幾個等級(D

10、) (2019 )A. 1個B. 2個C. 3個D. 4個.有關(guān)于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？( A ) (2019 )A.在擴(kuò)增的指數(shù)期定量；B.采用內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)方法均可；C.可采用Taqman探針；D.在擴(kuò)增的終點測定定量.在選擇開展臨床檢驗項目時，應(yīng)首先考慮：(B ) (2019 )A.臨床有效性和分析有效性;B.A.臨床有效性和分析有效性;B.檢測精密度和檢測準(zhǔn)確度C.臨床有效性和檢測精密度;D.分析有效性和檢測準(zhǔn)確度8以下哪項有利于DNA的保存:(A ) (2019)A.加入EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性;B.加入少量DNase；C.溶于pH 3.0溶液;D.加入少量

11、RNase.實驗室的清潔工作應(yīng)在以下情況下進(jìn)行:）（2019）A.每次實驗后B.文件規(guī)定清潔時間C.實驗室發(fā)生污染時D.以上都是.熒光定量PCR檢測過程中，基線漂移的可能原因有:D (2019A.蒸發(fā);C.臨床有效性和檢測精密度;D.分析有效性和檢測準(zhǔn)確度8以下哪項有利于DNA的保存:(A ) (2019)A.加入EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性;B.加入少量DNase；C.溶于pH 3.0溶液;D.加入少量RNase.實驗室的清潔工作應(yīng)在以下情況下進(jìn)行:）（2019）A.每次實驗后B.文件規(guī)定清潔時間C.實驗室發(fā)生污染時D.以上都是.熒光定量PCR檢測過程中，基線漂移的可能原因有:D (

12、2019A.蒸發(fā);B.探針?biāo)釩.相鄰熒光通道干擾D.以上都是.將基因擴(kuò)增檢驗實驗室的產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)置為負(fù)壓狀態(tài)，目的是:B ） （2019）A.防止有生物傳染危險的樣本逸出；B.防止擴(kuò)增產(chǎn)物從該區(qū)逸出;C.防止該區(qū)灰塵的逸出;0.為了生物安全的目的.常用RNase抑制劑是）（2019）A.乙醇;B. DEPC；C.異丙醇;D.精胺.真核生物染色體DNA主要以下列哪種形式存在（2019）A.環(huán)狀單鏈分子B.線性單鏈分子C.環(huán)狀雙鏈分子D.線性雙鏈分子. TaqMan探針采用的是）（2019）A.熒光標(biāo)記的探針B.生物素標(biāo)記的探針C.同位素標(biāo)記的探針D.SYBR Green熒光染料.最大量程為20

13、0ul的微量移液器顯示讀數(shù)為020,實際的吸液容量值為：（C ） （2019）0.2 ul2ul20 ul200 ul16.有關(guān)核小體的錯誤敘述是:(D ) (2019)A.核小體是染色體的基本單位B. DNA和組蛋白共同構(gòu)成核小體C. DNA和組蛋白H1構(gòu)成核小體連接區(qū) D. RNA和組蛋白共同構(gòu)成核小體17.基因突變的實質(zhì)是：（A ） （2019 ）A.染色體上的DNA序列變化了B.染色體上的DNA變成了 RNAC.染色體上的DNA變成了蛋白質(zhì)D.染色體上的DNA高級結(jié)構(gòu)發(fā)生了局部改變18.如果一個PCR反應(yīng)體系中加入模板200個，經(jīng)過30個循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量將達(dá)到(C ) (2019)

14、A. 200X30X2B. 200X30C. 200X230D. 200X30219.Sanger測序體系與PCR反應(yīng)體系的主要區(qū)別是前者含有：(B ) (2019)A.模板B. ddNTPC. DNA聚合酶D.引物Sanger測序體系與PCR相同點：都是基于堿基互補(bǔ)配對原則，在DNA聚合酶作用下的聚合反應(yīng)。不同點：1反應(yīng)過成不同：PCR是引物對擴(kuò)增，測序則是單引物擴(kuò)增。2反應(yīng)成分不同：PCR是需要4種脫氧堿基，測序則有ddNTP20.分子雜交試驗不能用于：(C ) (2019)A.單鏈A.單鏈DNA分子之間的雜交B.單鏈DNA與RNA分子之間的雜交C.抗原與抗體分子之間的結(jié)合口.雙鏈DNA與

15、RNA分子之間的雜交21.在21.在Sanger基因測序技術(shù)中所使用的酶是:(A ) (2019)A.DNA聚合酶A.DNA聚合酶B. RNA聚合酶C.DNA連接酶D. DNA拓?fù)涿?2.雙鏈DNA中的堿基對有：( D ) (2019)A. A-UB. G-TC. C-A D. T-A23.下列四個DNA片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是(D ) (2019)A. GAAGAAB. TGGAAAC. GAAAAGD. GAATTC24.核酸分子中儲存遺傳信息的關(guān)鍵部分是：(D ) (2019)A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. DNA25.核酸檢測探針的標(biāo)志性特征是：(A ) (2019 )A

16、. 一小段已知序列的單鏈核酸；B. 一小段未知序列的單鏈核酸；C. 一小段已知序列的雙鏈核酸；D.有同位素或非同位素標(biāo)記物。作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：應(yīng)是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。應(yīng)帶有容易被檢測的標(biāo)記。它可以包括整個基因，也可以僅僅是基因的一部分；可以是DNA本身，可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA。.核酸分離純化的目的是：(D ) (2020 )A.除去PCR抑制物B.增加靶核酸濃度，使之達(dá)到PCR測定范圍C.增加樣本均一性，保證測定精密度和重復(fù)性C.增加樣本均一性，保證測定精密度和重復(fù)性D.以上都是. mRNA約占總RNA的百分?jǐn)?shù)為：(A ) (2020)A. 5%B.

17、 10%C. 15%D, 20%.分子檢測對標(biāo)本采集容器的要求是：(E ) (2020)A.密閉 B. 一次性 C.無DNase和RNase D.無菌 E.以上均是.關(guān)于基因擴(kuò)增檢測實驗室分區(qū)，以下說法不正確的是：(D ) (2020)A.外周血游離DNA標(biāo)本制備可與細(xì)胞/組織標(biāo)本制備區(qū)共用；B.須注意實驗室空氣流向；C.實驗室應(yīng)有充分的通風(fēng)換氣； D.緩沖間不是必需的； E.傳遞窗不是必需的. “無基因”或“無核酸”概念是指：(E ) (2020)A.在基因擴(kuò)增檢測操作時，要注意防止因為擴(kuò)增產(chǎn)物污染所致檢測假陽性；B.在基因擴(kuò)增檢測操作時，要注意防止因為標(biāo)本間交叉污染所致檢測假陽性；C.每次

18、檢測后實驗室內(nèi)的充分通風(fēng)及清潔；D.實驗室各區(qū)物品的專用；E.以上均是.商品試劑的性能驗證的合格判斷標(biāo)準(zhǔn)是：(D ) (2020)A.衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；B.國際標(biāo)準(zhǔn)；C.滿足臨床疾病的診療要求；D.試劑盒說明書上所宣稱的檢測性能E.以上均是. L-J指控圖的失控規(guī)則制定的依據(jù)是：(B ) (2020 )A.各實驗室根據(jù)自身的情況具體確定；B.統(tǒng)計學(xué)的“小概率事件”原理；C.超過均值3SD；D.超過均值2SD；E.陰性質(zhì)控品檢測為陽性.下列哪一種病毒遺傳物質(zhì)為RNA ( D ) (2020 )A.乙肝病毒B.人乳頭瘤病毒 C.巨細(xì)胞病毒D.新型冠狀病毒COVID-19.以下在PCR反應(yīng)中，對擴(kuò)增產(chǎn)物

19、的特異性起決定性作用的是：(B ) (2020 )A.模板B.引物C. dNTPD.鎂離子.有關(guān)于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？( A ) (2020 )A.在指數(shù)擴(kuò)增初期定量；B.在擴(kuò)增的終點定量；C.可采用Taqman探針;C.可采用Taqman探針;36.在選擇開展臨床檢驗項目時，應(yīng)首先考慮:(B ) (36.在選擇開展臨床檢驗項目時，應(yīng)首先考慮:(B ) (2020)A.臨床預(yù)期用途;B.檢測精密度和檢測準(zhǔn)確度;C.檢測精密度;D.檢測準(zhǔn)確度37. 一個PCR反應(yīng)體系中起始模板量為500，經(jīng)過30個循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量將達(dá)到(C ) (2020)A. 500X30X2B. 5

20、00A. 500X30X2B. 5002 X 30C. 500 X 230D. 500X30238.對COVID-19疑似患者采樣，需要（C）級生物安全個人防護(hù)裝備（2020）A. IB. IIC. m39.手衛(wèi)生分為(D )步(2020)A. 4A. 4B. 5C. 6D. 7.除（A ）外均可有效滅活新型冠狀病毒（2020）A.氯已定B. 56 30分鐘C. 75%乙醇D.含氯消毒劑.在基因擴(kuò)增檢測中，全血或骨髓標(biāo)本不能用肝素抗凝，原因是（D ） （2020）A.肝素是TaqDNA聚合酶活性的強(qiáng)抑制劑B.肝素對Mg+有絡(luò)合作用C.經(jīng)典的核酸提取方法很難去除肝素D.以上A和C.下列哪種情況需

21、對PCR檢測項目進(jìn)行方法學(xué)驗證實驗：（D ） （2020）A.開展新項目前B.更換試劑品牌C,更換儀器D.以上全是.在臨床基因擴(kuò)增檢驗中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控品發(fā)生失控，常見的原因有下述各項，除（B ）外（2020）A.核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等B.擴(kuò)增儀孔間溫度的不一致性 C.擴(kuò)增產(chǎn)物的污染 D. Taq酶和/或反轉(zhuǎn)錄酶的失活. PCR擴(kuò)增檢測采用內(nèi)標(biāo)，可以識別擴(kuò)增檢測的（C ） （2020）A.假陰性B.假陽性 C.假陰性、假陽性都可以預(yù)防 D.假陰性、假陽性都不能預(yù)防.在一個DNA分子中，如G所占摩爾比為17.2%,則A所占摩爾比為（B ） （2020）A

22、. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6%四.簡答題（每題5分，共25分）1.簡述什么情況下應(yīng)進(jìn)行性能驗證？ （5分）（2019）答：（1）在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由實驗室對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)行獨立驗證。（2）任何嚴(yán)重影響檢測系統(tǒng)分析性能的情況發(fā)生后，如儀器搬遷、設(shè)施、環(huán)境嚴(yán)重失控等。（3）常規(guī)使用期間，定期做。（4）啟用新的檢測系統(tǒng)：更換試劑、儀器、校準(zhǔn)品溯源性改變2.臨床PCR實驗室質(zhì)量管理體系文件應(yīng)包含哪些內(nèi)容？ （5分）（2019）答：（1質(zhì)量手冊：質(zhì)量方針和質(zhì)量目標(biāo)的聲明。（2）準(zhǔn)則要求的程序和記錄。（3）實驗室規(guī)定的文件和記錄：為確保有效策劃、運行

23、并控制其過程。（4）適用的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及其它規(guī)范文件。3.請簡述完整的員工培訓(xùn)計劃應(yīng)包含哪些內(nèi)容。（5分）（2019）答：（1）培訓(xùn)所涉及的范圍：儀器設(shè)備的使用、維護(hù)和校準(zhǔn)。試劑方法原理。質(zhì)量管理體系。相關(guān)法律法規(guī)，相 關(guān)領(lǐng)域的新技術(shù)、新理念和新進(jìn)展。實驗操作技能等。（2）如何培訓(xùn)：講座，討論，自學(xué)和參加培訓(xùn)班。（3）培訓(xùn)的評估：書面考試，實驗考核，討論心得，論文，綜述等。.感染性疾病的定量、定性檢測，人基因組的基因型檢測，對上述三類PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度水平和型別如 何要求？（5分）（2019）答：定量PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：測定線性范圍內(nèi)的高、中、低三種濃度，型別：生物DNA/R

24、NA參考標(biāo)準(zhǔn)品；定性PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：接近方法測定下限（2-4倍）的濃度，型別：生物DNA參考標(biāo)準(zhǔn)品；人基因組的基因型檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：型別：人類基因組DNA參考標(biāo)準(zhǔn)品。.簡述生物安全的概念、實驗室生物安全水平的概念。（5分）（2019）答：實驗室生物安全：為了避免微生物和醫(yī)學(xué)實驗室中有害或有潛在危害的生物因子對人、環(huán)境和社會造成的危害 或潛在危害，而采取的防護(hù)措施（硬件）和管理措施（軟件），達(dá)到對人、環(huán)境和社會的安全防護(hù)目的。生物安全水平：根據(jù)實驗室的工作性質(zhì)及可能分離到的病原體等級進(jìn)行安全防護(hù)水平的劃分.什么是室內(nèi)質(zhì)量控制？（5分）（2020）答：由實驗室工作人員，采取一

25、定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室 工作的精密度，提高本實驗室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠，可否發(fā)出報告 的一項工作。包括三個方面的內(nèi)容：測定前的質(zhì)量控制、統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制、質(zhì)量控制的評價。.請從氣流方向、高效過濾器位置、保護(hù)對象、操作對象幾方面比較生物安全柜、超凈臺、通風(fēng)櫥三種設(shè)備。（5分）（2020） 答：生物安全柜是一種負(fù)壓凈化工作臺，氣流方向是由外向內(nèi)，高效過濾器位置在生物安全柜的頂部漏器上，保護(hù) 對象為實驗室和實驗員超凈臺是正壓送風(fēng)，氣流方向是由內(nèi)向外，進(jìn)風(fēng)口在背面或正面的下方，工作臺正面的金屬網(wǎng)罩內(nèi)是超級濾清器。 保護(hù)對象為實驗材料實驗室通風(fēng)櫥氣流控制由控制器與風(fēng)閥來完成，氣流方向是由外向內(nèi)，過濾裝置位于通風(fēng)櫥的上部。保護(hù)對象為實 驗室和實驗員。.進(jìn)行新冠病毒核酸檢測的樣本處理區(qū)試驗