實驗一、油鏡的使用、細菌的革蘭氏染色和細菌形態(tài)的觀察課件

1、微生物學實驗實 驗 要 求堅持課前預習不遲到，不早退，更不能無故缺課；嚴格按正確規(guī)范實驗方法進行實驗，作好記錄；保持實驗室整潔注意安全事實求是地、獨立地寫好實驗報告實驗報告姓名、班級和學號實驗題目實驗原理（略寫）實驗操作（略寫）實驗結果畫圖文字描述分析和討論思考題實驗一、油鏡的使用、細菌的革蘭氏染色和細菌形態(tài)的觀察教學目標或要求：鞏固和掌握顯微鏡油鏡的正確使用；學習細菌制片和單染色技術；觀察細菌的三種基本形態(tài)；對人體上的微生物染色檢查，初步建立無菌操作的概念；學習細菌的革蘭氏染色原理和方法 。顯微鏡油鏡的使用油鏡頭的識別和重要參數(shù)油鏡物鏡的工作原理油鏡的使用方法和注意事項油鏡物鏡的工作原理使用

2、油質作為玻片與接物鏡之間的介質油浸系可以增加顯微鏡的放大倍數(shù)可以增加視野的照明度可以增大顯微鏡的分辨率油鏡的使用方法和注意事項1、用低倍鏡對光。最大光圈2、低倍鏡觀察（尋找觀察目標）。適當縮小光圈3、高倍鏡觀察（選取理想的觀察目標）。4、油鏡觀察：高倍鏡觀察后- 上升鏡筒-油鏡轉至正下方，在載玻片上加一小滴油-小心地下降鏡筒使鏡頭浸在油里-用粗螺旋將鏡筒緩慢上升，尋找目標（物象）用細螺旋調節(jié)，使物象清晰-觀察記錄。最大光圈5、觀察完畢。上升鏡筒，轉動物鏡轉換器，使油鏡物鏡偏位。用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上的油跡，再取一張擦鏡紙醮上二甲苯擦去鏡頭上殘留的香柏油，最后再用一張干凈的擦鏡紙擦去殘留在鏡頭上

3、的二甲苯。6、將顯微鏡各部分還原，放回箱中。染 料堿性染料帶正電染料。其陽離子部分為發(fā)色基團，可與細胞中帶負電的組分結合。如結晶紫沙黃, 甲基藍,堿性復紅等。酸性染料帶負電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團，可與細胞中帶正電的組分結合。如剛果紅、酸性復紅 等。脂溶性染料如Sudan black。 多數(shù)染料都是中性有機鹽。據(jù)著色基的不同可分為以下類型：涂片干燥固定染色12min水洗、吸干鏡檢細菌的單染色革蘭氏染色法：是1884年由丹麥病理學家C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G）兩大類，是細菌學上最常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細菌分為G+菌

4、和G菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。革蘭氏染色法基本原理1、活材料：培養(yǎng)24小時的大腸桿菌和蘇云金芽孢桿菌。2、染色液和試劑：結晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸復紅 、蒸餾水、香柏油。3、器材：載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。實驗材料（1）涂片 （2）晾干（3）固定（4）結晶紫染色：加適量（以蓋滿細菌涂面）的結晶紫染色液染色1min；水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。（5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。方法與步驟革蘭氏染色法操作步驟涂片干燥固定結晶紫1min水洗I-KI 1min水洗95%乙醇脫色約1520s水洗沙黃或石炭酸復紅 1min水洗干燥鏡檢 革

5、蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽性桿菌實驗內(nèi)容1、用石炭酸復紅對蘇云金芽孢桿菌、大腸桿菌進行單染色，在顯微鏡油鏡下觀察形態(tài)；2.用混合涂片的方法對大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌進行革蘭氏染色3.自選材料：用牙簽挑取牙垢觀察1.革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。注意事項2.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。3.選用幼齡的細菌。G+菌培養(yǎng)12h-16h，E.coli培養(yǎng)24h。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。繪出革蘭氏染