小鼠腦組織病理總結(jié)培訓課件

1、小鼠腦組織病理總結(jié)小鼠腦組織病理總結(jié)內(nèi)容石蠟切片的制作冰凍切片的制作免疫組化免疫熒光HE病理相關(guān)試劑配制注意事項2小鼠腦組織病理總結(jié)內(nèi)容石蠟切片的制作2小鼠腦組織病理總結(jié)石蠟切片的制作取材和固定： 處死動物后或者灌注后立即切取組織塊，并快速投入固定液中。脫水和透明：梯度酒精和二甲苯浸蠟和包埋：石蠟切片制作：切片貼片：撈片，展片保存：烤片3小鼠腦組織病理總結(jié)石蠟切片的制作取材和固定： 處死動物后或者灌注后立即切取組小鼠腦組織病理總結(jié)培訓課件灌注 0.5%戊巴比妥鈉100mg/Kg麻醉小鼠，5分鐘左右小鼠麻醉好，仰臥位固定四肢，用酒精棉球擦胸腹部毛，前開皮膚暴露胸部肌肉層，劍突上成V型剪開胸廓，暴

2、露心臟，剪掉右心耳（即視野下心臟上色暗紅組織），與心尖處30角刺入左心室，37左右生理鹽水約10ml緩慢注入，沖凈血液止，換4%多聚甲醛溶液（4預冷），10-20分鐘，鼠僵硬為好。5小鼠腦組織病理總結(jié)灌注 0.5%戊巴比妥鈉100mg/Kg麻醉小鼠，5分固定4%多聚甲醛根據(jù)不同實驗需求要求石蠟切片的固定時間不同，幾小時到一周。我曾用過2天，可以。沖水，固定的時間越長沖水時間越長，預防甲醛沉積。6小鼠腦組織病理總結(jié)固定4%多聚甲醛根據(jù)不同實驗需求要求石蠟切片的固定時間不同，取腦 斷頭，剪開皮膚撥向兩側(cè)暴露顱骨，從枕骨大孔處沿正中線剪開露骨，用鑷子掰開露骨，暴露腦組織，用彎頭鑷將腦組織勾出，在坐標

3、紙上根據(jù)小鼠腦圖譜取相應(yīng)腦區(qū)組織，厚3mm左右。7小鼠腦組織病理總結(jié)取腦 斷頭，剪開皮膚撥向兩側(cè)暴露顱骨，從枕骨大孔處沿正脫水和透明，浸蠟石蠟切片：75%，80%，85%，90%，95%（2個），無水乙醇（2）中每個4小時-過夜，正丁醇1-2天。二甲苯（2個）20-30分鐘。三個蠟，每個大于2小時。冰凍切片：固定后脫水用10%20%30%蔗糖（0.1MPBS溶）每個室溫下4小時過夜，OCT包埋，先在錫紙盒凍一層，在中間放組織，切面朝下，再用OCT將組織沒過，盡量減少氣泡，在液氮表面，保持小盒水平，待中心尚透明時取出，放于-80C保存。8小鼠腦組織病理總結(jié)脫水和透明，浸蠟石蠟切片：75%，80%

4、，85%，90%，9切片石蠟：冷水溫水（54-56） 烤片（80） 切好烤片后可以室溫保存。冰凍：切片溫度-18-20 直接貼 切好于冰凍丙酮中固定5分后-20 保存。9小鼠腦組織病理總結(jié)切片石蠟：冷水溫水（54-56）9小鼠腦組織病理固定方法注意事項1.組織塊大小2cmx2cmx0.5cm2.組織標本應(yīng)及時放入固定液中,切忌干涸3.組織固定后必須沖洗,除去多余的固定液4.一般固定劑溫度以室溫,某些病毒則須低溫 下處理,用丙酮-20度至-40度固定30分鐘5.濃度采用10%中性甲醛或4%多聚甲醛6. 固定液量是標本體積20倍7.固定時間不超過24小時10小鼠腦組織病理總結(jié)固定方法注意事項1.組

5、織塊大小2cmx2cmx0.5cm10組化實驗設(shè)計1.對常規(guī)組織切片進行仔細觀察,根據(jù)可提供形態(tài)學特點,選擇最佳并能反映病變的組織標本2.列出免疫組化的指標3.進行預實驗(設(shè)立陽性、陰性對照)4.找出抗體的最佳修復方法、稀釋度、孵育溫度及孵育時間5.每張切片應(yīng)表明抗體名稱,防止相互混淆11小鼠腦組織病理總結(jié)組化實驗設(shè)計1.對常規(guī)組織切片進行仔細觀察,根據(jù)可提供形態(tài)學12小鼠腦組織病理總結(jié)12小鼠腦組織病理總結(jié)實驗過程70考片一夜二甲苯3個每個10分鐘無水乙醇，95%，90%，85%，80%每個10分鐘3%雙氧水阻斷室溫10分鐘（現(xiàn)配現(xiàn)用）抗體修復液（現(xiàn)配，400ml一次一個抗體盒） 微波爐高火

6、6-7分冷卻至室溫再修復一次冷卻PBS5分3擦片加一抗，4過夜13小鼠腦組織病理總結(jié)實驗過程70考片一夜13小鼠腦組織病理總結(jié)第二日PBS5分3加二抗 室溫20分PBS5分3DAB顯色水沖5-10分蘇木素1-3分水沖10-15分80%85%90%每個3分95%（2個）無水乙醇（2個）二甲苯（2個）每個5分中性樹膠封片。14小鼠腦組織病理總結(jié)第二日PBS5分314小鼠腦組織病理總結(jié)免疫熒光PBS5分35%BSA室溫封閉1小時加一抗，4過夜或根據(jù)說明書時間第二日PBS5分3加二抗37孵育1小時PBS5分3DAPI染色PBS2分丙三醇封片熒光顯微鏡下觀察照相。15小鼠腦組織病理總結(jié)免疫熒光PBS5分

7、315小鼠腦組織病理總結(jié)HE70烤片一夜二甲苯3個每個10分鐘無水乙醇，95%，90%，85%，80%每個5分鐘蘇木素1-5分水鹽酸酒精水0.5%氨水16小鼠腦組織病理總結(jié)HE70烤片一夜16小鼠腦組織病理總結(jié)水95%酒精2分0.5%醇溶伊紅1秒95%酒精30秒95%酒精，無水乙醇（3個）每個2分二甲苯（2個）每個2分鐘中性樹膠封片，吹干17小鼠腦組織病理總結(jié)水17小鼠腦組織病理總結(jié)病理相關(guān)試劑配制4%多聚甲醛：40g多聚甲醛粉末溶于500ml水（50左右）黃槍頭加一滴1M氫氧化鈉至澄清，冷卻至室溫，與500ml0.2MPBS混合，濾紙過濾。0.2MPB:1000ml 0.2M磷酸氫二鈉810ml稱57.996g 0.2M磷酸二氫鈉190ml稱5.928g蔗糖：用0.1MPBS配制生理鹽水：0.85%氯化鈉溶液18小鼠腦組織病理總結(jié)病理相關(guān)試劑配制4%多聚甲醛：40g多聚甲醛粉末溶于500阻斷液：0.3% H2O2 甲醇溶液。30%雙氧水2ml加入甲醇定容至200ml。（現(xiàn)用現(xiàn)配）修復液：（400ml） 檸檬酸0.16g 檸檬酸鈉1.18g蘇木素：100g硫酸鋁鉀加熱溶于1250ml水中5g蘇木素精粉末溶于100ml無水乙醇中溶解后硫酸鋁鉀稍涼，加入醇溶蘇木素煮沸20-30分，加入g