PCR培訓班考試題

1、.填空（每空0.5分，共15分）1.為加強醫(yī)療機構臨床基因擴增實驗室規(guī)范化管理，衛(wèi)生部于2010年發(fā)布醫(yī)療機構臨床基因擴增實驗室管理辦 法_上，北京市衛(wèi)生局為做好實驗室備案工作，于2012年發(fā)布了北京市醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室技 術審核暫行規(guī)定。（2019）2,北京市衛(wèi)生局及各區(qū)縣衛(wèi)生局負責所轄行政區(qū)域內地方醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室的備案和監(jiān)督管理工 作。其中備案的技術審核工作流程主要包括：申報、一資料審核、現(xiàn)場驗收、整改_通知實驗室資料審核結果。醫(yī)療機構的醫(yī)學檢驗科應當設有臨床細胞分子遺傳學 專業(yè)診療科目。備案的臨床基因擴 增檢驗實驗室參加醫(yī)療機構的年度校驗。（2019）.臨床基

2、因擴增檢測的分析中質量保證關鍵內容包括：室內質控一和室間質評。其中前者監(jiān)測和控制的是實驗室測定的重復性，而后者則通過對不同的實驗室測定結果的比對而評價實驗室測定的一準確 度。（2019）. DNA雙螺旋結構的特點是：螺旋中的兩條鏈為_ 反向平行 _，其中一條鏈的方向為 5-3 ，另一條 鏈的方向為 3-5。（2019）.核酸包括兩種類型：脫氧核糖核酸 和 核糖核酸，二者的主要區(qū)別為：前者由 ATCG四種堿基組成，而后者由AUCG四種堿基組成。（2019）.根據(jù)遺傳中心法則，遺傳信息的流動方向為DNA= RNA = 蛋白質。（2019）.普通臨床基因擴增檢驗實驗室一般包括下面四個分區(qū)：.試劑儲存

3、和準備區(qū) 標本制備區(qū)、, 擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。（2019）.提純的核酸樣品可根據(jù)OD260波長的光吸收值算出其含量，通過計算260/280的比值計算出其純度。（2019）.臨床基因擴增實驗室檢測用的試劑應當經(jīng)國家藥監(jiān)局 批準。（2019）. cfDNA的和中文名稱是細胞游離DNA，ctDNA的中文名稱是 循環(huán)腫瘤DNA。（2019）.在PCR前，為保護操作者和樣本，手工處理樣本應該在樣本制備區(qū)的 生物安全柜中進行，并使用帶濾芯的移液吸頭進行樣本操作。（2020）.醫(yī)療廢物垃圾袋結扎采用“鵝口頸”套扎結扎形式。（2020）.銳器盒容積達到總體積的3/4時需要更換。（2020）.核酸檢測中，全

4、血樣本采集一般使用 EDTA 或枸櫞酸鹽抗凝，不使用 肝素 抗凝。（2020）.熒光定量PCR使用的Taqman探針兩端標記有報告熒光R 5基團和熒光 粹滅。3基團。(2020).新冠病毒核酸檢測應該在生物安全 11 級實驗室開展，同時采用生物安全一Q 級實驗室的個人防護。 (2020). PCR的基本反應過程包括 變性 、 退火 、 延伸 。(2020). DNA/RNA的紫外吸收在2紫nm附近有最大吸收值。(2020).核酸的基本結構單位是：核苷酸 ，其組成包括 堿基 、核糖或脫氧核糖和 磷酸(2020).是非題(在你認為正確的句子后面打J,錯誤的后面打X,每題1分，共15分). 0附雙鏈

5、中，堿基A-T之間以三個氫鍵相連，G-C以兩個氫鍵相連。( X ) (2019).與細胞學初篩相比較，HPV核酸檢測初篩具有更高的敏感性。(7 ) (2019).使用有防“污染”作用的尿甘糖基酶( UNG)的PCR試劑盒，該酶可以降解含有UTP的擴增產(chǎn)物。(7)(2019). DNA變性是指在物理或化學因素的作用下，導致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價鍵同時 也受影響。(X ) (2019).自制室內質控品時，應對質控品的均勻性和穩(wěn)定性進行評價。 (7) (2019).定量PCR與定性PCR測定原理的最主要的區(qū)別點在于前者的測定點在PCR的指數(shù)擴增期，而后者多為擴增平臺 期。

6、(X ) (2019).處理PCR標本時，在沒有生物安全柜的情況下，可用超凈臺操作。(X ) (2019 ).臨床檢驗中的系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質控物測定結果的SD增大。(X ) (2019 ).擴增管沒有蓋好會造成PCR反應液熱蒸發(fā)，直接影響結果，但不會成為一個污染源。(X ) (2019 ).核酸是極性化合物，溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑。(7 ) (2019 ).核酸的解鏈溫度(Tm )與G+C含量有關，G+C含量愈大，Tm愈低。 (X )(2019 ).無法參加室間質量評價計劃時，可以用室內質控替代。(X ) (2019 ).一般進行HCV-RNA檢測時宜采用EDTA抗凝血，不宜采用肝素抗

7、凝。(7) (2019 ).以次氯酸為主要成分的清潔劑在配制后可以長期使用。(X ) (2019 ).質量管理體系的要素包括質量方針、質量目標和質量指標。(7) (2019 ).核酸的復制是由3-5方向進行。5-3( X ) (2020 ).核酸的解鏈溫度(Tm )與G+C含量有關，G+C含量愈大，Tm愈高。(7) (2020 ).標本差錯率和實驗室布局的合理性均為實驗室質量體系監(jiān)控指標。(7) (2020 ).實驗室質量體系文件無統(tǒng)一格式，無標準文件，應切合實際，怎么做怎么寫。(X ) (2020)有標準文件.進行新冠病毒核酸檢測時，采集鼻咽拭子標本可使用棉簽。(X ) (2020)植絨拭子

8、.在常規(guī)應用前，可由制造商對實驗室未加修改而使用的已確認的檢驗程序進行獨立驗證。(X ) (2020). DNA在中性或弱堿性溶液中易水解，但在酸性溶液中較穩(wěn)定，RNA在堿性溶液中穩(wěn)定。(X ) (2020) 答案：在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定，DNA在堿中變性，但不水解，RNA水解。. DNA變性的本質是雙鏈間氫鍵的斷裂。( V ) (2020). DNA微溶于水，可溶于有機溶劑。( X ) (2020 )溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑.單選題(請將所選答案填寫在題后的括號中，每題1分，共25分).PCR技術的發(fā)明人是：A. Watson J.D.;B.

9、 .PCR技術的發(fā)明人是：A. Watson J.D.;B. Crick F. H.C.;C. Kary Mullis;D. Rosalind Franklin .二級生物安全柜能對以下哪些進行防護：A.人員B.實驗品C.環(huán)境D.以上都是.在生物界尚無充足證據(jù)的信息流動過程的是A.蛋白質RNAB. RNADNAC. DNADNAD. DNARNA4.核酸提取純化中，RNase潛在污染源是：(C ) (2019)(D ) (2019)(A ) (2019 )( D ) (2019)A.實驗室環(huán)境；B.實驗用品如吸頭、離心管等；C.實驗人員的手；D.以上都是.生物安全水平的級別共分為幾個等級(D

10、) (2019 )A. 1個B. 2個C. 3個D. 4個.有關于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？( A ) (2019 )A.在擴增的指數(shù)期定量；B.采用內標和外標方法均可；C.可采用Taqman探針；D.在擴增的終點測定定量.在選擇開展臨床檢驗項目時，應首先考慮：(B ) (2019 )A.臨床有效性和分析有效性;B.A.臨床有效性和分析有效性;B.檢測精密度和檢測準確度C.臨床有效性和檢測精密度;D.分析有效性和檢測準確度8以下哪項有利于DNA的保存:(A ) (2019)A.加入EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性;B.加入少量DNase；C.溶于pH 3.0溶液;D.加入少量

11、RNase.實驗室的清潔工作應在以下情況下進行:）（2019）A.每次實驗后B.文件規(guī)定清潔時間C.實驗室發(fā)生污染時D.以上都是.熒光定量PCR檢測過程中，基線漂移的可能原因有:D (2019A.蒸發(fā);C.臨床有效性和檢測精密度;D.分析有效性和檢測準確度8以下哪項有利于DNA的保存:(A ) (2019)A.加入EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性;B.加入少量DNase；C.溶于pH 3.0溶液;D.加入少量RNase.實驗室的清潔工作應在以下情況下進行:）（2019）A.每次實驗后B.文件規(guī)定清潔時間C.實驗室發(fā)生污染時D.以上都是.熒光定量PCR檢測過程中，基線漂移的可能原因有:D (

12、2019A.蒸發(fā);B.探針水解C.相鄰熒光通道干擾D.以上都是.將基因擴增檢驗實驗室的產(chǎn)物分析區(qū)設置為負壓狀態(tài)，目的是:B ） （2019）A.防止有生物傳染危險的樣本逸出；B.防止擴增產(chǎn)物從該區(qū)逸出;C.防止該區(qū)灰塵的逸出;0.為了生物安全的目的.常用RNase抑制劑是）（2019）A.乙醇;B. DEPC；C.異丙醇;D.精胺.真核生物染色體DNA主要以下列哪種形式存在（2019）A.環(huán)狀單鏈分子B.線性單鏈分子C.環(huán)狀雙鏈分子D.線性雙鏈分子. TaqMan探針采用的是）（2019）A.熒光標記的探針B.生物素標記的探針C.同位素標記的探針D.SYBR Green熒光染料.最大量程為20

13、0ul的微量移液器顯示讀數(shù)為020,實際的吸液容量值為：（C ） （2019）0.2 ul2ul20 ul200 ul16.有關核小體的錯誤敘述是:(D ) (2019)A.核小體是染色體的基本單位B. DNA和組蛋白共同構成核小體C. DNA和組蛋白H1構成核小體連接區(qū) D. RNA和組蛋白共同構成核小體17.基因突變的實質是：（A ） （2019 ）A.染色體上的DNA序列變化了B.染色體上的DNA變成了 RNAC.染色體上的DNA變成了蛋白質D.染色體上的DNA高級結構發(fā)生了局部改變18.如果一個PCR反應體系中加入模板200個，經(jīng)過30個循環(huán)后擴增產(chǎn)物的數(shù)量將達到(C ) (2019)

14、A. 200X30X2B. 200X30C. 200X230D. 200X30219.Sanger測序體系與PCR反應體系的主要區(qū)別是前者含有：(B ) (2019)A.模板B. ddNTPC. DNA聚合酶D.引物Sanger測序體系與PCR相同點：都是基于堿基互補配對原則，在DNA聚合酶作用下的聚合反應。不同點：1反應過成不同：PCR是引物對擴增，測序則是單引物擴增。2反應成分不同：PCR是需要4種脫氧堿基，測序則有ddNTP20.分子雜交試驗不能用于：(C ) (2019)A.單鏈A.單鏈DNA分子之間的雜交B.單鏈DNA與RNA分子之間的雜交C.抗原與抗體分子之間的結合口.雙鏈DNA與

15、RNA分子之間的雜交21.在21.在Sanger基因測序技術中所使用的酶是:(A ) (2019)A.DNA聚合酶A.DNA聚合酶B. RNA聚合酶C.DNA連接酶D. DNA拓撲酶22.雙鏈DNA中的堿基對有：( D ) (2019)A. A-UB. G-TC. C-A D. T-A23.下列四個DNA片段中含有回文結構的是(D ) (2019)A. GAAGAAB. TGGAAAC. GAAAAGD. GAATTC24.核酸分子中儲存遺傳信息的關鍵部分是：(D ) (2019)A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. DNA25.核酸檢測探針的標志性特征是：(A ) (2019 )A

16、. 一小段已知序列的單鏈核酸；B. 一小段未知序列的單鏈核酸；C. 一小段已知序列的雙鏈核酸；D.有同位素或非同位素標記物。作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件：應是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。應帶有容易被檢測的標記。它可以包括整個基因，也可以僅僅是基因的一部分；可以是DNA本身，可以是由之轉錄而來的RNA。.核酸分離純化的目的是：(D ) (2020 )A.除去PCR抑制物B.增加靶核酸濃度，使之達到PCR測定范圍C.增加樣本均一性，保證測定精密度和重復性C.增加樣本均一性，保證測定精密度和重復性D.以上都是. mRNA約占總RNA的百分數(shù)為：(A ) (2020)A. 5%B.

17、 10%C. 15%D, 20%.分子檢測對標本采集容器的要求是：(E ) (2020)A.密閉 B. 一次性 C.無DNase和RNase D.無菌 E.以上均是.關于基因擴增檢測實驗室分區(qū)，以下說法不正確的是：(D ) (2020)A.外周血游離DNA標本制備可與細胞/組織標本制備區(qū)共用；B.須注意實驗室空氣流向；C.實驗室應有充分的通風換氣； D.緩沖間不是必需的； E.傳遞窗不是必需的. “無基因”或“無核酸”概念是指：(E ) (2020)A.在基因擴增檢測操作時，要注意防止因為擴增產(chǎn)物污染所致檢測假陽性；B.在基因擴增檢測操作時，要注意防止因為標本間交叉污染所致檢測假陽性；C.每次

18、檢測后實驗室內的充分通風及清潔；D.實驗室各區(qū)物品的專用；E.以上均是.商品試劑的性能驗證的合格判斷標準是：(D ) (2020)A.衛(wèi)生行業(yè)標準；B.國際標準；C.滿足臨床疾病的診療要求；D.試劑盒說明書上所宣稱的檢測性能E.以上均是. L-J指控圖的失控規(guī)則制定的依據(jù)是：(B ) (2020 )A.各實驗室根據(jù)自身的情況具體確定；B.統(tǒng)計學的“小概率事件”原理；C.超過均值3SD；D.超過均值2SD；E.陰性質控品檢測為陽性.下列哪一種病毒遺傳物質為RNA ( D ) (2020 )A.乙肝病毒B.人乳頭瘤病毒 C.巨細胞病毒D.新型冠狀病毒COVID-19.以下在PCR反應中，對擴增產(chǎn)物

19、的特異性起決定性作用的是：(B ) (2020 )A.模板B.引物C. dNTPD.鎂離子.有關于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？( A ) (2020 )A.在指數(shù)擴增初期定量；B.在擴增的終點定量；C.可采用Taqman探針;C.可采用Taqman探針;36.在選擇開展臨床檢驗項目時，應首先考慮:(B ) (36.在選擇開展臨床檢驗項目時，應首先考慮:(B ) (2020)A.臨床預期用途;B.檢測精密度和檢測準確度;C.檢測精密度;D.檢測準確度37. 一個PCR反應體系中起始模板量為500，經(jīng)過30個循環(huán)后擴增產(chǎn)物的數(shù)量將達到(C ) (2020)A. 500X30X2B. 5

20、00A. 500X30X2B. 5002 X 30C. 500 X 230D. 500X30238.對COVID-19疑似患者采樣，需要（C）級生物安全個人防護裝備（2020）A. IB. IIC. m39.手衛(wèi)生分為(D )步(2020)A. 4A. 4B. 5C. 6D. 7.除（A ）外均可有效滅活新型冠狀病毒（2020）A.氯已定B. 56 30分鐘C. 75%乙醇D.含氯消毒劑.在基因擴增檢測中，全血或骨髓標本不能用肝素抗凝，原因是（D ） （2020）A.肝素是TaqDNA聚合酶活性的強抑制劑B.肝素對Mg+有絡合作用C.經(jīng)典的核酸提取方法很難去除肝素D.以上A和C.下列哪種情況需

21、對PCR檢測項目進行方法學驗證實驗：（D ） （2020）A.開展新項目前B.更換試劑品牌C,更換儀器D.以上全是.在臨床基因擴增檢驗中，弱陽性室內質控品發(fā)生失控，常見的原因有下述各項，除（B ）外（2020）A.核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標本中擴增抑制物的殘留等B.擴增儀孔間溫度的不一致性 C.擴增產(chǎn)物的污染 D. Taq酶和/或反轉錄酶的失活. PCR擴增檢測采用內標，可以識別擴增檢測的（C ） （2020）A.假陰性B.假陽性 C.假陰性、假陽性都可以預防 D.假陰性、假陽性都不能預防.在一個DNA分子中，如G所占摩爾比為17.2%,則A所占摩爾比為（B ） （2020）A

22、. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6%四.簡答題（每題5分，共25分）1.簡述什么情況下應進行性能驗證？ （5分）（2019）答：（1）在常規(guī)應用前，應由實驗室對未加修改而使用的已確認的檢驗程序進行獨立驗證。（2）任何嚴重影響檢測系統(tǒng)分析性能的情況發(fā)生后，如儀器搬遷、設施、環(huán)境嚴重失控等。（3）常規(guī)使用期間，定期做。（4）啟用新的檢測系統(tǒng)：更換試劑、儀器、校準品溯源性改變2.臨床PCR實驗室質量管理體系文件應包含哪些內容？ （5分）（2019）答：（1質量手冊：質量方針和質量目標的聲明。（2）準則要求的程序和記錄。（3）實驗室規(guī)定的文件和記錄：為確保有效策劃、運行

23、并控制其過程。（4）適用的法規(guī)、標準及其它規(guī)范文件。3.請簡述完整的員工培訓計劃應包含哪些內容。（5分）（2019）答：（1）培訓所涉及的范圍：儀器設備的使用、維護和校準。試劑方法原理。質量管理體系。相關法律法規(guī)，相 關領域的新技術、新理念和新進展。實驗操作技能等。（2）如何培訓：講座，討論，自學和參加培訓班。（3）培訓的評估：書面考試，實驗考核，討論心得，論文，綜述等。.感染性疾病的定量、定性檢測，人基因組的基因型檢測，對上述三類PCR檢測的室內質控品的濃度水平和型別如 何要求？（5分）（2019）答：定量PCR檢測的室內質控品的濃度：測定線性范圍內的高、中、低三種濃度，型別：生物DNA/R

24、NA參考標準品；定性PCR檢測的室內質控品的濃度：接近方法測定下限（2-4倍）的濃度，型別：生物DNA參考標準品；人基因組的基因型檢測的室內質控品的濃度：型別：人類基因組DNA參考標準品。.簡述生物安全的概念、實驗室生物安全水平的概念。（5分）（2019）答：實驗室生物安全：為了避免微生物和醫(yī)學實驗室中有害或有潛在危害的生物因子對人、環(huán)境和社會造成的危害 或潛在危害，而采取的防護措施（硬件）和管理措施（軟件），達到對人、環(huán)境和社會的安全防護目的。生物安全水平：根據(jù)實驗室的工作性質及可能分離到的病原體等級進行安全防護水平的劃分.什么是室內質量控制？（5分）（2020）答：由實驗室工作人員，采取一

25、定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室 工作的精密度，提高本實驗室常規(guī)工作中批內、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠，可否發(fā)出報告 的一項工作。包括三個方面的內容：測定前的質量控制、統(tǒng)計學質量控制、質量控制的評價。.請從氣流方向、高效過濾器位置、保護對象、操作對象幾方面比較生物安全柜、超凈臺、通風櫥三種設備。（5分）（2020） 答：生物安全柜是一種負壓凈化工作臺，氣流方向是由外向內，高效過濾器位置在生物安全柜的頂部漏器上，保護 對象為實驗室和實驗員超凈臺是正壓送風，氣流方向是由內向外，進風口在背面或正面的下方，工作臺正面的金屬網(wǎng)罩內是超級濾清器。 保護對象為實驗材料實驗室通風櫥氣流控制由控制器與風閥來完成，氣流方向是由外向內，過濾裝置位于通風櫥的上部。保護對象為實 驗室和實驗員。.進行新冠病毒核酸檢測的樣本處理區(qū)試驗