高效液相色譜法測定廣西產(chǎn)美味獼猴桃根中熊果酸的含量

1、高效液相色譜法測定廣西產(chǎn)鮮味獼猴桃根中熊果酸的含量梁潔甄漢深李生茂馬雯芳劉振杰張婷【摘要】目的測定廣西產(chǎn)鮮味獼猴桃根中熊果酸的含量。要領(lǐng)以熊果酸含量為觀察指標，接納正交實行優(yōu)選提取工藝。接納高效液相色譜法，色譜柱為TherHypersilBDS18色譜柱(5,4.6250)；柱溫20；活動相為乙腈-0.1磷酸水溶液8515；流速1.0l/in；檢測波長210n。結(jié)果熊果酸的濃度在0.01250.1500g/l時與峰面積呈精良的線性干系，樣品的均勻接納率為99.35，RSD為1.52n6。結(jié)論該要領(lǐng)正確可靠，重復性好，實用于鮮味獼猴桃根藥材的質(zhì)量操縱。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜廣西產(chǎn)鮮味獼猴桃根熊果

2、酸Keyrds:HPL；RtsfAtinidiadeliisainGuangxi；Ursliaid鮮味獼猴桃Aitinidiadeliisa為獼猴桃科獼猴桃屬植物。性寒味酸、甘，有小毒，具有清熱、利尿、活血、消腫的成果，實用于治療肝炎、水腫、跌打損傷、風濕樞紐痛、淋濁、帶下、瘡癤等癥1。當代研究表白，鮮味獼猴桃根提取物具有抗腫瘤和保肝作用25。本課題組曾對廣西產(chǎn)鮮味獼猴桃根的化學身分舉行研究，從抗腫瘤活性部位分散得到6個三萜類化合物。通過查閱文獻，五環(huán)三萜類化合物普及漫衍于植物界，表現(xiàn)出多種生物活性。它們的布局相似，且都具有抗腫瘤活性，可以或許按捺腫瘤細胞的增殖、侵襲，并有誘導細胞凋亡的作用，

3、對腫瘤細胞表示出較強的細胞毒活性。因此，三萜類化合物是埋伏的癌癥化學防范產(chǎn)物。但很多癌的化學防范藥、癌的分化誘導劑、血管天生按捺劑均因毒性大而限定了其在臨床上的應用，而熊果酸的毒性小，抗腫瘤活性廣，包羅抗突變、抗癌、抗氧化、抗血管天生和誘導癌細胞分化等作用，如今也是癌癥研究范疇的一個熱門69。我們在鮮味獼猴桃根抗腫瘤活性部位中分散得到了熊果酸，通過文獻查閱，迄今為止尚未見用高效液相色譜法測定鮮味獼猴桃根中的熊果酸含量的報道。因此我們接納高效液相色譜法對熊果酸含量舉行測定，為鮮味獼猴桃根內(nèi)涵質(zhì)量操縱提供根據(jù)。1儀器與質(zhì)料1.1儀器Agilent1100Series高效液相色譜儀(美國)：含在線真

4、空脫氣呆板G-1322A，高壓四元泵G-1311A，尺度主動進樣器G-1313A，智能化柱溫箱G-1316A，可變波長檢測器G-1313A，二極管陣列檢測器，Agilent1100series色譜事情站美國安捷倫科技公司；G-16高速微量離心機北京醫(yī)用離心機廠；SB3200T超聲波洗濯儀上海能信超聲；illipreSipliity-185超純水儀美國密里博公司；BP211D電子天平闡發(fā)天平德國賽多利斯。2要領(lǐng)與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為TherHypersilBDS18色譜柱(5,4.6250)；柱溫為20；活動相為乙腈-0.1磷酸水溶液8515；流速為1.0l/in；檢測波長為210n；進樣

5、量為10l；理論塔板數(shù)以熊果酸盤算不低于6000。2.2熊果酸提取要領(lǐng)的觀察表1正交實行因素程度略表2正交實行L934結(jié)果略表3方差闡發(fā)略由實行結(jié)果的直不雅闡發(fā)及方差闡發(fā)可知，影響熊果酸提取結(jié)果的因素巨細挨次為ABD，即提取溶劑提取時間溶劑用量提取次數(shù)，而且各影響因素對實行結(jié)果有明顯性影響。直不雅闡發(fā)確定最正確提取要領(lǐng)為A2B33D2：即以25倍量的80乙醇超聲提取2次，40in/次。2.3熊果酸的含量測定細密度實行：細密汲取熊果酸比較品溶液0.05g/l10l，一連進樣6次，舉行闡發(fā)測定熊果酸峰面積值，熊果酸均勻峰面積為190.53，RSD為0.51%n=6。重復性實行：取同一批供試品6份，

6、每份約1g，細密稱定，按供試品溶液制備要領(lǐng)制備，進樣10l，依法測定其含量，熊果酸的均勻含量為1.507g/g，RSD為0.72n=6。結(jié)果表白重復性精良。不變性實行：取同一份供試品溶液，在雷同色譜條件下別離在0，2，4，6，8，12，24h進樣10l，接納HPL測定熊果酸的峰面積。在24h內(nèi)熊果酸的均勻峰面積為149.99，RSD為0.86n=7。結(jié)果表白供試品溶液在24h內(nèi)不變。加樣接納實行：取同一批供試品6份，每份約0.5g，細密稱定，置具塞錐形瓶中，別離細密參加0.25g/l熊果酸比較品溶液3l，按上述供試品溶液的制備要領(lǐng)制備，進樣10l，依法測定，盤算接納率。結(jié)果見表4。表4熊果酸加

7、樣接納率測定結(jié)果略結(jié)果表白，均勻接納率為99.35，RSD為1.52，該要領(lǐng)可靠，正確度高。藥材中熊果酸的含量測定：別離稱取5批差異產(chǎn)地鮮味獼猴桃根藥材粗粉，按供試品溶液制備要領(lǐng)制備，細密汲取供試品溶液10l，進樣，記載色譜圖，以外標一點法盤算百般品中熊果酸的百分含量。結(jié)果見表5。樣品、比較品及空缺溶劑的色譜圖見圖13。表5差異產(chǎn)地鮮味獼猴桃根中熊果酸的含量略圖1鮮味獼猴桃根藥材HPL圖略圖2熊果酸比較品的HPL圖略圖3甲醇空缺的HPL圖略3討論以熊果酸的含量作為觀察指標，挑選并確定最正確的提取方法，實行選擇了超聲提取方法。如今，超聲技能被普及應用于中草藥有用身分的提取，超聲波產(chǎn)生猛烈振動、空

8、化效應、攪拌作用等，可以加快藥物有用身分進入溶劑，從而進步提取服從，收縮提取時間，而且制止了高溫對提取身分的影響。超聲提取與回流提娶索氏提取方法比力，提取時間短，提取服從高。以熊果酸的含量作為觀察指標，挑選并確定最正確的提取要領(lǐng)，起首觀察了20乙醇、40乙醇、60乙醇、80乙醇和無水乙醇對其含量的影響，實行結(jié)果表白80乙醇提取熊果酸的提取率最高。取熊果酸比較品溶液，在190400n舉行光譜掃描，其最大汲取波長為194n，但溶劑甲醇在短波優(yōu)點均有汲取，為了淘汰滋擾，又只管不低落敏捷度，選擇210n作為檢測波長。按照現(xiàn)實環(huán)境和熊果酸的有關(guān)含量測定的文獻報道10，接納差異的活動相體系舉行實行。本實行

9、中觀察了乙腈-水，甲醇-水，乙腈-磷酸和甲醇-磷酸洗脫體系，結(jié)果選定乙腈-0.1磷酸水溶液8515作為熊果酸含量測定的活動相。結(jié)果表白均能到達基線分散，柱效高，峰形好，可以或許完全滿意色譜定量的要求。接納正交實行法優(yōu)化提取要領(lǐng)，觀察了提取溶劑、溶劑用量、提取時間和提取次數(shù)對提取結(jié)果的影響，實行結(jié)果表白熊果酸的最正確提取要領(lǐng)是以25倍量的80乙醇超聲提取2次，40in/次。熊果酸的濃度在0.01250.1500g/l范疇內(nèi)與峰面積呈精良的線性干系，r=0.9996；均勻接納率為99.35%，RSD為1.52%。接納HPL法，以外標法測定熊果酸的含量，要領(lǐng)輕便、快速，正確度好，細密度高，可用于鮮味

10、獼猴桃根藥材熊果酸的質(zhì)量操縱?！緟⒖嘉墨I】1江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典，下冊.上海：上?？茖W技能出書社，1997：2211.2鐘振國，張鳳芬，甄漢深，等.鮮味獼猴桃根提取物抗腫瘤作用的實行研究J.中醫(yī)藥學刊，2022，922：1705.3李麗，梁潔，甄漢深，等.鮮味獼猴桃根提取物對l4致小鼠急性肝損傷的庇護作用J.廣西中醫(yī)藥，2022，294：50.4李麗，梁潔，甄漢深，等.鮮味獼猴桃提取物對D-半乳糖胺誘導的肝損傷的影響J.廣西醫(yī)學，2022，2810：1608.5李麗，鐘振國，梁潔，等.鮮味獼猴桃根提取物對小鼠急性肝損傷的庇護作用J.時珍國醫(yī)國藥，2022，183：封3.6黃鏡，孫燕，陸士新，等.蘆筍有用身分熊果酸誘導HL-60細胞凋亡的實行研究J.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1999，19(5)：296.7NvtnyL,VahalkvaA,BiggsD.Ursliaid:ananti-turigeniandhepreventiveativityJ.