藥分概論課件

1、藥學(xué)導(dǎo)論第七章 藥物分析學(xué)主要內(nèi)容一、藥物分析學(xué)的性質(zhì)與任務(wù)二、藥物分析學(xué)的主要內(nèi)容三、藥物分析新技術(shù)藥品質(zhì)量，人命關(guān)天！1990年，在尼日利亞的一家醫(yī)院，109名兒童喝了摻有汽車防凍液的止咳糖漿后全部死亡，震驚了世界。在孟加拉國，從1990年到1993年，共有250名兒童因服用護(hù)士給他們的有毒退燒藥造成腎功能衰竭而死亡 2005年，中國安徽泗縣甲肝疫苗事件，300多兒童出現(xiàn)不良反應(yīng)，一個六歲女孩死亡。藥物分析學(xué)的性質(zhì)研究和發(fā)展藥品全面質(zhì)量控制的“方法學(xué)科”。它主要運用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)的方法和技術(shù)研究化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，也研究中藥制劑和生化藥物及其

2、制劑有代表性的質(zhì)量控制方法。通常是指研究藥物及其制劑的組成、理化性質(zhì)、辨別藥物的真?zhèn)巍z查藥物的純度和測定藥物的含量。藥物分析學(xué)的任務(wù)檢驗藥品質(zhì)量及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究藥物生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制藥物儲存過程的質(zhì)量考察臨床藥物分析工作藥學(xué)藥劑學(xué)藥理學(xué)藥物化學(xué)藥物分析學(xué)生藥學(xué)微生物與生化藥物天然藥物化學(xué)合成藥物化學(xué)執(zhí)業(yè)藥師考試科目藥事管理與法規(guī)藥學(xué)專業(yè)知識（一）藥學(xué)專業(yè)知識（二）綜合知識與技能藥學(xué)中藥學(xué)專業(yè)知識（一）中藥學(xué)專業(yè)知識（二）綜合知識與技能中藥學(xué) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 中華人民共和國藥典 簡稱中國藥典藥品標(biāo)準(zhǔn) (國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布)藥品管理法規(guī)定 ：中藥飲片必須按照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)炮制（沒有國家標(biāo)準(zhǔn)的，

3、按省級藥監(jiān)部門制定的炮制規(guī)范進(jìn)行）。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中國藥典簡介中國藥典是國家為保證藥品質(zhì)量、保護(hù)人民用藥安全有效而制定的法典；是執(zhí)行藥品管理法、監(jiān)督檢驗藥品質(zhì)量的技術(shù)法規(guī)；是我國藥品生產(chǎn)、經(jīng)營、使用和監(jiān)督管理所必須遵循的法定依據(jù)。 中國藥典簡介1. 沿革 中華人民共和國建國以來，分別于1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000和2005年出版了八版中國藥典 ，現(xiàn)行版為2005年版，分為一、二、三部。共收載3214種。一部收載藥材及飲片、植物油脂及提取物、成方制劑和單味制劑等，二部收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及藥用輔料等，三部收載生物制品。傷寒疫苗、乙型腦炎

4、滅活疫苗、抗狂犬病血清、人血白蛋白、注射用重組人干擾素、結(jié)核菌素純蛋白衍生物等。乙醇、維生素E注射液、阿昔洛韋乳膏、羅紅霉素片、頭胞拉定、甘氨酸、锝99mTc植酸鹽注射液、石蠟、淀粉丁公藤、人參、僵蠶、廣藿香油、莪術(shù)油、連翹提取物、三七片、十全大補丸、狗皮膏、雙黃連口服液等。中國藥典簡介內(nèi)容 凡例 正文 附錄 索引凡例（General Notices）：解釋和使用中國藥典正確進(jìn)行質(zhì)量檢定的基本原則。它把一些與標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)的、共性的、需要明確的問題，以及采用的計量單位、符號與專門術(shù)語等，用條文加以規(guī)定，以避免在全書中重復(fù)說明。附錄：包括制劑通則、生物制品通則、一般鑒別實驗、通用檢測方法和指導(dǎo)原則。如

5、：分光光度法、色譜法、有關(guān)物理常數(shù)測定法、一般雜質(zhì)檢查法、試液配制法、氧瓶燃燒法、熱原檢查法、放射性藥品檢定法、原子量表、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證、藥物穩(wěn)定性實驗指導(dǎo)原則等內(nèi)容。索引：正文之前有以筆畫排序的中文品名目次；書末有以漢語拼音排序的中文索引和英文索引。正文：藥品或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。其主要內(nèi)容為：品名、有機(jī)藥物的結(jié)構(gòu)式、分子式與分子量、性狀、鑒別、檢查、含量或效價測定、類別、制劑以及儲藏等。苯 巴 比 妥Benbabituo Phenobarbital 本品為5-乙基-5-苯基-2,4,6(1H,3H,5H)-嘧啶三酮。按干燥品計算，含C12H12N2O3 不得少于98.5%。C12H1

6、2N2O3 232.24【鑒別】 （1）本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄III）（2）取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg，（略）（3）取樣品約50mg，置試管中，（略）（4）本品的紅外吸收光譜應(yīng)與對照譜圖（光譜集227圖）一致【檢查】酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或堿性物質(zhì) 干燥失重（附錄VIII L） 熾灼殘渣（附錄VIII N） 【含量測定】 取本品約0.2g，精密稱定，加甲醇40ml溶解，再加新制的3%無水碳酸鈉溶液15ml，照電位滴定法（附錄VIIA），用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L)相當(dāng)于23.22mg的 C12H12N2O3

7、【類別】 鎮(zhèn)靜催眠藥、抗驚厥藥【貯藏】 密封保存【制劑】 苯巴比妥片藥品檢驗的基本程序取樣性狀檢查鑒別檢查含量測定寫出檢驗報告1.取樣要考慮取樣的科學(xué)性、真實性與代表性基本原則 ：均勻、合理 特殊裝置： 如固體原料藥用取樣探子取樣量：見中國藥典（2005版）一部 附錄A例：苯甲酸性狀 本品為白色有絲光的鱗片或針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；質(zhì)輕；無臭或微臭；在熱空氣中微有揮發(fā)性；水溶液顯酸性反應(yīng)。本品在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在沸水中溶解，在水中微溶。熔點 本品的熔點（附錄 C）為121.0124.5。 3.鑒別藥物的鑒別是利用其分子的結(jié)構(gòu)所表現(xiàn)的特殊化學(xué)行為或光譜、色譜特征，來判斷藥品的真?zhèn)?。選用鑒別

8、的方法的原則，必須準(zhǔn)確、靈敏、簡便、快速，能準(zhǔn)確無誤的作出結(jié)論。 每一項鑒別試驗均為否定性試驗鑒別試驗一般采用一組試驗進(jìn)行全面評價4.檢查中國藥典檢查項下包括藥物的有效性、均一性、純度要求和安全性四方面。 對于原料藥，主要是藥品的純度要求，即藥物的雜質(zhì)檢查，亦稱限度檢查、純度檢查（Tests of Impurities）。項目包括一般雜質(zhì)檢查和特殊雜質(zhì)檢查。一般性雜質(zhì)的檢驗方法收載于藥典附錄中，特殊性雜質(zhì)列于該藥物的檢查項下。一般雜質(zhì)檢查的內(nèi)容 有 機(jī)氯 硫 鐵 砷 銨 重 酸 溶 澄 水 干 熾 易 溶化 酸 鹽 鹽 鹽 金 堿 液 清 分 燥 灼 碳 劑物 鹽 屬 度 顏 度 失 殘 化

9、殘 色 重 渣 物 留 量 制劑檢查法片劑檢查法常規(guī)檢查特殊檢查重量差異崩解時限含量均勻度（小劑量片劑）溶出度（難溶性片劑）注射劑檢查法注射液裝量注射用無菌粉末的裝量差異澄明度無菌熱原或細(xì)菌類毒素不溶性微粒5.含量測定 常用方法：化學(xué)分析法、儀器分析法或生物測定法。1.原料藥應(yīng)首選容量法。2.制劑應(yīng)首選色譜法。3.特殊藥品，如酶類藥物應(yīng)首選酶分析法。4.放射性藥品應(yīng)首選放射測定法。5.上述方法不合適的可選計算分光光度法。6.新藥研制：應(yīng)選用原理不同的兩種方法進(jìn)行對照性測定。6.檢驗報告包括原始記錄、檢驗報告。原始記錄和檢驗報告上必須有檢驗人員、復(fù)核人員及部門負(fù)責(zé)人簽名或蓋章，必要時由檢驗單位蓋

10、章。 原始記錄： 完整、真實、具體，清晰。檢驗報告書：完整、簡潔，結(jié)論明確，除無操作步驟外其它內(nèi)容同原始記錄。 小 結(jié)藥品質(zhì)量制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全面控制GLP,GMPGSP,GCP,GAP藥物分析重要環(huán)節(jié)國家標(biāo)準(zhǔn)藥典內(nèi)容藥品檢驗基本程序藥物分析課程的主要內(nèi)容1. 藥典的基本組成與正確使用2. 藥物的鑒別、檢查和含量測定的基本規(guī)律與 基本方法3. 以七類典型藥物的分析為例，圍繞藥品質(zhì)量 的全面控制，討論如何運用化學(xué)的、物理化 學(xué)的以及其他必要的手段與方法進(jìn)行藥品質(zhì) 量分析的基本規(guī)律與基本方法。藥物分析課程的主要內(nèi)容4制劑分析、中藥制劑分析及生化藥物分析 的特點與基本方法5藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的基本原則、內(nèi)

11、容及方 法。6. 藥品質(zhì)量控制中的現(xiàn)代分析方法與技術(shù)。藥物分析的新技術(shù)與新方法分析對象原料藥及制劑天然藥物生物樣本分析技術(shù)多學(xué)科綜合分析化學(xué)分析光譜色譜分析聯(lián)用技術(shù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分析DNA序列分析單純分析化學(xué)數(shù)據(jù)處理數(shù)值計算模式識別微電極探測技術(shù)離子選擇性微電極可直接刺入活體細(xì)胞內(nèi)及組織內(nèi)進(jìn)行離子活度測定，在臨床生化、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。國內(nèi)已經(jīng)研制成功的有對乙酰膽堿、5羥色胺、組織胺、多巴胺等重要神經(jīng)遞質(zhì)敏感的離子選擇性微電極。 微透析技術(shù)(microdialysis) 一種新型生物采樣技術(shù), 可在麻醉或清醒的生物體上使用, 特別適合于深部組織和重要器官的活體生化研究。主要原理為將一種

12、具有透析作用且充滿液體的微細(xì)探針置于生物體內(nèi), 與探針周圍組織進(jìn)行物質(zhì)交換后測定其內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)含量。參考文獻(xiàn)：韓慧婉.微透析技術(shù)及其應(yīng)用，化學(xué)通報2000（12）：52。 微透析探針結(jié)構(gòu)示意圖1 出液管2 進(jìn)液管3 針柄上部4 針柄下部5 微透析膜微透析技術(shù)示意圖活體實驗動物微透析探針微注射器灌注液微注射泵檢測系統(tǒng)進(jìn)液管出液管基質(zhì)輔助激光解吸離子化質(zhì)譜（MALDIMS） 1.基本原理：將大分子樣品與過量的小分子基質(zhì)的混合溶液點加在樣品的靶盤上，待溶劑揮發(fā)后形成共結(jié)晶，用脈沖激光照射晶體時，基質(zhì)分子吸收能量與樣品解吸附并使其電離，通常是基質(zhì)上的質(zhì)子轉(zhuǎn)移到樣品分子上，形成樣品的質(zhì)子化分子離子峰。由

13、于激光波長（337nm或2.94微米）不被大分子吸收，大分子形成的分子離子峰基本上不再進(jìn)一步裂解，從而可準(zhǔn)確測定大分子化合物的分子量，純度等。 基質(zhì)輔助激光解吸離子化質(zhì)譜（MALDIMS）2.儀器裝置：MALDITOFMS應(yīng)用最為廣泛，MALDI TOFMS 中最常用的是氮激光源，波長為337 nm。也有用紅外激光即鉺/ 鐿鋁石榴石 ( Erbium/ yttriumaluminiumgarnet , ErYAG) 激光，波長為2. 94m?；|(zhì)輔助激光解吸離子化質(zhì)譜（MALDIMS）3.特點：可分析高分子量的化合物，如多肽與蛋白質(zhì)、低聚核苷酸、寡糖、糖結(jié)合物及合成高分子化合物的分析（MALD

14、ITOFMS可測定分子量為1MDa的人體免疫球蛋白），靈敏度和準(zhǔn)確度遠(yuǎn)高于常規(guī)的生化分析法。4.應(yīng)用：多肽與蛋白質(zhì)序列分析和分子量的準(zhǔn)確測定、純度評價。 86685810000 50000 90000 130000質(zhì)荷比 m/z離子離子豐度人血清白蛋白M+H+峰人血清白蛋白M+2H2峰人血清白蛋白2M+H+峰人血清白蛋白3M+2H2峰分子量為22377的雜質(zhì)蛋白質(zhì)分子量為14079的雜質(zhì)蛋白質(zhì)親和色譜(Affinity Chromatography)方法根據(jù)生命現(xiàn)象中大分子間的高親和力和高特異性可逆結(jié)合的一種獨特的色譜分離分析技術(shù)。如以單克隆抗體為配基的免疫親和色譜，以染料、氨基酸類、金屬螯合

15、劑及巰基化合物為配基的生物模擬親和色譜等。特點利用生物分子間的特異性反應(yīng)來實現(xiàn)組分的分離和純化的，具有較高的專屬性和靈敏度。應(yīng)用脫線AC模式與在線AC模式（HPAC和聯(lián)用技術(shù)）。 親和色譜示例將抗-乳鏈球菌素單克隆抗體固定于N -羥基琥珀酰亞胺-活性瓊脂糖擔(dān)體上, 完成了乳鏈球菌素A 的純化。將抗體配基通過硝化纖維素附著于MALDI探針的尖部, 選擇性地捕集和濃縮血漿中治療用多肽, 然后采用MALDI MS分析。單克隆抗體SZ-95 親和色譜純化人血小板第4 因子。分子印跡技術(shù)分子印跡技術(shù)是將待分離的目標(biāo)分子（模板分子）與交聯(lián)劑在聚合物單體溶液中進(jìn)行聚合制備得到固體介質(zhì)，然后通過物理或化學(xué)手段

16、除去介質(zhì)中的目標(biāo)分子，便得到“印跡”有目標(biāo)分子空間結(jié)構(gòu)和結(jié)合點位的分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer, MIP) 分子印跡技術(shù)MIP 的合成一般要經(jīng)過以下步驟: 1. 使目標(biāo)分子和聚合物單體間以共價或非共價方式產(chǎn)生相互作用, 形成復(fù)合物; 2. 加入交聯(lián)劑, 在復(fù)合物周圍產(chǎn)生本體聚合反應(yīng)形成聚合物; 3. 除去目標(biāo)分子;4. 造粒5. 后處理 分子印跡技術(shù)上述步驟中，印跡分子既能參加聚合反應(yīng)，又能在聚合反應(yīng)后容易去除。能滿足要求的化合物主要有糖類、氨基酸及其衍生物、蛋白質(zhì)、核苷酸及其衍生物、生物堿、膽固醇、維生素、酶、抗原和其他一些藥物分子。分子印跡技術(shù)

17、目前，有關(guān)分子印跡技術(shù)半數(shù)以上用于手性藥物的分離。被分離的藥物分子有N乙酰DL氨基酸及其酯類衍生物、叔丁氧羰基氨基酸及其衍生物、芐氧羰基氨基酸及其衍生物、丹酰氨基酸及其衍生物、二羥基苯酮、甲基氫化肉桂酸、扁桃酸、萘心安 等。分子印跡技術(shù)也用于體內(nèi)藥物分析與生物傳感器。中藥分析技術(shù)傳統(tǒng)的中藥鑒定:原植（動）物來源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定及生物鑒定。近年來，隨生物技術(shù)及計算機(jī)技術(shù)的不斷發(fā)展，為革新法定的中藥鑒定和質(zhì)量控制方法奠定了基礎(chǔ)。基因分析法原理：一種通過對不同生物個體遺傳物質(zhì)DNA的差異來鑒別生物物種的方法特點：DNA作為遺傳信息的直接載體，不受環(huán)境等因素的影響，方法具有更高的準(zhǔn)確

18、度和可靠性。方法：限制內(nèi)切酶片段長度多態(tài)技術(shù)(RFLP) 基于PCR的分子標(biāo)記技術(shù) 前景：該技術(shù)由于處于研究階段，在本世紀(jì)有可能成為繼色譜技術(shù)之后，在中藥鑒定和分析領(lǐng)域中又一常規(guī)技術(shù)。 RAPD(random amplified polymorphic DNA) 和APPCR（arbitrarily primed PCR） 利用一系列(通常數(shù)百個)不同的隨機(jī)排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈為引物，對所研究基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。聚丙烯酰胺或瓊脂糖電泳分離，經(jīng)EB染色或放射性自顯影來檢測擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性，這些擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性反映了基因組相應(yīng)區(qū)域的DNA多態(tài)性。RAPD：引物堿基長度為10， APPCR：引物堿基長度為2030。參考文獻(xiàn)1. DNA分子標(biāo)記技術(shù)在植物研究中的應(yīng)用/周延清編著. - 化學(xué)工業(yè)出版社,2005. - (58.8058/7713)2. 曹暉,劉玉萍，邵鵬柱等. DNA 分子指紋圖譜與測序技術(shù)在中藥品質(zhì)研究中的現(xiàn)狀及展望,中國中藥雜志, 1998(23) 11:6433. 曹暉,劉玉萍.DNA 分析技術(shù)在中藥質(zhì)量研究中的應(yīng)用,中藥新藥