食品中脂肪酸的測(cè)定方法（食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）

1、 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪酸的測(cè)定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中脂肪酸含量的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中脂肪酸含量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中總脂肪、飽和脂肪（酸）、不飽和脂肪（酸）含量的測(cè)定。第一法 內(nèi)標(biāo)法原理加入內(nèi)標(biāo)物的樣品經(jīng)水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后，在堿性條件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，經(jīng)毛細(xì)管氣相色譜分析，內(nèi)標(biāo)法定量測(cè)定脂肪酸甲酯含量。依據(jù)各種脂肪酸甲酯含量和轉(zhuǎn)換系數(shù)計(jì)算出總脂肪、飽和脂肪（酸）、單不飽和脂肪（酸）、多不飽和脂肪（酸）含量。試劑和材料注：除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑鹽酸（HCl）。氨水（NH3H2O）。焦性沒(méi)食子酸（

2、C6H6O3）。乙醚（C4H10O）。石油醚：沸程3060。乙醇（C2H6O） （95%）。甲醇（CH3OH）：色譜純。氫氧化鈉（NaOH）。正庚烷CH3（CH2）5CH3：色譜純。三氟化硼甲醇溶液，濃度為15%。無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）。氯化鈉（NaCl）。試劑配制鹽酸溶液（8.3 mol/L）：量取250 mL鹽酸，用110 mL水稀釋，混勻，室溫下可放置2個(gè)月。乙醚石油醚混合液（體積比1:1）：取等體積的乙醚和石油醚，混勻備用。氫氧化鈉甲醇溶液（2%）：取2 g氫氧化鈉溶解在100 mL甲醇中，混勻。飽和氯化鈉溶液：稱取360 g氯化鈉溶解于1.0L水中，攪拌溶解，澄清備用。標(biāo)準(zhǔn)品十一

3、碳酸甘油三酯?；旌现舅峒柞?biāo)準(zhǔn)溶液（37種）。單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)：丁酸甲酯C4:0（C5H10O2）CAS NO. 623-42-7；己酸甲酯C6:0（C7H14O2）CAS NO.106-70-7；辛酸甲酯C8:0（C9H18O2）CAS NO.111-11-5；癸酸甲酯C10:0（C11H22O2）CAS NO.110-42-9；十一烷酸甲酯C11:0（C12H24O2）CAS NO.1731-86-8；月桂酸甲酯C12:0（C13H26O2）CAS NO.111-82-0；十三烷酸甲酯C13:0（C14H28O2）CAS NO.1731-88-0；肉豆蔻酸甲酯C14:0（C15H30O

4、2）CAS NO.124-10-7；肉豆蔻腦酸甲酯C14:1（C15H28O2）CAS NO.56219-06-8；十五烷酸甲酯C15:0（C16H32O2）CAS NO.7132-64-1；順-10-十五碳烯酸甲酯C15:1（C16H30O2）CAS NO.90176-52-6；棕櫚酸甲酯C16:0（C17H34O2）CAS NO.112-39-0；棕櫚油酸甲酯C16:1（C17H32O2）CAS NO.1120-25-8；十七烷酸甲酯C17:0（C18H36O2）CAS NO.1731-92-6；順-10-十七碳烯酸甲酯C17:1（C18H34O2）CAS NO.75190-82-8；硬脂

5、酸甲酯C18:0（C19H38O2）CAS NO.112-61-8；反油酸甲酯C18:1n9t（C19H36O2） CAS NO.1937-62-8；油酸甲酯C18:1（C19H36O2）CAS NO.112-62-9；反亞油酸甲酯C18:2n6t（C19H34O2）CAS NO.2566-97-4；亞油酸甲酯C18:2n6c（C19H34O2）CAS NO.112-63-0；亞麻酸甲酯C18:3n6（C19H32O2）CAS NO.16326-32-2；花生酸甲酯C20:0（C21H42O2）CAS NO.1120-28-1；順-11-二十碳烯酸甲酯C20:1（C20H38O2）CAS NO

6、.2390-09-2；亞麻酸甲酯C18:3n3（C19H32O2）CAS NO.301-00-8；山崳酸甲酯C22:0（C23H46O2）CAS NO.929-77-1；二十一烷酸甲酯C21:0（C22H44O2） CAS NO.6064-90-0；順-11，14-二十碳二烯酸甲酯C20:2（C21H38O2） CAS NO.2463-02-7；順-8，11，14-二十碳三烯酸甲酯C20:3n6（C21H36O2） CAS NO.21061-10-9；順芥子酸甲酯C22:1n9（C23H44O2） CAS NO.1120-34-9；順-11，14，17-二十碳三烯酸甲酯C20:3n3（C21H

7、36O2） CAS NO.55682-88-7；花生四烯酸甲酯C20:4n6（C21H34O2） CAS NO.2566-89-4；二十三碳酸甲酯C23:0（C24H48O2） CAS NO.2433-97-8；順-13，16-二十二碳二烯酸甲酯C22:2（C23H42O2） CAS NO.61012-47-3；木蠟酸甲酯C24:0（C25H50O2） CAS NO.2442-49-1；順-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸甲酯C20:5（C21H32O2） CAS NO.2734-47-6；神經(jīng)酸甲酯C24:1（C25H48O2） CAS NO.2733-88-2；順-4，7，10，13

8、，16，19-二十二碳六烯酸甲酯C22:6（C23H34O2）CAS NO. 2566-90-7。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液（5.00 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取2.5g（精確至0.1mg）十一碳酸甘油三酯至燒杯中，加入甲醇溶解，移入500 mL容量瓶后用甲醇定容，在冰箱中冷藏可保存一個(gè)月。單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：將3.3.3中單個(gè)脂肪酸甲酯分別從安瓿瓶中取出轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中，用正庚烷沖洗安瓿瓶，再用正庚烷定容，分別得到不同脂肪酸甲酯的單標(biāo)溶液，在冰箱中冷藏可保存一周。脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（37種）：將脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液從安瓿瓶中完全轉(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，用二氯甲烷稀釋定容，

9、在冰箱中冷藏可保存一周。參考分離情況參見(jiàn)附錄A，參考保留時(shí)間參見(jiàn)附錄B。儀器設(shè)備氣相色譜儀：具有氫火焰離子檢測(cè)器（FID）。色譜柱：毛細(xì)管色譜柱（100 m0.25 mm，0.2 m）。恒溫水?。嚎販胤秶?0 100 ，控溫1 。分析天平：感量0.1 mg。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。分析步驟試樣的制備在采樣和制備過(guò)程中，應(yīng)避免試樣污染。糧食、豆類去雜物后，磨碎，儲(chǔ)于塑料瓶中，保存?zhèn)溆谩Ｊ卟?、水果、魚(yú)類、肉類等水分含量高的鮮樣，用水清洗，晾干，用食品加工機(jī)或勻漿機(jī)勻漿，儲(chǔ)于塑料瓶中，及時(shí)稱取測(cè)定。飲料、酒、醋、醬油、油脂等液體試樣，可直接取樣測(cè)定。試樣前處理樣品的稱取稱取均勻樣品0.1 g 5 g（精確至0.

10、1 mg，約含脂肪100 mg200 mg）移入到250 mL平底燒瓶中，加入2 mL內(nèi)標(biāo)溶液。加入約100 mg焦性沒(méi)食子酸，加入幾粒沸石，再加入2 mL 95%乙醇和4 mL水，混勻。根據(jù)樣品的類別選取相應(yīng)的水解方法。注：根據(jù)實(shí)際工作需要選擇內(nèi)標(biāo)，對(duì)于組分不確定的樣品，第一次檢測(cè)時(shí)不要加內(nèi)標(biāo)物。觀察在內(nèi)標(biāo)物峰位置處是否有干擾峰出現(xiàn)，如果存在，加內(nèi)標(biāo)檢測(cè)時(shí)要對(duì)內(nèi)標(biāo)物峰進(jìn)行必要的校正或選擇其他物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)，常見(jiàn)使用的內(nèi)標(biāo)有C11:0，C13:0，C19:0，C23:0等，以C11:0內(nèi)標(biāo)為例進(jìn)行說(shuō)明。樣品的水解酸水解法食品：加入鹽酸溶液10 mL，混勻。將燒瓶放入70 80 水浴中水解40 m

11、in。每隔10 min振蕩一下燒瓶，使黏附在燒瓶壁上的顆粒物混入溶液中。水解完成后，取出燒瓶冷卻至室溫。最后加入10 mL 95%乙醇，混勻。堿水解法乳制品：加入氨水（3.1.2）5 mL，混勻。將燒瓶放入70 80 水浴中水解20 min。每隔5 min振蕩一下燒瓶，使黏附在燒瓶壁上的顆粒物混入溶液中。水解完成后，取出燒瓶冷卻至室溫，最后加10 mL 95%乙醇，混勻。酸堿水解法乳酪：加入25% 氨水5 mL，混勻。將燒瓶放入70 80 水浴中水解20 min。每隔10 min振蕩一下燒瓶，使黏附在燒瓶壁上的顆粒物混入溶液中。接著加入鹽酸10 mL，繼續(xù)水解20 min，每隔10 min振蕩

12、一下燒瓶，使黏附在燒瓶壁上的顆粒物混入溶液中。水解完成后，取出燒瓶冷卻至室溫。最后加入10 mL 95%乙醇，混勻。脂肪提取脂肪水解完成后，將燒瓶中的水解液（5.2.1.1.1， 5.2.1.1.2， 5.2.1.1.3）轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用50 mL乙醚沖洗燒瓶，用乙醚石油醚混合液沖洗燒瓶塞子，沖洗液并入分液漏斗中，加蓋，振搖5 min，靜置10 min，將醚層提取液收集到250 mL燒瓶中，按照以上步驟重復(fù)提取水解液三次，最后用乙醚石油醚混合液沖洗分液漏斗，并收集到250 mL燒瓶中后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，殘留物為脂肪提取物。脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化在盛有脂肪提取物的250 mL燒瓶中加

13、入2%氫氧化鈉溶液8 mL，連接回流冷凝器在80 水浴上回流，直至油滴消失；從回流冷凝器上端加入7 mL 15% 三氟化硼甲醇溶液，在80水浴中繼續(xù)回流2 min；用去離子水沖洗回流冷凝器。停止加熱，從水浴上取下燒瓶，迅速冷卻至室溫，準(zhǔn)確加入10 mL30 mL正庚烷，振搖2 min，再加入飽和氯化鈉水溶液，靜置分層，吸取上層正庚烷提取溶液大約5 mL，轉(zhuǎn)移到30 mL小型試管中，加入大約3 g 5 g無(wú)水硫酸鈉，振搖1 min，靜置5 min，吸取上層溶液到進(jìn)樣瓶中待測(cè)定。食用油試樣不經(jīng)脂肪提取，加入內(nèi)標(biāo)后，直接進(jìn)行皂化和脂肪酸甲酯化。測(cè)定色譜測(cè)定：取脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和各單個(gè)脂肪酸甲酯

14、標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入氣相色譜儀，對(duì)色譜峰進(jìn)行定性。參考脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)液氣相色譜圖，見(jiàn)附錄A。色譜參考條件色譜柱：毛細(xì)管色譜柱（聚二氰丙基硅氧烷強(qiáng)極性固定相）（100 m0.25 mm，0.2 m）。進(jìn)樣器溫度：270 。檢測(cè)器溫度：280 。程序升溫：初始溫度100，持續(xù)13min；升溫速率10 /min至180 ，保留6min；升溫速率1 /min 至200 ，保留20min；升溫速率4 /min 至230 ，保留10.5min，3 min檢測(cè)結(jié)束。載氣：氮?dú)?。分流比?00 : 1。進(jìn)樣體積：1.0 L。試樣測(cè)定試樣溶液的測(cè)定在上述色譜條件下將脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液及試樣測(cè)定液分別注入氣相色譜儀

15、，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。計(jì)算樣品中單個(gè)脂肪酸甲酯含量（Xi）以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)（%）表示，按公式（1）計(jì)算。（1）式中：Xi樣品中脂肪酸甲酯i含量，克每百克（g/100g）；Fi脂肪酸甲酯i的響應(yīng)因子；Ai樣品中脂肪酸甲酯i的峰面積；AC11樣品中加入的內(nèi)標(biāo)物十一碳酸甲酯峰面積；cC11十一碳酸甘油三酯濃度，毫克每毫升（mg/mL）；VC11樣品中加入十一碳酸甘油三酯體積，毫升（mL）；1.0067十一碳酸甘油三酯轉(zhuǎn)化成十一碳酸甲酯的轉(zhuǎn)換系數(shù)；m樣品的質(zhì)量，毫克（mg）。脂肪酸甲酯i的響應(yīng)因子Fi按式（2）計(jì)算。（2）式中：Fi脂肪酸甲酯i的響應(yīng)因子；cSi混標(biāo)中各脂肪酸甲酯i

16、的濃度，毫克每毫升（mg/mL）；A11十一碳酸甲酯峰面積；Asi脂肪酸甲酯i的峰面積；c11混標(biāo)中十一碳酸甲酯濃度，毫克每毫升（mg/mL）。樣品中總脂肪含量（包括所有順式和反式脂肪酸構(gòu)型）樣品中總脂肪含量（XTotal Fat）以g/100g表示，等于各種脂肪酸甘油三酯含量的總和，各種脂肪酸甘油三酯含量等于脂肪酸甲酯含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成甘油三酯系數(shù)的乘積，樣品中總脂肪含量按公式（3）計(jì)算。.（3）式中：X Total Fat樣品中總脂肪含量，g/100g；Xi樣品中脂肪酸甲酯i含量，g/100g；FFAMEi-TGi脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成甘油三酯的系數(shù)。各種脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成甘油三酯的系數(shù)參見(jiàn)

17、附錄C。脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成為脂肪酸甘油三酯的系數(shù)按式（4）計(jì)算。 QUOTE （4）式中：FFAMEi-TGi脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成為脂肪酸甘油三酯的系數(shù)；MTGi脂肪酸甘油三酯i的分子質(zhì)量；MFAMEi脂肪酸甲酯i的分子質(zhì)量。樣品中飽和脂肪（酸）含量樣品中飽和脂肪（酸）含量（X Saturated Fat）以g/100g表示，等于各種單飽和脂肪酸含量總和。各種單飽和脂肪酸含量等于單個(gè)飽和脂肪酸甲酯含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)乘積。樣品中飽和脂肪（酸）含量按公式（5）計(jì)算。 .（5） （6）式中：XSFAi各種單飽和脂肪酸含量，g/100g；XFAMEi單個(gè)飽和脂肪酸甲酯含量，g/100g；

18、FFAMEi-FAi脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)。脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)換為脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)FFAMEi-FAi參見(jiàn)附錄C。脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成為脂肪酸的系數(shù)按照公式（7）計(jì)算。 QUOTE QUOTE QUOTE .（7）式中：FFAMEi-FAi脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)；MFAi脂肪酸i的分子質(zhì)量；MFAMEi脂肪酸甲酯i的分子質(zhì)量。樣品中單不飽和脂肪（酸）含量樣品中單不飽和脂肪（酸）含量（XMono-Unsaturated Fat）以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)（%）表示，等于每個(gè)單不飽和脂肪酸含量總和，單不飽和脂肪酸含量等于樣品中每種單不飽和脂肪酸甲酯每百克含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)換為脂肪酸的系數(shù)乘積。樣品中

19、單不飽和脂肪（酸）含量按公式（8）和公式（9）計(jì)算。 .（8）.（9）XMUFAi樣品中每種單不飽和脂肪酸含量，g/100g；XFAMEi單不飽和脂肪酸甲酯含量，g/100g；FFAMEi-FAi脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)。脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)FFAMEi-FAi參見(jiàn)附錄C。樣品中多不飽和脂肪（酸）含量樣品中多不飽和脂肪（酸）含量（XPoly-Unsaturated Fat）以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)（%）表示，多不飽和脂肪（酸）含量等于每個(gè)多不飽和脂肪酸含量總和，單個(gè)多不飽和脂肪酸含量等于多不飽和脂肪酸甲酯含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)換為脂肪酸的系數(shù)。樣品中多不飽和脂肪（酸）含量按公式（10）和公式（1

20、1）計(jì)算。 （10）.（11）式中：XPUFAi樣品中每種多不飽和脂肪酸含量，g/100g；XFAME多不飽和脂肪酸甲酯含量，g/100g；FFAMEi-FAi脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)。脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)FFAMEi-FAi參見(jiàn)附錄C。第二法 外標(biāo)法原理水解-提取法：樣品經(jīng)水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后，在堿性條件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，經(jīng)毛細(xì)管氣相色譜分析，外標(biāo)法定量測(cè)定脂肪酸甲酯含量。依據(jù)各種脂肪酸甲酯含量和轉(zhuǎn)換系數(shù)計(jì)算出總脂肪、飽和脂肪（酸）、單不飽和脂肪（酸）、多不飽和脂肪（酸）含量。乙酰氯甲醇法：乙酰氯與甲醇反應(yīng)得到的鹽酸-甲醇使試樣中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化，

21、用甲苯提取后，經(jīng)氣相色譜儀分離檢測(cè)，外標(biāo)法定量。依據(jù)各種脂肪酸甲酯含量和轉(zhuǎn)換系數(shù)計(jì)算出總脂肪、飽和脂肪（酸）、單不飽和脂肪（酸）、多不飽和脂肪（酸）含量。試劑和材料注：除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑鹽酸（HCl）。氨水（NH3H2O）。焦性沒(méi)食子酸（C6H6O3）。乙醚（C4H10O）。石油醚：沸程3060。乙醇（C2H6O） （95%）。甲醇（CH3OH）：色譜純。氫氧化鈉（NaOH）。正庚烷CH3（CH2）5CH3：色譜純。三氟化硼甲醇溶液，濃度為15%。無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）。氯化鈉（NaCl）。無(wú)水碳酸鈉（Na2CO3）。甲苯（CH

22、）：色譜純。乙酰氯（C2H3ClO）。試劑配制鹽酸溶液（8.3 mol/L）：同3.2.1。乙醚石油醚混合液（體積比1:1）：同3.2.2。氫氧化鈉甲醇溶液（2%）：同3.2.3。飽和氯化鈉溶液：同3.2.4。乙酰氯甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)為10 %）：量取40 mL甲醇于100 mL干燥的燒杯中，準(zhǔn)確吸取5.0 mL乙酰氯逐滴緩慢加入，不斷攪拌，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移并定容至50 mL干燥的容量瓶中。臨用前配制。注：乙酰氯為刺激性試劑，配制乙酰氯甲醇溶液時(shí)應(yīng)不斷攪拌防止噴濺，注意防護(hù)。碳酸鈉溶液：稱取6 g無(wú)水碳酸鈉于100 mL燒杯中，加水溶解，轉(zhuǎn)移并用水定容至100 mL容量瓶中。標(biāo)準(zhǔn)品混合脂肪酸甲

23、酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（37種）。單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)：同3.3.3。脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%，脂肪酸種類參見(jiàn)附錄A。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：根據(jù)需要測(cè)定的脂肪酸種類，將3.3.3中單個(gè)脂肪酸甲酯分別從安瓿瓶中取出轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中，用正庚烷沖洗安瓿瓶，再用正庚烷定容，得到不同脂肪酸甲酯的單標(biāo)溶液，在冰箱中冷藏可保存一周。參考濃度參見(jiàn)附錄A。脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：按試樣中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的種類適當(dāng)配制其濃度，正庚烷定容并貯存于10 以下的冰箱中，有效期三個(gè)月。脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：按試樣中所要分析脂肪酸的種類配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲苯定容并分別保存于10以下的

24、冰箱中，有效期三個(gè)月。儀器設(shè)備氣相色譜儀：具有氫火焰離子檢測(cè)器（FID）。色譜柱：毛細(xì)管色譜柱（100 m0.25 mm，0.2 m）。恒溫水?。嚎販胤秶?0 100 ，控溫1。分析天平：感量0.1 mg。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)/分鐘。冷凍干燥儀。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。螺口玻璃管（帶有聚四氟乙烯做內(nèi)墊的螺口蓋）：15 mL。離心管：50 mL。分析步驟試樣的制備同5.1試樣前處理水解-提取法樣品的稱取 稱取均勻樣品0.1 g 5 g（精確至0.1mg，約含脂肪100 mg200 mg）移入到250 mL平底燒瓶中，加入約100 mg 焦性沒(méi)食子酸，加入幾粒沸石，再加入2 mL 95%乙醇，混勻。根據(jù)樣品

25、的類別選取不同的水解方法。樣品的水解酸水解法食品（除乳制品和乳酪）：操作步驟同5.2.2.1。堿水解法乳制品：操作步驟同5.2.2.2。酸堿水解法乳酪：操作步驟同5.2.2.3。脂肪提取操作步驟同5.2.3。脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化操作步驟同5.2.4。食用油試樣不經(jīng)脂肪提取，直接進(jìn)行皂化和脂肪酸甲酯化（同5.2.4）。標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的制備將脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（7.4.2）注入色譜儀，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。乙酰氯-甲醇法注：此方法僅限于乳及乳制品。試樣處理試樣含水量大于5 %時(shí)，冷凍干燥至含水量小于5 %。準(zhǔn)確稱取試樣0.5 g（精確到0.1 mg）于15 mL 干燥螺

26、口玻璃管中，加入5.0 mL 甲苯。稱取無(wú)水奶油試樣0.2 g（精確到0.1 mg）于15 mL干燥螺口玻璃管中，加入5.0 mL甲苯。試樣測(cè)定液的制備在試樣（9.2.2.1.2或9.2.2.1.3）中加入10 %乙酰氯甲醇溶液6.0 mL，充氮?dú)夂螅o螺旋蓋，振蕩混合后于80 水浴中放置2 h，期間每隔20 min取出振搖一次，水浴后取出冷卻至室溫。將反應(yīng)后的樣液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，分別用3.0 mL碳酸鈉溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸鈉溶液于50 mL離心管中，混勻，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5 min。取上清液作為試液，氣相色譜儀測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的制備準(zhǔn)確吸取脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液0.

27、5 mL于15 mL螺口玻璃管中，加入4.5 mL甲苯，其他操作步驟同7.5.2.2。計(jì)算將脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及試液注入色譜儀，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。試樣中各脂肪酸的含量按公式（12）計(jì)算： QUOTE （12）式中：Xi試樣中各脂肪酸的含量，克每百克（g/100g）；Asi試樣測(cè)定液中各脂肪酸甲酯的峰面積；Cstdi在標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的制備中吸取的脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液中所含有的標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量， 單位為毫克（mg）；Fi各脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)，參見(jiàn)附錄C；Astdi標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液中各脂肪酸的峰面積；m試樣的稱樣質(zhì)量，毫克（mg）。第三法 面積歸一化法原理樣品經(jīng)

28、水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后，在堿性條件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，經(jīng)毛細(xì)管氣相色譜分析，面積歸一化法定量測(cè)定脂肪酸甲酯百分含量。試劑和材料注：除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑同3.1。試劑配制同3.2。標(biāo)準(zhǔn)品混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（37種）。單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)：同3.3.3。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：同3.4.3。儀器設(shè)備氣相色譜儀：具有氫火焰離子檢測(cè)器（FID）。色譜柱：毛細(xì)管色譜柱（100 m0.25 mm，0.2 m）。恒溫水?。嚎販胤秶?0 100 ，控溫1 。分析天平：感量0.1 mg。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000 rpm。冷

29、凍干燥儀。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。螺口玻璃管（帶有聚四氟乙烯做內(nèi)墊的螺口蓋）：15 mL。離心管：50 mL。分析步驟試樣的制備在采樣和制備過(guò)程中，應(yīng)避免試樣污染。糧食、豆類去雜物后，磨碎，儲(chǔ)于塑料瓶中，保存?zhèn)溆?。蔬菜、水果、魚(yú)類、肉類等水分含量高的鮮樣，用水清洗，晾干，用食品加工機(jī)或勻漿機(jī)勻漿，儲(chǔ)于塑料瓶中，及時(shí)稱取測(cè)定。飲料、酒、醋、醬油等液體試樣，可直接取樣測(cè)定。水解-提取法樣品的水解酸水解法食品（除乳制品和乳酪）：同5.2.2.1。堿水解法乳制品：同5.2.2.2。酸堿水解法乳酪：同5.2.2.3。脂肪提取操作步驟同5.2.3。脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化操作步驟同5.2.4。食用油試樣不經(jīng)脂肪提取

30、，直接進(jìn)行皂化和脂肪酸甲酯化。計(jì)算試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）Y 按公式（13）計(jì)算，通過(guò)測(cè)定相應(yīng)峰面積對(duì)所有成分峰面積總和的百分?jǐn)?shù)來(lái)計(jì)算組分i的含量： QUOTE QUOTE .（13）精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。其它附錄A 37種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液典型圖譜A.1 圖A.1 37種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液典型圖譜圖A.1 37種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液典型圖譜注：不同的色譜柱可能導(dǎo)致各種脂肪酸甲酯的出峰時(shí)間不同附錄B脂肪酸甲酯的保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間參考B.1 表B.1為脂肪酸甲酯的保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間參考表B.1脂肪酸甲酯的保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間參

31、考序號(hào)名稱保留時(shí)間相對(duì)保留時(shí)間1丁酸甲酯C4:012.560.472己酸甲酯C6:015.540.593辛酸甲酯C8:019.830.754葵酸甲酯C10:024.320.925十一碳酸甲酯C11:026.461.006十二碳酸甲酯C12:028.491.087十三碳酸甲酯C13:030.461.158十四碳酸甲酯C14:032.451.239順-9-十四碳一烯酸甲酯C14:134.311.3010十五碳酸甲酯C15:034.561.3111順-10-十五碳一烯酸甲酯C15:136.621.3812十六碳酸甲酯C16:036.871.3913順-9-十六碳一烯酸甲酯C16:138.811.47

32、14十七碳酸甲酯C17:039.421.4915順-10-十七碳一烯酸甲酯C17:141.591.5716十八碳酸甲酯C18:042.271.6017反-9-十八碳一烯酸甲酯C18:1n9t43.731.6518順-9-十八碳一烯酸甲酯C18:1n9c44.381.6819反，反-9，12-十八碳二烯酸甲酯C18:2n6t46.161.7420順，順-9，12-十八碳二烯酸甲酯C18:2n6c47.731.8021二十碳酸甲酯C20:048.901.8522順，順，順-6，9，12-十八碳三烯酸甲酯C18:3n650.501.9123順-11-二十碳一烯酸甲酯C20:151.511.9524順

33、，順，順-9，12，15-十八碳三烯酸甲酯C18:3n352.151.9725二十一碳酸甲酯C21:052.952.0026順，順-11，14-二十碳二烯酸甲酯C20:255.992.1227二十二碳酸甲酯C22:057.752.1828順，順，順-8，11，14-二十碳三烯酸甲酯C20:3n659.782.2629順-13-二十二碳一烯酸甲酯C22:1n961.352.3230順11，14，17-二十碳三烯酸甲酯C20:3n362.122.3531順-5，8，11，14-二十碳四烯酸甲酯C20:4n663.042.3832二十三碳酸甲酯C23:063.532.4033順13，16-二十二碳二

34、烯酸甲酯C22:267.682.5634二十四碳酸甲酯C24:069.992.6435順-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸甲酯C20:5n370.362.6636順-15-二十四碳一烯酸甲酯C24:172.982.7637順-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸甲酯C22:6n381.723.09附錄C 脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸和脂肪酸甘油三酯的轉(zhuǎn)化系數(shù)C.1表C.1為脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸和脂肪酸甘油三酯的轉(zhuǎn)化系數(shù)表C.1 脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸和脂肪酸甘油三酯的轉(zhuǎn)化系數(shù)序號(hào)脂肪酸甲酯簡(jiǎn)稱FFAME-FAFFAME-TG1丁酸甲酯C4:00.86270.98682己酸甲酯C6:00.89230.98973辛酸甲酯C8:00.91140.99154葵酸甲酯C10:00.92470.99285十一碳酸甲酯C1