中性蛋白復(fù)合酶法提取大棗多糖的研究

1、中性卵白復(fù)合酶法提取大棗多糖的研究【摘要】目的觀察中性卵白復(fù)合酶法提取大棗多糖的工藝，并驗證大棗多糖的部門藥理作用。要領(lǐng)對差異提取要領(lǐng)作比擬；以多糖的得率和純度為指標(biāo)，對結(jié)果較佳的中性卵白復(fù)合酶提法擺設(shè)正交實行，挑選提取工藝；末了舉舉措物實行。結(jié)果確定中性卵白復(fù)合酶法提取的最正確工藝為：酶液濃度0.15%，pH7.5，提取溫度37；大棗多糖的藥理實行表白大棗多糖屬無毒級，大棗多糖大、中、小劑量對S180小鼠巨噬細(xì)胞吞噬率均有差異程度的進步作用。結(jié)論中性卵白復(fù)合酶法提取大棗多糖工藝有用可行?！娟P(guān)鍵詞】大棗多糖；中性卵白復(fù)合酶；提??；藥理實行Keyrds：Jujubaplysaharide;pun

2、dneutralprtease;Extratin;Pharalgyexperient大棗為鼠李科植物棗Zizyphusjujubaill的成熟果實1，營養(yǎng)富厚，是傳統(tǒng)的中藥，其重要身分有多糖，卵白質(zhì)，氨基酸，維生素，生物堿，皂苷及礦物質(zhì)等2。多糖能進步機體的免疫成效，是抱負(fù)的免疫加強劑，同時對正常細(xì)胞沒有毒副作用3。從大棗中提取多糖及其藥理作用研究已有文獻報道4，5。傳統(tǒng)高溫水提法易造成大棗多糖的生物活性低落，并且能耗大；溶劑萃取規(guī)那么存在溶劑利用本錢高，接納困難及產(chǎn)物溶劑殘留等題目。大多數(shù)含有富厚多糖的植物，細(xì)胞粗大且壁厚，使得多糖難以從細(xì)胞中擴散出來，接納復(fù)合酶協(xié)同作用于植物提取歷程，可以

3、促進多糖的溶出，歷程條件暖和，目的產(chǎn)物活性高，極大地進步多糖的提取率以及純度6。大棗中的卵白質(zhì)對大棗多糖的提取分散造成必然的影響，大棗多糖普及存在于原生質(zhì)中，而原生質(zhì)又處于細(xì)胞壁和細(xì)胞間質(zhì)的包裹下，鑒于這些特點，假設(shè)選用含有卵白酶、纖維素酶、果膠酶的復(fù)合酶液來到場反響，就可以淘汰傳質(zhì)阻力，進步有用身分的提取率。1東西與要領(lǐng)1.1質(zhì)料大棗購于陜北延安市場，選用質(zhì)地精良的干品破壞。1.2試劑中性卵白復(fù)合酶液，酶活2500ug-1，酶液中含有少量纖維素酶、淀粉酶，由寧夏夏盛實業(yè)團體提供。1.3儀器DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器：鞏義市英峪予華儀器廠；LD4-2低速離心機：北京低速離心機廠；7

4、22型可見光分光光度計：上海第三闡發(fā)儀器廠；HI98107酸堿度測試筆：美國哈納儀器公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器：上海嘉鵬科技公司；DZF-6020型真空枯燥箱：上海精宏實行裝備。1.4闡發(fā)要領(lǐng)多糖檢測要領(lǐng)為苯酚硫酸法；數(shù)據(jù)處置懲罰法為加權(quán)均勻法。2結(jié)果2.1差異提取要領(lǐng)的比擬由于差異溶劑對大棗實體及其多糖的作用差異，以是用差異溶劑舉行提取具有差異的結(jié)果。定量稱取烘干棗粉20g,接納添加總質(zhì)量濃度1%果膠酶復(fù)合液pH為7，纖維素復(fù)合酶液pH為7，中性卵白復(fù)合酶液pH為7，40下提取2h，共舉行兩次提取，并以傳統(tǒng)水提法為參照，建立最正確提取要領(lǐng)，結(jié)果見表1。表1差異提取液的提取結(jié)果略由提取結(jié)

5、果可看出，果膠復(fù)合酶，纖維素復(fù)合酶到場提取與傳統(tǒng)水提比擬結(jié)果不是很明顯，果膠酶得到較好的得率，但純度反而落落，就是由于果膠酶在水解大棗中果膠質(zhì)的同時又進而水解掉一部門多糖。而纖維素酶那么在水解大棗纖維素使其布局變得疏松的同時又直接將大棗中的糖卵白和卵白聚糖水解掉，直接導(dǎo)致得率落落。因此在大棗多糖提取中重要應(yīng)用以上兩種酶時并不克不及到達預(yù)期結(jié)果。中性卵白復(fù)合酶到場提取結(jié)果明顯，重要是由于中性卵白酶對大棗中的游離卵白質(zhì)具有水解作用，且目的性強。鑒于上結(jié)果，本研究接納中性卵白復(fù)合酶作為大棗多糖的提取劑。2.2中性卵白復(fù)合酶最正確提取條件正交實行稱取烘干棗粉20g共9份，按正交方案表條件舉行提取，提取

6、液濃縮13，體積分?jǐn)?shù)80%醇沉，低溫滅酶后，二次單純接納去離子水提取2h，得多糖用無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，真空枯燥。利用正交實行對酶添加量、pH、溫度等因素舉行觀察。實行因素程度見表2，最正確提取條件正交實行結(jié)果見表3。由極差結(jié)果得，3個因素對大棗多糖中性卵白復(fù)合酶法提取的影響挨次為：BA，由實行結(jié)果建立重要影響因素參數(shù)為B32A3，即最正確提取條件為：中性卵白酶對底物質(zhì)量濃度0.15%，加酶溫度37，反響pH值7.5。表2正交實行因素程度略表3中性卵白復(fù)合酶最正確提取條件正交實行結(jié)果略2.3大棗多糖的藥理實行取實行最正確工藝所得大棗多糖，經(jīng)精制沉淀后，用于以下藥理實行。表4大棗多糖對S180實體瘤小鼠巨噬細(xì)胞吞噬成效的影響略結(jié)果表白，大棗多糖大、中、小劑量對S180小鼠巨噬細(xì)胞吞噬率均有差異程度的進步作用，此中大、中劑量組有明顯作用，有用劑量為225gkg-1，小劑量組進步不顯著。3討論純酶自身本錢較高，酶的參與會直接增長大棗多糖提取的本錢用度，而這種復(fù)合粗酶利用本錢較低，此中還含有少量的纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、淀粉酶、這些酶彼此之間可