五倍子中多酚類物質(zhì)對DPPH自由基清除作用的電子自旋共振研究

1、五倍子中多酚類物質(zhì)對DPPH自由基去除作用的電子自旋共振研究【摘要】目的研究五倍子提取物對活性氧自由基的去除作用。方法采用電子自旋共振ESR和自旋捕集技術(shù)直接測定不同濃度的五倍子兩種方法提取物對DPPH自由基的去除作用。結(jié)果五倍子兩種提取物具有良好的去除DPPH自由基的作用,在實(shí)驗(yàn)條件下,五倍子水提取物去除DPPH自由基的I50為0.4147g/L，五倍子醇提取物去除DPPH自由基的I50為0.8586g/L。結(jié)論五倍子中多酚類物質(zhì)具有較強(qiáng)的抗氧化活性?！娟P(guān)鍵詞】五倍子電子自旋共振技術(shù)DPPH自由基抗氧化活性Abstrat：bjetiveTstudytheatinfplyphenlsfrGal

2、lahinensisnsavengingDPPHradial.ethdsUsingeletrnspinresnane(ESR)andspintrappingtehnlgy,thesavengingeffetsfdifferentnentratinsftextratsfGallahinensisnDPPHfreeradialerestudied.ResultsTheresultsshedthattextratsfGallahinensishadstrngsavengingeffetnDPPHfreeradial.TheI50fsavengingDPPHradialftheaterextratan

3、dethanlextratfrGallahinensisere0.4147g/Land0.8586g/Lrespetively.nlusinTheplyphenlsfrGallahinensishavestrngantixidantativity.Keyrds：Gallahinensis;Eletrnspinresnane(ESR);DPPHfreeradial;Antixidantativity五倍子為漆樹科漆樹屬鹽膚木Rhushinensisill等葉或葉柄因受五倍子蚜蟲的刺傷而成的囊狀蟲癭，具有斂肺降火、澀腸止瀉、固精縮尿、止汗、止血、解毒、斂瘡等多種臨床成效1。五倍子中的主要有效成分為

4、鞣質(zhì)以及沒食子酸等成分，具有較多鄰位酚羥基的構(gòu)造。電子自旋共振(eletrnspinresnane,ESR)又稱電子順磁共振(eletrnparaagnetiresnane,EPR)是研究自由基的最直接和最有效的方法。所謂電子自旋捕集技術(shù)2就是為了檢測和識(shí)別短壽命自由基如氧自由基，需將一不飽和的抗磁性物質(zhì)自由基捕集劑參加反響體系，捕捉瞬時(shí)自由基，生成壽命較長的自由基，通過電子自旋共振儀來檢測。目前，關(guān)于五倍子去除自由基的研究尚無報(bào)道。故本實(shí)驗(yàn)采用電子自旋共振法ESR和自旋捕集技術(shù)對五倍子的抗氧化作用進(jìn)展研究3，討論了五倍子兩種提取物去除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的才能，旨在為利用

5、五倍子開發(fā)天然的、高效低毒的抗氧化成效因子提供根據(jù)。1儀器與材料1.1儀器JEX-RE3XESRspetr-phteter(日本JEL公司)，KQ5200超聲波清洗器昆山市超聲儀器，RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠，F(xiàn)A2022電子分析天平上海恒平科學(xué)儀器。1.2材料五倍子購自佳木斯市金天藥店，由本院生藥學(xué)教研室劉娟教授鑒定為漆樹科植物鹽膚木Rhushinesensisill五倍子正品。DPPH(1,1-diphenyl-2-piryllhydrazyl)為色譜純，ESR檢測無雜質(zhì)信號(hào)，標(biāo)準(zhǔn)品購自日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社。其余試劑均為分析純。2方法2.1供試樣品溶液的配制取五倍子枯燥

6、粉末50g，加水進(jìn)展超聲提??；取五倍子枯燥粉末50g，加95%乙醇超聲提齲各樣品提取液減壓揮干溶劑，枯燥后待用。取各樣品提取物適量，精細(xì)稱定，加甲醇溶解后，配成濃度為0.01，0.1，1.0，10.0g/L的溶液。2.2測試參數(shù)條件X波段，磁場范圍：336.010.0T，微波功率，5，頻率，9.45GHz，調(diào)制幅度，100kHz，響應(yīng)時(shí)間，0.03s，掃描時(shí)間：1in，室溫檢測。2.3DPPH自由基的檢測方法2.3.1空白對照組的測定取甲醇溶液200l，參加DPPH100l劇烈混合后，吸入石英毛細(xì)管，放入諧振腔，1in后在上述測定參數(shù)條件下測定DPPH自由基，記錄譜圖。2.3.2樣品溶液的測定

7、取五倍子水提物不同濃度的樣品溶液200l，分別參加DPPH100l劇烈混合后，按照上述方法進(jìn)展測定DPPH自由基ESR信號(hào)；五倍子醇提物不同濃度的樣品溶液亦按照同樣方法測定DPPH自由基ESR信號(hào)；記錄譜圖。3結(jié)果3.1ESR指標(biāo)的測定DPPH是一個(gè)相對穩(wěn)定的自由基，甲醇中測得的DPPH自由基的ESR圖譜中，以第三峰高表示DPPH自由基的濃度?？寡趸瘎┑膮⒓又粫?huì)使峰的高度降低，不會(huì)改變形狀，而且隨著五倍子水提物和醇提物的濃度增加,其ESR信號(hào)強(qiáng)度遞減。見圖1。去除率=(HDPPH/Hn)ntrl-(HDPPH/Hn)saple(HDPPH/Hn)ntrl100%3.2五倍子多酚類物質(zhì)對DPPH

8、的去除作用通過記錄的譜圖，測量出DPPH和n的峰高,處理數(shù)據(jù)后，可以看出當(dāng)參加一定濃度范圍的五倍子水提物和醇提物后，DPPH自由基信號(hào)明顯減弱，去除率隨著濃度的增加而進(jìn)步，說明五倍子多酚類物質(zhì)對DPPH自由基有顯著的去除作用，且呈明顯的量-效關(guān)系。見圖2。從圖1中還可以看出五倍子兩種提取物對DPPH具有不同的去除效果。五倍子醇提物的去除才能相對較弱，表現(xiàn)為在低濃度范圍內(nèi)去除率上升得比擬快，而在高濃度范圍內(nèi)去除率上升得較為緩慢，10.0g/L去除率可達(dá)94.24%；五倍子水提物去除才能相對較強(qiáng)，特別是在低濃度時(shí)表現(xiàn)明顯，在濃度為1.0g/L時(shí)去除率就已到達(dá)70.82%，在10.0g/L去除率已到

9、達(dá)100%。經(jīng)計(jì)算五倍子水提取物去除DPPH自由基的I50去除率到達(dá)50%時(shí)的樣品濃度為0.4147g/L，五倍子醇提取物去除DPPH自由基的I50為0.8586g/L。4討論自由基學(xué)說認(rèn)為，人體內(nèi)雖不斷產(chǎn)生自由基，但又不斷被自身的一套有效機(jī)制所去除，而一旦體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多或去除才能下降時(shí),就會(huì)導(dǎo)致各種炎癥、臟器損傷、腫瘤、衰老等一系列病變，因此，抗氧化劑的研究越來越受到高度的重視。但由于使用的合成抗氧化劑多有不良反響，挑選能防御自由基損害的天然來源的抗氧化劑是目前研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，五倍子水提取物和醇提取物對活性氧自由基均有很好的去除作用，而且五倍子水提取物的效果明顯優(yōu)于醇提取物，因抗氧化活性與其構(gòu)造有關(guān)。五倍子中的主要有效成分為鞣質(zhì)，我國藥典上收載的五倍子鞣質(zhì)，稱為鞣酸t(yī)anniaid，又叫單寧。它是倍酰葡萄糖的混合物，屬水解鞣質(zhì)。五倍子中鞣質(zhì)以及沒食子酸等成分具有較多鄰位酚羥基的構(gòu)造，通過作為氫供體釋放出氫與環(huán)境中的自由基結(jié)合，終止自由基引發(fā)的鏈鎖反響，從而阻止氧化過程的繼續(xù)傳遞和進(jìn)展，因此在生物體內(nèi)具有較強(qiáng)的去除氧自由基的作用，從而產(chǎn)生了抗氧化的作用。五倍子是一種前景非?？春?/p>