原位大鼠腎臟移植模型技術(shù)的改進(jìn)

1、原位大鼠腎臟移植模型技術(shù)的改進(jìn)【摘要】目的：為進(jìn)步大鼠腎移植模型中供體腎臟的利用率，對(duì)供腎切娶大鼠輸尿管吻合方法進(jìn)展改進(jìn)，建立從同一供體切取雙側(cè)腎臟分別進(jìn)展原位腎臟移植的方法。方法：分別切取供體的左、右側(cè)腎臟，經(jīng)腎臟動(dòng)脈進(jìn)展灌注；供腎的腎動(dòng)脈、靜脈分別與受體左側(cè)的腎臟動(dòng)、靜脈血管端端吻合，并應(yīng)用暫時(shí)性內(nèi)支架輔助的方法進(jìn)展供腎輸尿管與受體輸尿管上段直接吻合，同時(shí)切除受體右側(cè)腎臟。比擬左、右側(cè)供腎受體成活率及術(shù)后并發(fā)癥，并通過(guò)病理切片評(píng)價(jià)移植物的組織學(xué)變化。結(jié)果：從30個(gè)供體大鼠切取52只腎臟，分別施行左、右側(cè)供腎腎臟移植28、24例。與常規(guī)單側(cè)供腎相比節(jié)約大鼠42%。左側(cè)供腎組5d動(dòng)物存活率89

2、.3%(25/28)，右側(cè)供腎組5d動(dòng)物存活率91.6%(22/24)，采用左右側(cè)供腎對(duì)受體存活率、移植物的組織學(xué)改變無(wú)明顯影響。結(jié)論：這種方法能節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，減少供體的數(shù)量，符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的經(jīng)濟(jì)和倫理學(xué)要求?！娟P(guān)鍵詞】腎臟移顯微外科技術(shù)供腎切取大鼠1材料與方法1.1材料1.2麻醉方法10%鹽酸氯胺酮注射液，15g(100g)-1，肌肉注射麻醉，術(shù)中注意保溫。1.3外科技術(shù)從供體切取雙側(cè)腎臟，放入4腎臟保存液。左側(cè)腎臟植入第1個(gè)受體，原位端端縫合腎臟動(dòng)、靜脈，供腎輸尿管與受體輸尿管上端連續(xù)縫合6針。右側(cè)腎臟翻轉(zhuǎn)180后植入第2個(gè)受體左側(cè)腎窩，與受體的動(dòng)脈、靜脈、輸尿管端端吻合。1.3.1供體手術(shù)

3、取十字切口進(jìn)腹，濕鹽水紗布包裹腸管。仔細(xì)別離供體右側(cè)和左側(cè)腎臟的動(dòng)、靜脈血管，分別結(jié)扎腎上腺動(dòng)靜脈，并使腎臟的動(dòng)、靜脈血管骨骼化，利多卡因注射液滴于外表防止動(dòng)脈痙攣。游離腎臟和輸尿管，輸尿管在腎臟下極處離斷，保存輸尿管周?chē)闹窘M織。在切取腎臟之前15in，通過(guò)尾靜脈注射肝素100U和甲磺酸酚妥拉明注射液1gkg-15。在根部結(jié)扎左腎動(dòng)靜脈并離斷，提起腎動(dòng)脈外膜，插入4號(hào)灌注針進(jìn)展灌注，灌注液為4腎臟離體灌注保存液約2l上海長(zhǎng)征醫(yī)院改進(jìn)HA6。同法切取灌注右側(cè)腎臟，在根部離斷右腎動(dòng)脈，帶局部腔靜脈壁剪取右腎靜脈，保存右輸尿管約2。兩側(cè)腎臟分別放入4HA腎臟灌注保存液中備用。切取植入過(guò)程如圖1示

4、。1.3.2受體準(zhǔn)備劍突下正中切口進(jìn)腹，濕鹽水紗布包裹腸管牽向右側(cè)。仔細(xì)別離受體左側(cè)腎臟的動(dòng)、靜脈，分別結(jié)扎腎上腺動(dòng)靜脈。游離腎臟，在靠近腹主動(dòng)脈、腔靜脈處用顯微血管夾阻斷左側(cè)腎臟的動(dòng)、靜脈血管，盡量靠近腎門(mén)處離斷左側(cè)腎臟的動(dòng)、靜脈血管和輸尿管。冰肝素鹽水沖洗動(dòng)、靜脈管腔。1.3.3左側(cè)腎臟原位移植圖2左側(cè)供腎置于受體的左側(cè)后腹壁腎窩，冰鹽水紗布?jí)|起并覆蓋，連續(xù)滴注冰鹽水保持低溫，先吻合動(dòng)脈，直徑一般0.5到0.8，牽開(kāi)外膜修齊動(dòng)脈的末端。端端吻合動(dòng)脈89針，兩定點(diǎn)縫合，采用連續(xù)縫合連續(xù)打結(jié)的方法，一般前壁3針后壁3針。靜脈的直徑11.5，壁薄而嬌嫩。180兩定點(diǎn)固定，端端連續(xù)縫合，開(kāi)放血流后

5、再收緊打結(jié)防止形成狹窄。先開(kāi)放靜脈再開(kāi)放動(dòng)脈。輸尿管的吻合：吻合口靠近受體輸尿管上端，一般需要6針連續(xù)縫合，2針對(duì)端全層牽引線，前后壁分別2針或1針。通過(guò)輸尿管的蠕動(dòng)波、尿液通過(guò)吻合口來(lái)判斷是否漏尿。1.3.4右側(cè)腎臟移植圖3右側(cè)供腎圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)180，其凸起的腹側(cè)面靠近左側(cè)腎窩后腹壁。因翻轉(zhuǎn)后原右側(cè)腎靜脈靠近背側(cè)，一般先吻合靜脈再吻合動(dòng)脈，方法同左側(cè)供腎。右側(cè)供腎的冷缺血時(shí)間120in。腎靜脈、腎動(dòng)脈、輸尿管吻合方法同左側(cè)供腎。1.3.5術(shù)后處理縫合移植腎臟上下極的包膜脂肪于腹后壁，以固定移植腎臟，防止血管蒂改變。別離受體右側(cè)的腎臟血管，結(jié)扎切斷，同期切除右側(cè)腎臟。溫鹽水復(fù)溫，分層縫合關(guān)腹

6、，將大鼠置于加熱墊上復(fù)溫，清醒后喂5%葡萄糖生理鹽水，恢復(fù)行走后放入鼠籠，正常喂養(yǎng)，定時(shí)觀察，防止術(shù)后尿潴留等，術(shù)后存活5d以上表示模型成功。1.4觀察指標(biāo)記錄術(shù)中兩組的熱缺血時(shí)間，觀察術(shù)后受體的存活情況，對(duì)死亡的受體進(jìn)展顯微鏡尸體檢驗(yàn)，記錄死亡原因。術(shù)后10d取移植腎，常規(guī)固定，HE染色，觀察大鼠的移植腎的病理學(xué)變化。2結(jié)果從30個(gè)供體大鼠切取52只腎臟，分別施行左、右側(cè)供腎原位腎臟移植28、24例。左側(cè)供腎的熱缺血時(shí)間(27.03.5)in，右側(cè)供腎的熱缺血時(shí)間(29.03.0)in，兩組移植腎的熱缺血時(shí)間無(wú)明顯差異。左側(cè)供腎組發(fā)生腎動(dòng)脈血栓、尿瘺、輸尿管梗阻各1例，5d受體存活率為89.

7、3%(25/28)；右側(cè)供腎組發(fā)生腎動(dòng)脈血栓、輸尿管梗阻各1例，5d受體存活率為91.6%(22/24)。受體存活率兩組比擬差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。左右側(cè)供腎的組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)明顯腎小管壞死的改變。3討論建立移植動(dòng)物模型是進(jìn)展器官移植根底研究的必要條件。大動(dòng)物因價(jià)格昂貴、本錢(qián)高，遺傳背景復(fù)雜，而不符合選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化的要求。嚙齒類(lèi)動(dòng)物的器官移植模型在移植生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究中占有重要地位7，對(duì)器官移植而言，大多數(shù)根本原那么都是在嚙齒類(lèi)動(dòng)物模型上建立起來(lái)的。大鼠繁殖快，價(jià)格廉價(jià)，喂養(yǎng)方便，而且大鼠對(duì)手術(shù)無(wú)菌的要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于大動(dòng)物8。目前已培育出了多種品系，如近交系、突變系、雜交群動(dòng)物、封閉群動(dòng)物等，可滿足

8、不同層次的研究要求；純系動(dòng)物的特性有助于設(shè)計(jì)最精細(xì)的實(shí)驗(yàn)，可用最少的動(dòng)物數(shù)而保證得到足夠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。為了更好、更節(jié)省地應(yīng)用顯微外科技術(shù)制造大鼠腎臟移植模型，我們建立了從同一供體切取雙側(cè)腎臟分別進(jìn)展大鼠腎臟移植的方法。在Grau等9研究的根底上，從供體切取雙側(cè)腎臟分別進(jìn)展灌注，左側(cè)腎臟植入第1個(gè)受體，原位端端縫合腎臟動(dòng)、靜脈，供體輸尿管與受體輸尿管連續(xù)縫合。右側(cè)腎臟翻轉(zhuǎn)180后植入第2個(gè)受體左側(cè)腎窩，均采用端端吻合的方法縫合動(dòng)脈、靜脈、輸尿管，因腎蒂的解剖關(guān)系改變，翻轉(zhuǎn)后右腎靜脈靠近腹側(cè)面，一般先吻合靜脈再吻合動(dòng)脈，與左側(cè)腎臟的植入有所不同。在切取供體的雙側(cè)腎臟時(shí)游離腎臟動(dòng)靜脈血管是關(guān)鍵，尤其是

9、右側(cè)的腎上腺動(dòng)脈易引起出血，預(yù)先顯微鏡下別離于近端結(jié)扎即可控制。離斷右側(cè)腎靜脈時(shí)應(yīng)盡量靠近下腔靜脈，呈弧形剪開(kāi)，以利吻合。左側(cè)供腎和右側(cè)供腎對(duì)植入手術(shù)難易程度沒(méi)有影響，因右側(cè)腎臟靜脈帶有局部腔靜脈壁，進(jìn)展右側(cè)的供腎靜脈和左側(cè)的受體腎靜脈端端吻合時(shí)較容易進(jìn)展。供腎植入后，只有切除受體的對(duì)側(cè)原有腎臟才能更好地觀察移植腎的功能。一期同時(shí)切除對(duì)側(cè)腎臟在移植腎不能即時(shí)充分地發(fā)揮功能將導(dǎo)致大鼠很快死亡18；再次手術(shù)切除受體的對(duì)側(cè)原有腎臟那么對(duì)大鼠造成屢次創(chuàng)傷。我們體會(huì)，在保證供腎的灌注質(zhì)量、控制熱缺血時(shí)間在30in以內(nèi)、防止手術(shù)出血的情況下并不需要二次手術(shù)切除受體的對(duì)側(cè)腎臟。與常規(guī)切取一側(cè)腎臟相比擬，本方法的優(yōu)點(diǎn)顯而易見(jiàn)，可以減少供體動(dòng)物的數(shù)量約42%22/52，符合動(dòng)物倫理學(xué)、經(jīng)濟(jì)學(xué)原那么，節(jié)省時(shí)間19。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，左側(cè)供腎和右側(cè)供腎在動(dòng)物存活率、組織學(xué)改變等并無(wú)差異。移植腎冷缺血期應(yīng)保持04的