手性化合物色譜優(yōu)化課件

1、使用纖維素三（3 - 氯-4 - 甲基苯基氨基甲酸酯）作為手性選擇劑和 極性有機流動相來優(yōu)化手性酸性化合物對映體分離的液相色譜 生物化工 丁達繁 3140221三、材料和方法3一、摘要1二、引言2四、結果與討論4五、結論56目錄一、摘要 利用含氯纖維素手性固定相和極性有機流動相來行優(yōu)化手性酸性和兩性藥物對映體的液相色譜。流動相的主要溶劑是乙腈，將溫度固定在25C，固定相以纖維素三（3 - 氯-4 - 甲基苯基氨基甲酸酯）作為手性選擇器。在篩選步驟中酸性和堿性添加劑的性質(zhì)和濃度都發(fā)現(xiàn)對保留，選擇性和分離有顯著影響。乙酸（ACA）被選定為酸性添加劑，因為它可比三氟乙酸（TFA）和甲酸（FA）使更多

2、的酸性化合物的對映體分離。測試的三種基本的堿性添加劑中，二乙胺（DEA）比丁胺（BUA）和三乙胺（TEA），對于對映體分離和選擇性，有更好的效果。優(yōu)化是采用面心中心復合設計有兩個影響因素，即濃度為（0.1-0.3）的乙酸和濃度為（0.01-0.1）的二乙胺（DEA）。二、引言 手性許多影響都與手性藥物的對映體可以具有不同的藥理活性有關。手性藥物的對映體的生產(chǎn)以及對映體的組成的控制和判定，已經(jīng)成為制藥業(yè)和監(jiān)管機構的關鍵問題。因此，許多分析和制備技術已經(jīng)開發(fā)了用于手性化合物的對映體分離。在這些技術中，液相色譜（LC）已成為這些分離的必備工具。 盡管大多數(shù)的對映體分離的可在液相色譜中的手性固定相來進

3、行，但是應當強調(diào)的是，不存在通用的手性固定相。因此，目標手性藥物的分離依賴于手性固定相（CSP）和液相色譜（LC）流動相之間適當組合的選擇。 已經(jīng)報道的文獻中，使用的多糖基的手性固定相在正相，反相或極性有機流動相模式中，并不包括酸性或堿性添加劑的流動相的重要作用。然而，這些添加劑的性質(zhì)和濃度已經(jīng)顯示出影響手性化合物的保留，選擇性和對映體分離。因此，除了使用各種手性固定相，選擇不同的酸性或堿性添加劑對對映體選擇性很大的影響，這在極性有機相中使用含有氯纖維素基的手性固定相的堿性化合物的對映體分離上已經(jīng)有所體現(xiàn)。 1、試劑和儀器 卡布洛芬，苯氧苯丙酸，氟比洛芬，酮洛芬，酮咯酸，2 - 苯基丙酸，2

4、-苯氧基丙酸、丙谷胺、吲哚洛芬， 布洛芬、氯噻酮、甲酸（FA）和乙酸（ACA）、三氟乙酸（TFA）、二乙胺（DEA）、三乙胺、丁胺（BUA）、乙腈（ACN）等 色譜系統(tǒng)等 三、材料和方法 2、解決方案 實驗所使用的流動相由乙腈，酸性添加劑（TFA，F(xiàn)A或ACA）和堿性添加劑（BUA，DEA或TEA）的合適比例（體積/體積）混合制備的。 3、色譜條件 流動相是含有酸性和堿性添加劑的乙腈以1.0 mL/ min恒定流速構成的。進樣量為20微升。分析物在240nm處進行檢測，溫度固定在25C。4.1.2乙酸濃度在流動相中的影響 假設在流動相中增加乙酸的濃度（0.050.2），將會減少分析物對映體的保

5、留。除了氯噻酮和氧氟沙星之外所有研究的12種化合物對這個假設進行了驗證（見表2）。此外，在流動相中所測試的化合物增加乙酸濃度會輕微改變對映體分離的值。然而，這種增加似乎主要是峰值效率的提高，而選擇性值幾乎不變。顯然乙酸在流動相中的濃度是考慮到在優(yōu)化步驟的一個重要因素。 4.1.3 堿性添加劑的性質(zhì)和濃度在流動相中的影響 在表3中可以看出，保留、選擇性和對映體分離的值，與含有0.2乙酸的移動相中的堿性添加劑的性質(zhì)有著重要關系。值得注意的是，除了氧氟沙星之外，含有丁胺總是獲得最高的保留值而用三乙胺的最低。圖2（B）是具有三個基本的添加劑的2 - 苯基丙酸和2 - 苯氧基丙酸的色譜圖，觀察到兩種酸性

6、化合物保留總趨勢丁胺 二乙胺 三乙胺，而這兩種化合物對映體分離和選擇性是完全不同的。 2-苯基丙酸的對映體分離受到堿性添加劑的性質(zhì)強烈地影響，在丁胺或三乙胺存在下幾乎完全喪失。與此相反，堿性添加劑的性質(zhì)對2-苯氧基丙酸的對映體分離幾乎沒有影響。 以二乙胺作為堿性添加劑的流動相中，6種化合物（非諾洛芬，布洛芬，酮咯酸，氧氟沙星，丙谷胺和2 - 苯氧基丙酸）對映體完全分離，而從氟比洛芬，吲哚洛芬，酮洛芬和2-苯基丙酸是部分對映體分離。相反，用三乙胺作堿性添加劑時只有四個手性酸性化合物（氧氟沙星，酮咯酸，丙谷胺和2 - 苯氧基丙酸）完全分離。所以，優(yōu)化步驟中二乙胺被選定為堿性添加劑。4.2優(yōu)化 在流

7、動相中酸性和堿性添加劑的的比例對用3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯作為手性固定相的酸性化合物的對映體分離和選擇性有顯著影響。這些化合物的對映體分離優(yōu)化，進行了兩個定量因素，即在流動相中，乙酸和二乙胺比例。4.2.1多元方法 所選的定量影響因素進行優(yōu)化，使用面心的中心復合設計。選擇三個層次用來估計為每一個因素二次影響的必要性。二次回歸模型應用于以觀察除了主要的影響外的可能二次和互動影響.該模型由下面的二階多項式方程表示： 其中y是響應對映體分離或選擇性;1和2（系數(shù)為線性的影響），11和22（系數(shù)為二次影響），12（系數(shù)的交互影響），0（截距）和（誤差項）;X1和X2是兩個因素（分別是乙酸和二乙胺

8、在流動相中的比例）。 合適模型的質(zhì)量系數(shù)測定（R2）的評估，它的分數(shù)反應的變化由模型預測的。R2中得到的所有值均在0.85-0.99范圍，這表明預測是符合的。部分對映體分離的變化，可以由模型預測的，即Q2，始終保持高于0.69以上，這意味著對映體分離的變異性的至少有69可以被預測的。 氟比洛芬的最大分離可以用比例最高乙酸和近0.07二乙胺獲得（圖3A)。布洛芬響應面的分析結果是最大對映體分離值可通過乙酸的最低比例和接近0.07二乙胺得到（圖3B）。流動相的兩種添加劑的最低比例來得到氧氟沙星的最佳對映體分（圖3C)。 在最佳的色譜條件下九個測試的化合物中得到的保留和對映體分離（表4），實驗中觀察到的分離值與那些從模型預測的進行比較，在大多數(shù)情況下還是比較接近的。 在表4中，研究的九