藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

1、概述方法驗(yàn)證的一般原則涉及的三個(gè)主要方面方法驗(yàn)證具體內(nèi)容方法再驗(yàn)證方法驗(yàn)證的評(píng)價(jià)概述分析方法驗(yàn)證的目的對(duì)藥品進(jìn)行質(zhì)量控制是保證藥品安全、有效的基礎(chǔ)和前提。多角度多層面來(lái)控制藥品質(zhì)量。保證用藥安全、有效、質(zhì)量可控。概述分析方法驗(yàn)證的作用分析方法驗(yàn)證是質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的重要組成部分。分析方法驗(yàn)證的本質(zhì)-證明自己概述需要進(jìn)行驗(yàn)證的情況建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)藥品生產(chǎn)工藝變更制劑組分變更方法驗(yàn)證的一般原則原則上每個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目均需要進(jìn)行方法驗(yàn)證。實(shí)際操作上應(yīng)根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，結(jié)合所采用的分析方法的特點(diǎn)確定。同一分析方法用于不同的檢驗(yàn)項(xiàng)目會(huì)有不同的驗(yàn)證要求。方法驗(yàn)證涉及的三個(gè)主要方面需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目

2、定義：為控制藥品質(zhì)量，保證藥品安全有效而設(shè)定的測(cè)試項(xiàng)目。分類 鑒別 雜質(zhì)檢查（限度試驗(yàn)、定量試驗(yàn)） 定量測(cè)定（含量測(cè)定、溶出度、釋放度等） 其他特定檢測(cè)項(xiàng)目：粒徑分布、旋光度等。方法驗(yàn)證涉及的三個(gè)主要方面分析方法分析方法原理儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)等供試品溶液制備、對(duì)照品溶液制備、測(cè)定、計(jì)算。測(cè)試結(jié)果的報(bào)告方法驗(yàn)證涉及的三個(gè)主要方面驗(yàn)證內(nèi)容專屬性線形、范圍、準(zhǔn)確度、精密度檢測(cè)限、定量限、耐用性系統(tǒng)適用性試驗(yàn)等方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容專屬性定義：系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。需要考察專屬性的的項(xiàng)目：鑒別 雜質(zhì)檢查 含量

3、測(cè)定方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容專屬性 鑒別反應(yīng) 鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。專屬性試驗(yàn)要求證明能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的供試品呈正反應(yīng)，而不含被測(cè)成分的陰性對(duì)照呈負(fù)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容專屬性 雜質(zhì)檢查為何要作專屬性-作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量。試驗(yàn)方法 雜質(zhì)可獲得的情況下-向供試品中加入一定量的雜質(zhì) 在雜質(zhì)不能獲得的情況下 - 采用另一種合理但分離或檢測(cè)原理不同的 方法 將供試品破壞后與破壞前比較方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容專屬性 含量測(cè)定含量測(cè)定目的-得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)

4、果。試驗(yàn)方法 雜質(zhì)可獲得的情況下-向供試品中加入一定量的雜質(zhì) 在雜質(zhì)不能獲得的情況下 - 采用另一種合理但分離或檢測(cè)原理不同 的方法 將供試品破壞后與破壞前比較，必要時(shí) 進(jìn)行色譜純度檢查。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容線性定義：系指在設(shè)計(jì)的測(cè)量范圍內(nèi)，檢品結(jié)果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關(guān)系的程度。特點(diǎn)：線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，凡涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目均需要驗(yàn)證線性。試驗(yàn)方法：應(yīng)在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系 分別精密稱樣， 制備一系列被測(cè) 物質(zhì)濃度系列進(jìn)行 測(cè)定。至少制備5個(gè)濃度 以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的 函數(shù)作圖，觀察是否呈線性。用最小二乘法進(jìn)行線性回歸方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容范圍定義：系指能

5、夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，測(cè)試方法適用的試樣中被分析物高低限濃度或量的區(qū)間。特點(diǎn)：范圍是規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開(kāi)始前應(yīng)確定驗(yàn)證的范圍和試驗(yàn)方法。試驗(yàn)方法：可采用符合要求的原料藥配制成不同的濃度，按照相應(yīng)的測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容不同項(xiàng)目范圍的確定-原則上應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。含量測(cè)定：應(yīng)為測(cè)試濃度的80%120%。制劑含量均勻度：應(yīng)為測(cè)試濃度的70%130%。溶出度：范圍為限度的20%，如規(guī)定限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%。釋放度：如規(guī)定限度范圍為，從1小時(shí)后為20%至24小時(shí)后為90%，則驗(yàn)證范圍為 0%110%。雜質(zhì)：

6、范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)結(jié)果，擬定出規(guī)定限度的+20%。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容準(zhǔn)確度定義：系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間的接近程度，有時(shí)也稱真實(shí)度。一般用回收率（%）表示。特點(diǎn)：是定量測(cè)定的必要條件，因此涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度。試驗(yàn)方法：一般制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，共9次，報(bào)告已知加入量的回收率或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容需要進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證的項(xiàng)目含量測(cè)定： 原料藥：使用已知純度的對(duì)照品或符 合要求的原料藥進(jìn)行測(cè)定；或用本法測(cè)定結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。制劑：可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能

7、得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，必要時(shí)與已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容雜質(zhì)定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定與另一成熟的方法進(jìn)行比較。相對(duì)響應(yīng)因子問(wèn)題：如果不能得到，可采用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計(jì)算雜質(zhì)含量（自身對(duì)照法）。應(yīng)明確表明單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比或面積比。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容精密度定義：系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。表示方式：偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。三個(gè)考察層次：重復(fù)性、中間精密度

8、、重現(xiàn)性。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容重復(fù)性定義：系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。測(cè)定方法：在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，或100%的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容中間精密度定義：系指在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如時(shí)間、分析人員、儀器設(shè)備、測(cè)定結(jié)果的精密度。變動(dòng)因素：驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容重現(xiàn)性定義：系指不同實(shí)驗(yàn)室之間不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。變動(dòng)因素：驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)

9、容檢測(cè)限：定義：系指試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)到的最低量（但不一定要準(zhǔn)確定量）。驗(yàn)證意義：考察方法是否具備靈敏的檢測(cè)能力。因此對(duì)雜質(zhì)限度試驗(yàn)，需證明方法具有足夠低的檢測(cè)限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。兩種方法：直觀法、信噪比法。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容直觀法 直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)對(duì)一系列已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確、可靠檢測(cè)被測(cè)物的最小量或最低濃度來(lái)建立。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。

10、其他方法：基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法等。注意事項(xiàng)：無(wú)論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測(cè)限，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定檢測(cè)限。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容定量限定義：系指試樣中的被分析物能夠被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。特點(diǎn)：定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測(cè)能力。（雜質(zhì)定量試驗(yàn)，需考察方法的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準(zhǔn)確檢出。）一般以信噪比10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容方法直觀法：可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限一般同過(guò)

11、對(duì)一系列含有已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確度和精密度都符合要求的情況下，來(lái)確定被測(cè)物能被定量的最小量。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容信噪比法：用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為10：1。 其他方法：基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法等。注意事項(xiàng)：無(wú)論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于定量限，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定定量限。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容耐用性定義：系指測(cè)定條件發(fā)生小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。特點(diǎn)：耐用性主要考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力（如測(cè)試條件要求苛刻，則建議

12、在方法中予以說(shuō)明）。典型變動(dòng)因素：液相色譜的流動(dòng)相組成、流速、pH值、色譜柱、柱溫等；氣相色譜中載氣及流速、色譜柱、固定相、擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度。方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容系統(tǒng)使用性試驗(yàn)定義：對(duì)一些儀器分析方法，在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，有必要將分析設(shè)備、電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作、測(cè)試樣品等一起當(dāng)作完整的系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。系統(tǒng)適用性便是對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估的指標(biāo)。特點(diǎn)：系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方法類型而定。色譜方法對(duì)分析設(shè)備、電子儀器的依賴程度較高，因此所有色譜方法均應(yīng)進(jìn)行該指標(biāo)驗(yàn)證，并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成部分。具體驗(yàn)證參數(shù)和方法參考中國(guó)藥典有關(guān)規(guī)定。 方法再驗(yàn)證定義：在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行全面或部分驗(yàn)證，以保證分析方法可靠，這一過(guò)程稱為方法再驗(yàn)證。 原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證，從而保證所采用的分析