黃芪對早期糖尿病大鼠心肌組織一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性

1、黃芪對早期糖尿病大鼠心肌組織一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性【摘要】目的討論黃芪對糖尿病大鼠心肌組織一氧化氮N含量和一氧化氮合成酶NS活性的影響。方法正常大鼠、糖尿病大鼠及高、低劑量黃芪(10，8gkg-1d-1)治療8周的糖尿病大鼠各10只，分別測定各組大鼠血清乳酸脫氫酶LDH，肌酸激酶K含量及心肌組織一氧化氮N含量及一氧化氮合成酶NS【關(guān)鍵詞】黃芪；糖尿?。恍募〔。灰谎趸?；一氧化氮合酶Keyrds：Astragalus;Diabetes;ardiypathy;Nitrixide;Nitrixidesynthase糖尿病(D)并發(fā)癥是導(dǎo)致糖尿病死亡的主要原因。近年來研究說明，D及其并發(fā)癥發(fā)

2、生開展過程中出現(xiàn)的多種臟器損害，常與一氧化氮N代謝異常有關(guān)1。糖尿病性心肌病diabetiardiypathy，D的發(fā)活力制目前仍不清楚。可能與心肌細胞糖代謝障礙、脂質(zhì)過氧化反響增強、一氧化氮N代謝異常、胞膜完好性受損和a2+轉(zhuǎn)運機制異常等有關(guān)2。馬善峰等3發(fā)現(xiàn)D大鼠心肌N含量及NS活性降低；陳國榮等4發(fā)現(xiàn)D大鼠心肌N含量明顯增高、心肌NS(iNS)表達明顯較正常組增強。本研究討論糖尿病早期大鼠心肌N含量和NS活性的變化及黃芪對上述指標的影響。1器材1.1動物istar大鼠，雄性，體重180200g，由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。1.2試劑與藥品鏈脲佐菌素StreptztinSTZ

3、美國Siga公司消費；LDH，K試劑盒，上海科華公司消費；N測試盒、NS試劑盒、蛋白試劑盒(考馬斯亮藍法)均購自南京建成生物工程研究所。黃芪注射液，神威藥業(yè)消費。1.3儀器日立7080型全自動生化分析儀；TU-1901型紫外分光光度計，北京普析通用儀器公司。2方法大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，10只作為正常對照組，其余用于造模。2.1糖尿病動物模型的制作造模動物禁食12h后，以鏈脲佐菌素用前以0.1l/L檸檬酸鹽緩沖液，冰浴新穎配制，pH4.555g/kg一次性腹腔注射。穩(wěn)定3d后尾靜脈采血測定血糖，以血糖大于16.6l/L者為糖尿病模型動物。2.2實驗分組及處理正常(N)組n=10動物按“2.1項方

4、法操作，但以等容積緩沖液代替STZ進展注射。造模成功大鼠隨機分為3組每組10只：糖尿病對照(D)組、黃芪低劑量組(AS1組)、黃芪高劑量組(AS2組)。每組各分兩籠飼養(yǎng)，固定飼料，自由飲水。AS1，AS2組，于每天17：00分別按8，10gkg-1d-1灌胃給藥；每周稱重，調(diào)整給藥量。持續(xù)給藥8周。2.3標本搜集與檢測于第8周末禁食12h后，稱重，10%水合氯醛3l/kg腹腔注射，麻醉動物，翻開胸腔，左心室采血約5l，用于血清LDH及K活性的測定；迅速取出心臟，在冰生理鹽水中取心肌組織，制備10%勻漿，取上清液作心肌N含量、NS活性和心肌組織勻漿蛋白含量測定。測定時按說明書要求操作。2.4統(tǒng)計

5、學(xué)處理數(shù)據(jù)以s表示，采用SPSS10.0軟件包對數(shù)據(jù)進展方差分析，組間比較，方差齊者用LSD檢驗，方差不齊者用DunnettT3檢驗。3結(jié)果3.1各組大鼠血清乳酸脫氫酶LDH、肌酸激酶K的變化D組大鼠血清LDH，K明顯高于N組(P0.01，經(jīng)高、低劑量AS治療后明顯降低(P0.01，但仍明顯高于N組(P0.010.05。組間比較在LDH程度上AS1、AS2組間有顯著差異(P0.05)。AS2組優(yōu)于AS1組，見表1。3.2各組大鼠心肌組織N含量及NS活性的變化實驗結(jié)果說明，D組大鼠心肌組織N含量及NS活性比N組明顯增高(P0.01)，經(jīng)高、低劑量黃芪治療后明顯低于糖尿病組(P0.01，但仍高于N

6、組(P0.01或P0.05)。組間比較，在N含量上AS1，AS2組間有差異(P0.05，AS2組的作用優(yōu)于AS1組。見表1。表1各組大鼠血清乳酸脫氫酶LDH、肌酸激酶K及心肌組織N含量、NS活性的變化略與N組比較，*P0.05，*P0.01；與D組比較，#P0.01；與AS1組比較，P0.054討論本實驗中，造模大鼠腹腔注射STZ(55g/kg)，3d后測血糖，血糖大于16.6l/L者為糖尿病模型動物。造模成功動物均出現(xiàn)了明顯的多飲、多食、多尿，病程中抽檢D組大鼠，血糖始終在建模時的高程度波動，未見轉(zhuǎn)復(fù)，故本實驗中，糖尿病模型的建立是成功的。第8周末實驗終止時，發(fā)現(xiàn)D組大鼠血清的LDH，K異常

7、，提示已有心肌損傷。一氧化氮(N)是機體內(nèi)的-精氨酸在復(fù)原型輔酶(NADPH)、四氫葉酸等輔助因子的存在下，經(jīng)N合成酶(NS)的作用，與2發(fā)生反響而產(chǎn)生的。近年來，隨著對糖尿病研究的深化，發(fā)現(xiàn)N參與糖尿病的整個病程并起著重要作用。但關(guān)于D大鼠N含量及NS活性改變的報道卻不盡一樣。本研究結(jié)果顯示，D組大鼠心肌N含量及NS活性顯著高于正常對照組，可能與STZ誘導(dǎo)的糖尿病動物模型中，被損傷的胰腺組織作為自身免疫的誘因活化殺傷性巨噬細胞，使其釋放TNF-，IL-1等細胞因子，促使心肌組織NS活性升高。而過量生成的N作為重要的免疫介質(zhì)發(fā)揮細胞毒作用，可損傷線粒體、含鐵硫蛋白酶，亦可引起DNA損傷，導(dǎo)致心肌損傷。經(jīng)黃芪治療8周后，可見N含量及NS活性明顯下降，提示黃芪可減輕糖尿病心肌所受N的損傷。黃芪是否抑制心肌內(nèi)iNS基因表達、對糖尿病早期和后期的作用是否一致等尚需進一步研究?！緟⒖嘉墨I】1金智生,汝亞琴,楚惠媛,等.紅芪多糖對不同病程糖尿病大鼠血清N、NS及過氧化脂質(zhì)的影響J.上海中醫(yī)藥雜志,2022,386:44.2鄧常青,熊曼琪.糖尿病性心肌病的發(fā)活力制及中醫(yī)藥防治研究進展J.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2001,182：181.3馬善峰,賈強,關(guān)宿