氯胺酮對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)功能及神經(jīng)病理痛的作用

1、氯胺酮對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)功能及神經(jīng)病理痛的作用【摘要】目的討論氯胺酮對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)功能及神經(jīng)病理痛的疼痛作用。方法雌性istar大鼠24只，體重180220g，隨機(jī)分為3組(n=8)：正常組(N組)、糖尿病神經(jīng)病理性痛組(D組)、氯胺酮組(K組)。D組、K組腹腔注射鏈脲菌素65g/kg制作糖尿病神經(jīng)病理痛模型，大鼠自由進(jìn)食飲水飼養(yǎng)4周。自第5周開(kāi)場(chǎng)，K組大鼠腹腔注射10g/kg氯胺酮，1次/d，持續(xù)4周。隨后測(cè)定各組大鼠機(jī)械痛閾值(T)、神經(jīng)傳導(dǎo)速度NV。并用砂羅鉻花青法行神經(jīng)髓鞘染色和緩沖亞甲藍(lán)法進(jìn)展尼氏體染色。應(yīng)用ELISA法測(cè)定脊髓內(nèi)超氧化物歧化酶SD、丙二醛DA含量。結(jié)果D組脊髓和DR

2、G神經(jīng)元的尼氏體體積減小，并且有尼氏體的脫失和溶解。坐骨神經(jīng)的髓鞘存在不同程度的水腫，空泡樣變性，構(gòu)造紊亂和局灶性脫失。K組髓鞘及尼氏體病變明顯減輕。與N組比擬，D、K組大鼠T、NV、SD降低,DA升高P0.05；與D組比擬，K組大鼠T、NV、SD升高，DA降低P0.05。結(jié)論氯胺酮通過(guò)抗氧化對(duì)糖尿病神經(jīng)病理痛大鼠有神經(jīng)保護(hù)及疼痛治療作用?！娟P(guān)鍵詞】糖尿病神經(jīng)病變；疼痛；氯胺酮Abstrat:bjetiveTinvestigatetherlefketainenthenervefuntinandneurpathipainindiabetirats.ethds24fealeistarratsEig

3、hing180-220gererandizedint3grups(n=8):nralntrlgrup(grupN),diabetineurpathipaingrup(grupD)andketainegrup(grupK).Diabetineurpathipaindelasinduedbyintraperitnealstreptzin65g/kgingrupsDandK,inhihratserehusedithfdandateradlibitufr4eeks.Frthe5theektheratsingrupKreEIvedketaine10g/kgintraperitneallyneadayfr

4、anther4eeks.Attheendfthe8theek,ehanialithdraalthreshld(T)andnervendutinvelity(NV)ereeasured.yelinsheathfsiatinerveandNisslbdiesinneurnseredenstratedithstainingfslehreyaninandbufferedethyleneblue,respetively.Thelevelsfsuperxidedisutase(SD)andalnaldehyde(DA)inthespinalrdereassayedbyELISA.ResultsTheNis

5、slbdiesinthespinalrdandtheDRGneurnserebservedthavepyknsis,apaniedbyllapseandkarylysisfNisslbdy.Theyelinsheathfthesiatinerveasharaterizedbyedeafdifferentdegrees,vaule-likedenaturatin,struturalderangeentandlaldeyelinatin.TheneurpathiesinyelinsheathandNisslbdyerearkedlyattenuatedingrupK.paredithgrupN,t

6、helevelsfT,NVandSDerelerandDAlevelhigheringrupsDandK(P0.05),hiletheparisnbeteenthelattertgrupsrevealedthatgrupsKhadhigherlevelsfT,NVandSDandthelerDAlevel.nlusinKetaineprtetsnerveandrelievesthepainfulsyptsfneurpathipainindiabetiratsbyitsantixidativeeffet.Keyrds:diabetineurpathies;pain;ketaine糖尿病性神經(jīng)病變

7、是臨床上糖尿病最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，目前臨床上尚無(wú)有效的治療手段。氯胺酮(ketaine,K)是臨床上常用的靜脈麻醉藥，研究說(shuō)明氯胺酮有神經(jīng)保護(hù)和疼痛治療作用1-4，但對(duì)糖尿病神經(jīng)病理痛是否有作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬討論氯胺酮對(duì)糖尿病神經(jīng)病理痛的鎮(zhèn)痛以及神經(jīng)保護(hù)作用。1材料和方法1.1動(dòng)物模型雌性istar大鼠24只，3月齡，由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重180220g，隨機(jī)分為3組(n=8)：正常組(N組)、糖尿病神經(jīng)病理性痛組(D組)和氯胺酮組(K組)。D組、K組禁食、禁飲12h后，腹腔單次注射鏈脲菌素(批號(hào)：380-010-100，Alexis公司,美國(guó))65g/kg制作糖尿病神經(jīng)病

8、理痛模型，大鼠自由進(jìn)食飲水飼養(yǎng)4周。自第5周開(kāi)場(chǎng)，K組大鼠腹腔注射10g/kg氯胺酮，1次/d，持續(xù)4周。組、D組腹腔注射等體積生理鹽水。1.2指標(biāo)測(cè)定采用標(biāo)準(zhǔn)化vnFrey纖維絲(Stelting公司，美國(guó))參照文獻(xiàn)3的up-dn法測(cè)定各組大鼠后足的機(jī)械縮足反響閾值(ehanisithdrathreshld，T)。采用antata型肌電圖儀(Dante公司，丹麥，測(cè)定神經(jīng)傳導(dǎo)速度nervendutivevelity，NV。大鼠腹腔注射3%的水合氯醛10l/kg麻醉后，顯露左側(cè)坐骨神經(jīng)。刺激電極放置在坐骨神經(jīng)干中部，記錄電極放置在腓腸肌中部。刺激條件：低頻濾波20Hz，高頻濾波10kHz，刺激

9、間期0.2s。記錄各復(fù)合動(dòng)作電位埋伏期，計(jì)算傳導(dǎo)時(shí)間，并測(cè)量刺激電極與記錄電極之間沿神經(jīng)走向的間隔 ，計(jì)算運(yùn)動(dòng)神傳導(dǎo)速度：NV(/s)=間隔 /傳導(dǎo)時(shí)間。將大鼠置于冰板上取右側(cè)坐骨神經(jīng)，L4、5的背根神經(jīng)節(jié)drsalrtganglin，DRG和脊髓，迅速置于4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚3。用砂羅鉻花青法行神經(jīng)髓鞘染色和緩沖亞甲藍(lán)法進(jìn)展尼氏體(Nisslbdy)染色。然后在光鏡下觀察髓鞘病變程度及尼氏體脫失情況。另取L1、2脊髓,稱重后在冰浴下將組織勻漿，高速離心后取上清液,按ELISA試劑盒說(shuō)明,測(cè)定超氧化物歧化酶SD和丙二醛DA的相對(duì)含量。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件

10、進(jìn)展處理,計(jì)量資料以s表示，組間比擬采用單因素方差分析，P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果與正常組相比，糖尿病神經(jīng)痛大鼠脊髓和DRG神經(jīng)元的尼氏體體積減小，并且有脫失和溶解。砂羅鉻花青染色見(jiàn)糖尿病神經(jīng)痛大鼠的坐骨神經(jīng)的髓鞘存在不同程度的水腫，空泡樣變性，構(gòu)造紊亂和局灶性脫失。氯胺酮組髓鞘病變及尼氏體脫失情況明顯減輕。與N組比擬，D組與K組大鼠NV、T和SD下降，DA升高P0.05；與D組比擬，K組大鼠NV、T和SD升高，DA下降P0.05。見(jiàn)表1。表1各組NV、T、SD和DS的比擬3討論臨床上糖尿病神經(jīng)病理性痛的病癥主要表現(xiàn)為自發(fā)的持續(xù)性疼痛和感覺(jué)異常，實(shí)驗(yàn)室檢查可發(fā)現(xiàn)糖尿病神經(jīng)病理性痛患者

11、均有不同程度的神經(jīng)功能障礙。在實(shí)驗(yàn)研究中，將糖尿病動(dòng)物痛閾降低作為糖尿病神經(jīng)病理性痛模型制備成功的標(biāo)準(zhǔn)5-6。本研究中糖尿病大鼠機(jī)械痛閾明顯下降，即存在糖尿病神經(jīng)病理性痛；NV是評(píng)價(jià)神經(jīng)功能的主要方法7-9，本實(shí)驗(yàn)中觀察到糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠NV明顯下降，說(shuō)明存在神經(jīng)功能障礙。因此本研究成功建立了糖尿病神經(jīng)病理性痛模型，并能較好地模擬臨床糖尿病神經(jīng)病理性痛的病理改變。尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所，其數(shù)量的多少、體積的大小及分布反映神經(jīng)元合成蛋白的才能及是否受損。本實(shí)驗(yàn)中，糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠神經(jīng)元的尼氏體數(shù)量減少、體積縮小，并發(fā)生邊積、溶解和脫失，提示神經(jīng)元合成蛋白才能低下和一定程度的

12、損傷。神經(jīng)元的損傷和蛋白合成才能的減弱可能導(dǎo)致某些神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成減少，這也許是神經(jīng)構(gòu)造和功能的損傷的一個(gè)重要因素。髓鞘構(gòu)造的完好性是保證有髓神經(jīng)纖維構(gòu)造和功能完好性的重要生理根底，因此髓鞘的構(gòu)造改變就成了神經(jīng)纖維病理改變的重要標(biāo)志。在本實(shí)驗(yàn)中觀察到糖尿病大鼠的坐骨神經(jīng)髓鞘構(gòu)造紊亂，出現(xiàn)不同程度的水腫、空泡樣變性和局灶性脫失。說(shuō)明糖尿病大鼠存在明顯的神經(jīng)病理性改變，這可能是糖尿病神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生的病理基矗轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.DA是組織中脂質(zhì)過(guò)氧化反響的分解產(chǎn)物，與組織缺血性損傷有關(guān)；其含量常常反映機(jī)體細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化的嚴(yán)重程度；損傷越嚴(yán)重，其含量越高；是反響機(jī)體內(nèi)氧化狀態(tài)的指標(biāo)。SD是體內(nèi)氧

13、自由基去除劑之一，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡有著至關(guān)重要的作用，可以通過(guò)催化消除氧自由基起到阻礙活性氧的產(chǎn)生，從而保護(hù)細(xì)胞的正常功能的作用。在本實(shí)驗(yàn)中觀察到糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠脊髓內(nèi)DA顯著升高，說(shuō)明在糖尿病神經(jīng)病理性痛的發(fā)生過(guò)程中,脊髓內(nèi)有脂質(zhì)過(guò)氧化反響,并產(chǎn)生了大量的氧自由基；而SD程度明顯降低，說(shuō)明脊髓的氧自由基去除才能明顯下降。而過(guò)度的氧化應(yīng)激反響是糖尿病各種并發(fā)癥的重要發(fā)病機(jī)制，因此糖尿病大鼠脊髓內(nèi)氧化及抗氧化的失衡可能是糖尿病神經(jīng)病理痛的發(fā)病機(jī)制。氯胺酮作為苯環(huán)已哌啶的衍生物，在臨床廣泛用于小兒麻醉、靜脈麻醉及復(fù)合麻醉。它是N-曱基-D-天冬氨酸(NDA)受體非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，可以拮

14、抗周?chē)窠?jīng)受損引起興奮性氨基酸的毒性和減少NDA受體介導(dǎo)的a2+內(nèi)流，具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)中糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠經(jīng)過(guò)1個(gè)月的氯胺酮處理后，與糖尿病大鼠相比，尼氏體溶解、脫失和邊集現(xiàn)象明顯減輕，數(shù)量明顯增多，同時(shí)髓鞘的病變程度也明顯減輕，NV也明顯增加。說(shuō)明氯胺酮可以改善神經(jīng)元的蛋白合成功能，修復(fù)受損的髓鞘，改善神經(jīng)傳導(dǎo)功能，對(duì)糖尿病神經(jīng)病理痛大鼠有很好的神經(jīng)保作用。同時(shí)，氯胺酮處理后可以觀察到糖尿病神經(jīng)病理痛大鼠的械痛閾明顯升高，說(shuō)明氯胺酮對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性痛有確切的疼痛治療作用。另外，在氯胺酮處理后觀察到糖尿病神經(jīng)病理痛大鼠脊髓內(nèi)SD含量明顯升高，而DA含量明顯下降，說(shuō)明氯胺酮減

15、輕了氧化激反響，同時(shí)也增強(qiáng)了機(jī)體抗氧化作用，穩(wěn)定了機(jī)體的氧化抗氧化的平衡。這可能是氯胺酮對(duì)糖尿病神經(jīng)病理痛的神經(jīng)保護(hù)及疼痛治療作用的機(jī)制。但從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，氯胺酮并沒(méi)有完全逆轉(zhuǎn)糖尿病神經(jīng)病理痛的各項(xiàng)病理生理改變，說(shuō)明氧化及抗氧化作用的失衡是糖尿病神經(jīng)病理痛發(fā)病機(jī)制之一，其確切的發(fā)病機(jī)理有待深化研究，而氯胺酮用于糖尿病神經(jīng)病理痛的治療也只是一個(gè)選擇，完全治愈糖尿病神經(jīng)病理性痛還需有效的綜合措施。綜上所述，氯胺酮可以增強(qiáng)機(jī)體對(duì)氧自由基的去除才能，可能通過(guò)抗氧化起到一定的神經(jīng)保護(hù)和疼痛治療作用。【參考文獻(xiàn)】1ShibutaS,VarathanS,ashiT.Ketaineandthipentalsdi

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