免疫組織化學(xué)課件

1、免疫組化概念組織包埋液步驟抗原修復(fù)原因和方法結(jié)果判斷假陰性假陽性質(zhì)量控制表上的抗體CD34，CD68B細(xì)胞標(biāo)記物T細(xì)胞標(biāo)記物：3、7細(xì)胞角蛋白免疫組化概念組織包埋液步驟抗原修復(fù)原因和方法結(jié)果判斷免 疫 組 織 化 學(xué) (Immunohistochemistry，IHC)南京鼓樓醫(yī)院病理科王景美免 疫 組 織 化 學(xué) (Immunohisto 免疫組織化學(xué)概念免疫組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用免疫學(xué)(抗原抗體反應(yīng)）和組織化學(xué)（化學(xué)顯色反應(yīng)）的原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些成份進(jìn)行原位定性、定位甚至定量研究的技術(shù)。 免疫組織化學(xué)概念免疫組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)免疫組織化學(xué)的發(fā)展歷史1941：Coon

2、s實(shí)用免疫熒光技術(shù)1970：Sternberger抗體酶標(biāo)技術(shù)（PAP法）1975：Kohler,Milstein單克隆抗體技術(shù)1981：HsuABC法90年代以來：SP法、原位雜交及原位PCR免疫組化技術(shù)等全自動(dòng)免疫組化免疫組織化學(xué)的發(fā)展歷史檢測(cè)系統(tǒng)及原理基本步驟結(jié)果判斷特點(diǎn)及存在的問題常用免疫組化抗體免疫組化的應(yīng)用內(nèi) 容檢測(cè)系統(tǒng)及原理內(nèi) 容 檢測(cè)系統(tǒng)及原理抗原與抗體抗原：指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，并能和該抗體發(fā)生特異性結(jié)合的外來物質(zhì)?？贵w:多克隆抗體: 由多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的不同種類的免疫球蛋白,可與同一抗原的不同表位結(jié)合，可由多種動(dòng)物產(chǎn)生，兔最常用單克隆抗體: 由單一類別的免疫球蛋白組成，來

3、源于單一B細(xì)胞，與抗原的特異表位結(jié)合，主要由鼠產(chǎn)生檢測(cè)系統(tǒng)：直接法、間接法 檢測(cè)系統(tǒng)及原理抗原與抗體直 接 法73substrate-chromogen顯色底物加底物產(chǎn)生有色終產(chǎn)物Enzyme 酶primary Ab一抗Antigen抗原酶標(biāo)一抗與組織抗原相結(jié)合直 接 法73substrate-chromogen加底酶分子直接標(biāo)記第一抗體（酶標(biāo)一抗）快速/簡(jiǎn)便/專一性強(qiáng)。 信號(hào)弱、敏感性差免疫熒光技術(shù)多數(shù)采用此法，熒光素直接標(biāo)記在一抗上現(xiàn)極少用7171酶標(biāo)二抗與非標(biāo)記的一抗相結(jié)合如果一抗是鼠來源的，二抗必須抗鼠免疫球蛋白。比直接法敏感，因?yàn)槎鄠€(gè)二抗很可能與一抗上的多種不同表位結(jié)合，增加標(biāo)記酶的

4、數(shù)量。76間接法酶標(biāo)二抗與非標(biāo)記的一抗相結(jié)合76間接法二 步 間 接 法77primary Ab (mouse)非標(biāo)記一抗與組織抗原結(jié)合secondary Ab(rabbit anti-mouse)Enzyme酶標(biāo)二抗與一抗相結(jié)合substrate-chromogen顯色底物加底物產(chǎn)生有色終產(chǎn)物二 步 間 接 法77primary Ab (mouse)非PAP法ABC法PAP法ABC法鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶連接法（LSAB/SP法） 鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶連接法（LSAB/SP法） 二步法(Envision系統(tǒng))二抗和辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合在多聚葡萄糖骨架上，形成多聚體。直接

5、放大信號(hào)40-50倍二步法(Envision系統(tǒng))二抗和辣根過氧化物酶(HRP)間 接 法大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在使用:卵白素-生物素過氧化物酶系統(tǒng)（如 ABC, SABC, LSAB）多聚物檢測(cè)系統(tǒng)（如 EnVision）這些系統(tǒng)對(duì)大多數(shù)抗體來說穩(wěn)定且靈敏以前普及的 PAP方法（過氧化物酶抗過氧化物酶）現(xiàn)在已較少使用間 接 法 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備 固定取材 脫水 透明 浸蠟包埋切片 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟組 織 固 定 液10中性福爾馬林緩沖液：最好、最經(jīng)濟(jì)和廣泛適用的固定劑，形態(tài)及抗原保存俱佳（需用有效的抗原修復(fù)）其它固定液：如含酸或含汞的固定液，就抗原保存來說均不理

6、想某些商品化的固定液：保存抗原較佳，且價(jià)格昂貴組 織 固 定 液10中性福爾馬林緩沖液：組 織 固 定 時(shí) 間 為確定組織在中性福爾馬林液中固定的最佳時(shí)間，需要權(quán)衡下列因素：盡量縮短固定時(shí)間，但至少要固定24小時(shí)長(zhǎng)時(shí)間的福爾馬林固定會(huì)引起抗原性丟失（雖然可通過適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)在某種程度上逆轉(zhuǎn)）組 織 固 定 時(shí) 間 為確定組織在中性福爾馬取 材取 材脫水 透明 浸蠟脫水 透明 浸蠟包 埋 切 片包 埋 切 片封片HE染色及選擇蠟塊和抗體HE染色封片HE染色及選擇蠟塊和抗體HE染色挑選免疫染色的組織塊 選含有明確的病變組織塊做免疫組化，并盡可能避免下列組織塊：后來另取的組織（固定時(shí)間過久）凍融后的

7、組織脫鈣的組織（有些抗原可能丟失或減弱）壞死或/和出血過多的組織挑選免疫染色的組織塊 選含有明確的病變組織塊做免疫組化， 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備 固定取材 脫水 透明 浸蠟 包埋切片HE染色選擇蠟塊和抗體2、組織切片的脫蠟和抗原修復(fù) 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟抗原修復(fù) 應(yīng)用物理或化學(xué)的方法將組織固定過程中封閉的抗原決定簇修復(fù)暴露的過程稱為抗原修復(fù)。抗原修復(fù) 應(yīng)用物理或化學(xué)的方法將組織固定過程中封閉抗 原 修 復(fù)原因：甲醛固定過程中形成醛鍵而封閉部分抗原決定簇；甲醛在保存過程中形成羧甲基，封閉抗原決定簇；固定時(shí)，蛋白與蛋白之間發(fā)生交聯(lián),可能會(huì)封閉抗原決定簇?？?原 修 復(fù)原

8、因：抗 原 修 復(fù) 的 方 法蛋白水解酶：胰蛋白酶、胃蛋白酶和組織蛋白酶熱抗原修復(fù)（HIER）-最常采用超聲波以上綜合運(yùn)用抗 原 修 復(fù) 的 方 法熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)水?。何⒉t、高壓鍋、高壓消毒鍋、蒸汽室及煮沸等。需不同濃度和pH值的緩沖液：常用 citrate at pH 6.0, EDTA at pH 8.0, Tris-HCL at pH 10.057熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)57熱修復(fù)的優(yōu)點(diǎn)：更有效：染色結(jié)果更一致，操作更單一；事先確定的熱修復(fù)時(shí)間可適用于幾乎所有的組織 一抗可以進(jìn)一步稀釋（節(jié)省費(fèi)用）有些抗體只有采用熱抗原修復(fù)才有效熱修復(fù)的優(yōu)點(diǎn)：No Antigen Retrieval 不修復(fù)處

9、理Citrate buffer, pH 6.0 檸檬酸緩沖液58 經(jīng)抗原修復(fù)處理和不處理時(shí),CD3在扁桃體組織上的染色效果No Antigen Retrieval Citrate b 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備 固定取材 脫水 透明 浸蠟 包埋切片HE染色選擇蠟塊和抗體2、蠟塊組織脫蠟和抗原修復(fù)3、組織抗原和一抗結(jié)合反應(yīng) 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟注 意最佳的一抗滴度時(shí)間不宜過長(zhǎng)、過短溫度不宜過高溶液不宜過少洗滌充分注 意最佳的一抗滴度 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備 固定取材 脫水 透明 浸蠟 包埋切片HE染色選擇蠟塊和抗體2、蠟塊組織脫蠟和抗原修復(fù)3、組織抗

10、原一抗結(jié)合反應(yīng)4、一抗和橋抗的結(jié)合反應(yīng) 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟免疫組織化學(xué)課件 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟1、組織細(xì)胞的準(zhǔn)備 固定取材 脫水 透明 浸蠟 包埋切片HE染色選擇蠟塊和抗體2、蠟塊組織脫蠟和抗原修復(fù)3、組織抗原一抗結(jié)合反應(yīng)4、一抗和橋抗的結(jié)合反應(yīng)5、顯色、襯染結(jié)果觀察 免疫組織化學(xué)方法的基本步驟AEC DABMart-1 Melanoma66AEC和DAB染色圖例AEC DAB66ASPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAparaffin wax 石蠟Paraffin wax tissue section 石蠟包埋組織片二步法染色步驟舉例

11、(CEA)SPECIMENxparaffin wax 石蠟ParaffSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAtissue section 組織片Deparaffinization and Rehydration脫蠟水化SPECIMENxtissue section 組織片DepSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEA3%HydrogenPeroxideDeparaffinization and Rehydration 脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶3% 過氧

12、化氫10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化氫酶SPECIMENx3%Deparaffinization aSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAPBSBufferDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶RinsePBS 洗三次SPECIMENxPBSDeparaffinization 20:00SPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEARinseAntigen Retrieval抗原修復(fù)Deparaffinization

13、 and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶檸檬酸緩沖液微波修復(fù)20分20:00SPECIMENxRinseAntigen RetSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAPBSBufferRinseDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Rinse蒸餾水沖洗后, PBS洗3次SPECIMENxPBSRinseDeparaffiniza

14、SPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEACEAAntibodyPrimary Antibody 一抗Deparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)RinseRinse最適稀釋的CEA抗體孵育60分鐘SPECIMENxCEAPrimary Antibody 一SPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAPBSBufferBlock Endogenous Peroxidase阻斷

15、內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗RinseRinseRinsePBS洗3次Deparaffinization and Rehydration脫蠟和水化SPECIMENxPBSBlock Endogenous PSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAAntibody-HRP Secondary Antibody 葡聚糖二抗RinseDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antige

16、n Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗RinseRinse二抗孵育20分鐘SPECIMENxAntibody-HRP SecondarSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAPBSBuffer Secondary Antibody 葡聚糖二抗RinseDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗RinseRinsePBS洗3次PBSBuffe

17、rSPECIMENxPBS Secondary AntibodSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEADABChromogenDAB Chromogen DAB底物Deparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗Secondary Antibody二抗 RinseRinseRinseRinseRinse加DAB 10分鐘SPECIMENxDABDAB Chromogen DA

18、B底SPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEADistilledWaterDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗 Secondary Antibody 二抗DAB Chromogen DAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinsePBS洗3次, 蒸餾水清洗SPECIMENxDistilledDeparaffinizSPECIMENxM-0194

19、Colon carcinomaM-0194 CEAMayersHematoxylinDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗Secondary Antibody 二抗DAB Chromogen DAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinseHematoxylin Counterstain 蘇木精復(fù)染蘇木素復(fù)染1分鐘SPECIMENxMayersDeparaffinizatSPECIM

20、ENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEATapWaterHematoxylin Counterstain蘇木精復(fù)染Deparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗 Secondary Antibody 二抗DAB Chromogen DAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinseRinse流水沖洗, 細(xì)胞核返藍(lán)SPECIMENxTapHematoxylin Cou

21、nteSPECIMENxM-0194Colon carcinomaM-0194 CEAAqueousMountDeparaffinization and Rehydration脫蠟和水化Block Endogenous Peroxidase阻斷內(nèi)源性過氧化物酶Antigen Retrieval 抗原修復(fù)Primary Antibody 一抗 Secondary Antibody二抗DAB Chromogen DAB底物RinseRinseRinseRinseRinseRinseHematoxylin Counterstain蘇木精復(fù)染RinseAqueous Mount 水性封片封片SPECI

22、MENxAqueousDeparaffinizat注 意顯色時(shí)間適當(dāng)（要求鏡下觀察）襯染不宜太濃判斷染色質(zhì)量觀察受染細(xì)胞 注 意顯色時(shí)間適當(dāng)（要求鏡下觀察） 結(jié) 果 判 斷嚴(yán)格抗原表達(dá)的部位和形式嚴(yán)格染色強(qiáng)度設(shè)對(duì)照：陽性、陰性對(duì)照或內(nèi)部對(duì)照當(dāng)免疫組化結(jié)果與HE切片判斷有矛盾時(shí),以HE切片診斷為準(zhǔn) 結(jié) 果 判 斷嚴(yán)格抗原表達(dá)的部位和形式結(jié)果判斷？陽性反應(yīng)的分布：不均勻性或異質(zhì)性。陽性可出現(xiàn)在單個(gè)細(xì)胞內(nèi)、一群細(xì)胞中或整個(gè)組織中。彌漫一致的淺染可能為非特異性反應(yīng)。陽性反應(yīng)定位：胞膜，胞漿，胞核，胞核/胞漿明確定位(膜,漿,核)，是觀察免疫組化結(jié)果的最終依據(jù)！結(jié)果判斷？明確定位(膜,漿,核)，是觀察免

23、疫組化結(jié)果的最C-erb B2 胞膜陽性C-erb B2 胞膜陽性Ki67胞核陽性Ki67胞核陽性CK7彌漫或片狀的細(xì)胞漿陽性CK7彌漫或片狀的細(xì)胞漿陽性CD68細(xì)胞漿內(nèi)顆粒狀陽性CD68細(xì)胞漿內(nèi)顆粒狀陽性Actin細(xì)胞漿纖維狀陽性Actin細(xì)胞漿纖維狀陽性S-100S-100陽性的半定量乘積法 強(qiáng)度： 0分 無色 1分 淡黃色 2分 棕黃色 3分 棕褐色。 細(xì)胞數(shù): 0分 無 1分 10 2分 1150 3分 5175 4分 75 。 兩者乘積3分為陽性。陽性的半定量乘積法陽性的半定量百分比 (+) 陽性細(xì)胞數(shù)25%,50%,75%陽性的半定量百分比 (+) 陽性細(xì)胞數(shù)25%陽性細(xì)胞數(shù)25%

24、(+) 25%陽性細(xì)胞數(shù)50% (+) 25%陽性細(xì)胞數(shù)50% (+) 50%陽性細(xì)胞數(shù)75% (+) 50%陽性細(xì)胞數(shù)75% (+) 陽性細(xì)胞數(shù)75% 免疫組織化學(xué)的特點(diǎn)和問題特異牲強(qiáng)敏感性高 定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合假陽性假陰性非特異性技術(shù)本身的問題 免疫組織化學(xué)的特點(diǎn)和問題特異牲強(qiáng)假陽性免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng) 敏感性高 定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 “一對(duì)一”的抗原抗體反應(yīng)，如LCA顯示淋巴細(xì)胞。只有在組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。 免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng) “一對(duì)一”的抗原抗體反應(yīng)，如LCA顯免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng) 敏感性高 定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 直接法，間接法：抗體的

25、稀釋只能是幾倍、幾十倍。ABC法、SP法，兩步法等：抗體稀釋上百上千倍。 越來越方便應(yīng)用于臨床常規(guī)診斷工作 免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng) 直接法，間接法：抗體的稀釋只能是幾倍免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng) 敏感性高 定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 原位確定組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分. 方法統(tǒng)一,定性可靠、定位準(zhǔn)確、定量可能。形態(tài)學(xué)被賦予了功能及代謝的含意。免疫組化的優(yōu)點(diǎn)特異牲強(qiáng) 原位確定組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分. 假陰性與假陽性問題 免疫組織化學(xué)課件假陰性原因抗原丟失抗原修復(fù)不適當(dāng)方法不足夠敏感失效的抗體加錯(cuò)試劑或試劑擺放位置錯(cuò)誤假陰性原因假陽性原因 非特異性反應(yīng)：邊緣現(xiàn)象；皺折和刀痕；出血和壞死；組織擠壓；被動(dòng)

26、吸收和主動(dòng)吞噬而使抗原出現(xiàn)在不該出現(xiàn)的部位 抗體與多種抗原有交叉反應(yīng) 內(nèi)源性酶的顯色 試劑濃度過高 異位抗原的表達(dá)假陽性原因 非特異性反應(yīng)：邊緣現(xiàn)象；皺折和刀痕；出血和壞死；非特異性著色（全片）1、抗體濃度過高 2、抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)或溫度較高 3、DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長(zhǎng) 4、組織變干 5、切片在緩沖液或修復(fù)液中浸泡時(shí)間太長(zhǎng) 6、一抗變質(zhì)、質(zhì)量差的多克隆抗體 非特異性著色（全片）1、抗體濃度過高 邊緣效應(yīng)邊緣效應(yīng)“陰陽臉”著色試劑僅覆蓋了部分組織而不是全部“陰陽臉”著色試劑僅覆蓋了部分組織而不是全部 固定不足、組織變干 非特異性染色 固定不足、組織變干氣 泡氣 泡灶片狀著色1、裱片時(shí)水未排盡，

27、在局部形成氣泡使組織突起 2、壞死組織灶 3、制作APES涂膠片時(shí)，膠的濃度太高，干燥后在玻片上留下白色小點(diǎn)，顯色時(shí)白色小點(diǎn)著色 灶片狀著色1、裱片時(shí)水未排盡，在局部形成氣泡使組織突起 灶狀著色：機(jī)械原因著色灶狀著色：機(jī)械原因著色壞死組織著色：AE1/AE3壞死組織著色：AE1/AE3非特異性反應(yīng),出血和壞死非特異性反應(yīng),出血和壞死 胞漿著色過氧化物酶（紅細(xì)胞著色） 胞漿著色 胞漿著色一抗過濃或交叉反應(yīng)：P63（乳腺） 胞漿著色 免疫組織化學(xué)的新進(jìn)展高效的抗原修復(fù)技術(shù)（即使不同方式固定或處理的組織仍能得到一致的結(jié)果）高度敏感的檢測(cè)系統(tǒng)大量能應(yīng)用于常規(guī)石蠟切片的抗體雙染甚至三染免疫組化技術(shù)免疫組

28、化自動(dòng)化 免疫組織化學(xué)的新進(jìn)展高效的抗原修復(fù)技術(shù)（即使不同方式固定免疫組織化學(xué)課件抗體必須經(jīng)過驗(yàn)證研究 由于組織固定、脫水過程、包埋等內(nèi)在影響因素的變化，不可能建立一個(gè)通用的免疫組化染色程序？對(duì)照的設(shè)立陽性對(duì)照與陰性對(duì)照內(nèi)對(duì)照空白對(duì)照組織微陣列免疫組化的質(zhì)量控制抗體必須經(jīng)過驗(yàn)證研究免疫組化的質(zhì)量控制常 用 免 疫 組 化 抗 體常 用 免 疫 組 化 抗 體上皮組織標(biāo)記物間葉組織標(biāo)記物淋巴造血系統(tǒng)標(biāo)記物神經(jīng)及內(nèi)分泌標(biāo)記物腫瘤相關(guān)抗原標(biāo)記物器官或組織特異性抗原標(biāo)記物病原體標(biāo)記物上皮組織標(biāo)記物1、上皮組織標(biāo)記物 角蛋白系列（cytokeratin, CK）上皮膜抗原（epithelial memb

29、rane antigen, EMA）癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）1、上皮組織標(biāo)記物 CK的概述CK- 抗體在外科病理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最為廣泛多年以來由于各種特殊亞型的CK抗體出現(xiàn)使得CK的應(yīng)用更加廣泛CK的概述CK- 抗體在外科病理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最為廣泛什么是CK?中間絲（重要的細(xì)胞骨架蛋白）見于所有的上皮細(xì)胞及間皮細(xì)胞整個(gè)家族中有40-68kD的不同分子量及等電點(diǎn)pH 至少有20個(gè)亞型（酸性或堿性）什么是CK?中間絲（重要的細(xì)胞骨架蛋白）低分子量CK中間分子量 CK高分子量 CKCK-pan（如MNF-116）或雞尾酒調(diào)制CK（如MAK6）CAM5.2 34E

30、12AE1/AE3CK5/6低分子量CK中間分子量 CK高分子量 CKCK-pan（如M什么是 CK?CK1，CK2 和 CK10：最高分子量細(xì)胞角蛋白，僅表達(dá)在鱗狀上皮的角化層CK5, CK6和 CK14: 高分子量細(xì)胞角蛋白，表達(dá)于鱗狀上皮及基底細(xì)胞CK7, CK8, CK18 和 CK19: 低分子量細(xì)胞角蛋白，表達(dá)在單層上皮和內(nèi)分泌細(xì)胞其它 CK亞型為中間分子量最常用，胞漿陽性著色，細(xì)絲狀，用于確定腫瘤為上皮源性什么是 CK?CK1，CK2 和 CK10：最高分子量細(xì)胞角波形蛋白（vimentin， VIM）肌組織標(biāo)記物血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物組織細(xì)胞的標(biāo)記物2、間葉組織標(biāo)記物波形蛋白（v

31、imentin， VIM）2、間葉組織標(biāo)記物波形蛋白（vimentin， VIM） 中間微絲蛋白分布于間葉細(xì)胞及其起源的腫瘤也見于上皮性腫瘤已建議廢棄波形蛋白（vimentin， VIM） 肌原性標(biāo)記Desmin胞漿陽性著色 平滑肌/ 骨骼肌及其腫瘤的良好標(biāo)記，肌纖維母細(xì)胞有時(shí)也陽性，但肌上皮陰性 一些間皮瘤陽性 促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞腫瘤 肌原性標(biāo)記Desmin胞漿陽性著色 平滑肌/ 骨骼肌肌源性標(biāo)記MSA（Muscle-specific actin）胞漿陽性著色極好的肌源性標(biāo)記平滑肌、骨骼肌及其腫瘤肌纖維母細(xì)胞及相關(guān)腫瘤（惡纖組、結(jié)節(jié)性筋膜炎等）肌上皮及其腫瘤血管周細(xì)胞腫瘤一些間皮瘤肌源

32、性標(biāo)記MSA（Muscle-specific act血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物 第八因子相關(guān)抗原（factor related antigen,F-8） 荊豆凝集素（ulex europaeus UEA-1） CD34 CD31 D2-40血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物 第八因子相關(guān)抗原（factor r血管源性標(biāo)記CD31細(xì)胞膜陽性著色 內(nèi)皮細(xì)胞、巨核系細(xì)胞/ 血小板陽性 有時(shí)漿細(xì)胞/ 漿細(xì)胞瘤陽性 主要用于診斷血管性腫瘤：特異且敏感 用于識(shí)別骨髓中不正常的巨核細(xì)胞 用于巨核細(xì)胞系白血病 血管源性標(biāo)記CD31細(xì)胞膜陽性著色 內(nèi)皮細(xì)胞、巨核系血管源性標(biāo)記CD34細(xì)胞膜/細(xì)胞漿陽性著色血管內(nèi)皮/巨核細(xì)胞/血小板

33、 很好的血管標(biāo)記，但特異性差多種腫瘤CD34陽性，包括：血管瘤、血管周細(xì)胞胃腸間質(zhì)瘤等血管源性標(biāo)記CD34細(xì)胞膜/細(xì)胞漿陽性著色血管內(nèi)皮/組織細(xì)胞的標(biāo)記物 1 抗胰蛋白酶(1-antitypsin, AAT)和 1抗糜蛋白酶（1-antichymotrypsin, AACT）溶菌酶（lysozyme, Lys）CD68組織細(xì)胞的標(biāo)記物 1 抗胰蛋白酶(1-antityps組織細(xì)胞標(biāo)記CD68（PGM1） 胞漿內(nèi)顆粒狀陽性著色 較好的組織細(xì)胞和單核細(xì)胞及其腫瘤的標(biāo)記 有些非組織細(xì)胞也可陽性，包括：腎小管、粒細(xì)胞肉瘤、惡黑、血管瘤樣惡纖組等 組織細(xì)胞標(biāo)記CD68（PGM1）3、淋巴造血系統(tǒng)標(biāo)記物

34、白細(xì)胞共同抗原（leucocyte common antigen,LCA,CD45） 免疫球蛋白(immunoglobulin Ig) B細(xì)胞標(biāo)記物 T細(xì)胞標(biāo)記物 T淋巴細(xì)胞亞群標(biāo)記物 粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物其他3、淋巴造血系統(tǒng)標(biāo)記物 白細(xì)胞共同抗原（leucocyte 白細(xì)胞標(biāo)記LCA （CD45RB）幾乎所有的白細(xì)胞、漿細(xì)胞瘤（+ ） HE 下明確的淋巴瘤不必要染LCA 有些淋巴母細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、外周T 細(xì)胞淋巴瘤（- ） 經(jīng)典Hodgkin 的R-S 細(xì)胞（-） 白細(xì)胞標(biāo)記LCA （CD45RB）幾乎所有的白細(xì)胞、漿B細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD20 （L26）胞膜陽性著色C

35、D79a胞漿陽性著色:各階段B細(xì)胞陽性B細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記B祖細(xì)胞前B細(xì)胞未成熟的B細(xì)胞成熟的B細(xì)胞激活的 B 細(xì)胞漿細(xì)胞前體細(xì)胞; 非抗原依賴型初始 B細(xì)胞; 非抗原依賴型生發(fā)中心和標(biāo)志; 抗原依賴型TdTCD20, CD22CD19, PAX5CD79aCD10Bcl-6CD138細(xì)胞漿 CD22B祖細(xì)胞前B細(xì)胞未成熟的B細(xì)胞成熟的B細(xì)胞激活的 B 細(xì)胞 全T細(xì)胞標(biāo)記物 CD3 CD5 CD7 CD45RO CD43 用于T淋巴細(xì)胞和其起源腫瘤的識(shí)別 全T細(xì)胞標(biāo)記物 CD3T細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD3 （polyclonal）胞漿/膜陽性著色，核周凝聚，有時(shí)高爾基體也陽性 極好的T 細(xì)胞標(biāo)記，與CD43

36、不同，髓系細(xì)胞和組織細(xì)胞不著色 極好的T細(xì)胞和NK淋巴瘤標(biāo)記T細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD3 （polyclonal）胞漿/膜粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物CDl5(LeuM1)髓過氧化物酶（MPO）CD68MAC387溶菌酶(lysome) 粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物CDl5(LeuM1)組織細(xì)胞標(biāo)記CD68（PGM1）胞漿內(nèi)顆粒狀陽性著色 較好的組織細(xì)胞和單核細(xì)胞（包括漿樣單核細(xì)胞）及其腫瘤的標(biāo)記 有些非組織細(xì)胞也可陽性，包括：腎小管、粒細(xì)胞肉瘤、惡黑、血管瘤樣惡纖組等 組織細(xì)胞標(biāo)記CD68（PGM1）胞漿內(nèi)顆粒狀陽性著色 4、神經(jīng)及內(nèi)分泌標(biāo)記物神經(jīng)組織標(biāo)記物 膠質(zhì)纖維酸性蛋白 (Glial fi

37、brillary acidic protein, GFAP) S-l00蛋白神經(jīng)元特異性烯醇酶 (Neuron Specific Enolase，NSE)髓磷脂堿性蛋白 (Myelin basic protein，MBP)神經(jīng)元特異核蛋白 (NeuN)少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-2 (Oligo-2)4、神經(jīng)及內(nèi)分泌標(biāo)記物神經(jīng)組織標(biāo)記物 內(nèi)分泌和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)標(biāo)記物垂體激素:GH、LH、ACTH、Prl、FSH、TSH 胰島細(xì)胞、胃腸道和呼吸道激素神經(jīng)元特異性烯醇化酶 (Neuron Specific Enolase，NSE) 嗜鉻顆粒蛋白 (Chromogranin A， CgA) 突觸囊泡蛋白

38、(Synaptophysin，Syn) 內(nèi)分泌和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)標(biāo)記物GFAP （Glial fibrillary acidic protein ）胞漿陽性著色星形細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、室管膜瘤和脈絡(luò)叢乳頭狀瘤陽性 一些外周神經(jīng)鞘瘤可陽性 涎腺多形性腺瘤?？申栃?乳腺的肌上皮有時(shí)也可陽性 GFAP （Glial fibrillary acidicS-100細(xì)胞核、細(xì)胞漿陽性著色神經(jīng)源性腫瘤、惡性黑色素瘤、肌上皮腫瘤、脂肪腫瘤S-100細(xì)胞核、細(xì)胞漿陽性著色神經(jīng)源性腫瘤、惡性黑色素Syn細(xì)胞漿陽性著色 神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及腫瘤、神經(jīng)元和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（+） 特異性和敏感性均好 CgA胞漿內(nèi)顆粒狀著色染神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的分泌小泡類癌、Merkel細(xì)胞癌、甲狀旁腺腺瘤等強(qiáng)陽性神經(jīng)性腫瘤可陽可陰Syn細(xì)胞漿陽性著色 神經(jīng)和神