基因治療與免疫治療-課件

1、基因治療與免疫治療基因治療與免疫治療分子外科分子外科1、靶細胞和目的基因靶細胞:人體骨髓干細胞、淋巴細胞、血管內(nèi)皮細胞和成纖維細胞等;目的基因:是能彌補、替代缺損基因的外源性正?；?將目的基因引入靶細胞內(nèi),進行基因重組,取代突變基因。1、靶細胞和目的基因靶細胞:人體骨髓干細胞、淋巴細胞、血管內(nèi)2、基因轉移的載體 腺病毒載體腺病毒是一種雙鏈DNA無包膜病毒,基因組 DNA約36Kb,可編碼14種蛋白質(zhì)。對人類安全;轉染效率高;DNA不整合到宿主細胞染色體中;容易制備、純化和濃縮;容量較大。 2、基因轉移的載體 腺病毒載體腺病毒是一種雙鏈DNA無包膜病3、 基因轉移的方式間接體內(nèi)(回體法)(ex

2、 vivo) 就是將靶細胞由患者體內(nèi)取出,于體外完成基因轉移后再回輸患者體內(nèi),此種方法的優(yōu)點為靶細胞明確、轉染效率高;直截了當體內(nèi)法(in vivo) 將目的基因插入載體,經(jīng)修飾后直截了當注入腫瘤部位或通過血液循環(huán)注入體內(nèi),在體內(nèi)完成向靶細胞的基因轉移,具有一定盲目性,轉染效率低,但較前者簡便、費用低。3、 基因轉移的方式間接體內(nèi)(回體法)(ex vivo) 就ADA基因突變(常染色體隱性遺傳)引起免疫缺陷AMPIMP肌苷腺苷ADA腺苷 脫氧腺苷dAMPdADPdATP抑制核苷酸還原酶T、B 細胞增殖障礙腺苷脫氨酶(adenosine deaminase, ADA)重度聯(lián)合免疫缺陷癥(Seve

3、re Combined ImmunoDeficiency ) The first case for gene therapy in the world is SCIDADA基因突變AMPIMP肌苷腺苷ADA腺苷 脫氧腺苷dAM基因治療與免疫治療-課件編碼對腫瘤細胞無害的酶類(+相應的原藥)1、自殺基因(suicide gene)TNF:能下調(diào)多種耐藥性基因(mdr)的表達,從而使腫瘤細胞發(fā)生化學致敏作用(chemosensitization)。單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因細菌胞嘧啶脫氨酶基因(CD) (二)癌癥的基因治療編碼對腫瘤細胞無害的酶類(+相應的原藥)1、自殺基因(suiP

4、rodrug (nontoxic) expressiongenesuicide gene therapyProdrug (nontoxic) expressiong2、 免疫基因治療腫瘤免疫機制2、 免疫基因治療腫瘤免疫機制將某些細胞因子的基因轉染到機體免疫細胞(如TIL、LAK細胞及細胞毒淋巴細胞)中。將一些與免疫識別有關的基因(如HLA、B7等)轉染到體外培養(yǎng)的腫瘤細胞,經(jīng)照射后再植入腫瘤患者體內(nèi);或者將表達HLA、B7的病毒載體或質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體復合物直截了當注射到瘤體內(nèi)。 制備腫瘤DNA瘤苗,癌胚抗原(CEA)制備的腫瘤DNA瘤苗。將某些細胞因子的基因轉染到機體免疫細胞(如TIL、L

5、AK細胞基因治療與免疫治療-課件(1)抑癌基因的導入 3、 腫瘤抑制基因 1990年Baker等首先觀察到p53。 (2)癌基因的反義核酸導入治療針對癌細胞癌基因異常活化而設計的反義核酸技術可有效調(diào)節(jié)腫瘤細胞中基因表達 A、 質(zhì)粒載體或病毒載體細胞內(nèi)轉錄出反義RNA;B、 體外人工合成反義寡核苷酸。(1)抑癌基因的導入 3、 腫瘤抑制基因 1990年Bake血管生成抑制劑Angiostatin和Endostatin 4、 抗腫瘤血管形成基因治療(1)針對血管形成生長因子及其受體的基因治療;(2)血管形成抑制因子基因治療;(3)針對腫瘤血管內(nèi)皮細胞的自殺基因治療。血管生成抑制劑Angiostat

6、in和Endostatin (三)自身免疫病的基因治療治療原則: 對自身反應性記憶T細胞和自身免疫靶細胞進行基因修飾,使之產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)性細胞因子和再生性生長因子,用于治療自身免疫病。 Th1Th2Th0IFN- 、IL-2TNF IL-4IL-10 促炎癥細胞因子 抗炎細胞因子 器官特異性AID(三)自身免疫病的基因治療治療原則: 對自身反應性記憶T細胞1、 靶組織基因治療(target tissue gene therapy) 靶細胞:IDDM的胰島細胞;多發(fā)性硬化癥中產(chǎn)生髓磷脂的少突膠質(zhì)細胞;類風濕性關節(jié)炎中的滑膜細胞。 2、 T細胞介導基因治療再生性基因治療 自身免疫靶細胞和自身反應性T

7、細胞尚可因基因修飾而產(chǎn)生治療性的轉基因生長因子。1、 靶組織基因治療(target tissue gene EAETh1MS: multiple sclerosisTh2注入Th2細胞 髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白(proteolipid potein, PLP) EAETh1MS: multiple sclerosisThEAETh1IL-10TransfectionTh1PLP抑制EAE T細胞基因修飾 IL-2啟動子EAETh1IL-10TransfectionTh1PLP抑3、全身性體內(nèi)基因傳導體內(nèi)基因傳導法為直截了當將帶有治療基因的載體注射體內(nèi)。 靜脈或肌肉注射,或者植入包被有經(jīng)過基因修飾的異質(zhì)

8、性細胞。特點:在所有的關節(jié)及對類風濕關節(jié)炎關節(jié)外特征具有感受性的器官內(nèi),都可獲得一定濃度的治療性蛋白質(zhì);缺點:其產(chǎn)生與細胞因子全身表達有關的不良反應。 3、全身性體內(nèi)基因傳導體內(nèi)基因傳導法為直截了當將帶有治療基因4、 局部基因轉導類風濕性關節(jié)炎 載體的關節(jié)內(nèi)注射便于接近至類風濕關節(jié)炎中的破壞過程,故能使鼠滑膜細胞在應用含有TNF-R基因的腺病毒載體的實驗中發(fā)生有效的轉導。將反義核苷酸轉導至關節(jié),抑制滑膜細胞產(chǎn)生促炎癥細胞因子。4、 局部基因轉導類風濕性關節(jié)炎 載體的關節(jié)內(nèi)注射便于接近至二、抗體的免疫學治療(一)單克隆抗體1975年,Khler和Milstein雜交瘤細胞 A、 檢測抗原;B、

9、制備生物導彈; C、 用于防治器官移植排斥反應。 二、抗體的免疫學治療(一)單克隆抗體1975年,Khler基因治療與免疫治療-課件TUMORCELL-S-S-Fab-S-S-單克隆抗體 as vehicles to target免疫毒素(植物和細菌) 同位素(I131, I125, In111) 抗體導向化學療法(甲氨喋呤,長春新堿,阿霉素)裂解前體藥物的酶TUMOR-S-S-Fab-S-S-單克隆抗體 as veh(二)雙向特異性抗體的免疫治療作用(二)雙向特異性抗體的免疫治療作用激活分子 靶分子 CD分子受體腫瘤抗原病原菌抗原12激活分子 靶分子 CD分子受體腫瘤抗原病原菌抗原12基因治

10、療與免疫治療-課件1、 BsAb治療的效應分子Human NK cellCD2CD16FcRIIICD69NK細胞Target cell1、 BsAb治療的效應分子Human NK cellCNK CellTarget cellNK CellTarget cell2、 BsAb治療的靶分子腫瘤表面的特異性腫瘤抗原或血管內(nèi)皮細胞抗原等。2、 BsAb治療的靶分子腫瘤表面的特異性腫瘤抗原或血管內(nèi)皮(三)天然抗Gal抗體增強自體腫瘤免疫原性的作用 1、 TAA免疫原性的增強 用自身腫瘤細胞免疫病人,成效較少,為什么？TAA的免疫原性較弱和APC攝取的腫瘤細胞膜不夠。 使腫瘤細胞膜與IgG形成免疫復合物,能夠通過復合IgG的Fc段與APC上的FcR結合,促進吞噬腫瘤細胞膜。天然存在針對-1,3半乳糖酣(-1,3-gal)表位的抗體與免疫的腫瘤細胞膜形成免疫復合物。 (三)天然抗Gal抗體增強自體腫瘤免疫原性的作用 1、 TA2、 -gal表位和抗Gal-gal表位只在非靈長類動物中合成:在靈長類的演化進程中,編碼-1,3-GT的