實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色詳解演示文稿

1、實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色詳解演示文稿第一頁，共二十一頁。優(yōu)選實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色第二頁，共二十一頁。用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染用碘溶液進(jìn)行媒染，其作用是提高染料和細(xì) 胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。在經(jīng)歷脫色后 仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細(xì) 菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì) 胞呈無色。用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對 涂片進(jìn)行復(fù)染。例如沙黃，它使原來無色的 革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革 蘭氏陽性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色第三頁，共二十一頁。第四頁，共二十一頁。實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色第五頁，共二十一頁。細(xì)

2、菌的簡單染色和革蘭氏染色 一 目的要求 二 基本原理 三 實(shí)驗(yàn)材料 四 無菌操作過程 五 操作步驟 六 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 七 思考題第六頁，共二十一頁。一 目的要求1 學(xué)習(xí)制染色片技術(shù)，學(xué)習(xí)簡單染色革蘭氏染色原理，理解著色機(jī)理。學(xué)習(xí)并掌握無菌操作的技術(shù)。3 掌握簡單染色革蘭氏染色的方法，并能正確染色4 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法。第七頁，共二十一頁。（一）細(xì)菌的簡單染色原理（二）革蘭氏染色基本原理二 基本原理第八頁，共二十一頁。細(xì)菌細(xì)胞微小，且含水量較多，在普通光鏡下表現(xiàn)為無色透明，不易觀察，所以必須進(jìn)行染色處理，使細(xì)胞著色，便于觀察。簡單染色是使用單一染料染色，可用于觀察細(xì)菌形態(tài)、大小、及排列方式.染

3、色前一般要將細(xì)胞固定，其目的是殺死菌體并使之粘附于玻片上，還可以增強(qiáng)菌體的著色能力。固定有加熱法和化學(xué)法兩種，無論采用何種方法均應(yīng)維持細(xì)胞原有形態(tài)。 （一）細(xì)菌的簡單染色原理第九頁，共二十一頁。（二）革蘭氏染色基本原理 革蘭氏染色是用于細(xì)菌鑒別的一種重要染色方法。它是根據(jù)革蘭氏陽性細(xì)菌、陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、組成的不同而使用一系列的染色處理使之差別顯色。其染色方法是先將細(xì)菌分別用結(jié)晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脫色，再經(jīng)復(fù)染劑復(fù)染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細(xì)菌；被染成紫色的是革蘭氏陽性細(xì)菌。第十頁，共二十一頁。占細(xì)胞壁的10%占細(xì)胞壁的90%第十一頁，共二十一頁。第十二頁，共二十一頁。1、細(xì)胞壁

4、 革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁第十三頁，共二十一頁。革蘭氏染色與細(xì)胞壁：革蘭氏陽性陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁對比第十四頁，共二十一頁。革蘭氏染色原理：第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)。第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)。G+ 菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。G菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，蕃紅復(fù)染后呈紅色。第十五頁，共二十一頁。1234？第十六頁，共二十一頁。三 實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌（24 h 培養(yǎng)）斜面菌種枯草桿菌（16 h 培養(yǎng)）斜面菌種第十七頁，共二十一頁。四 無菌操作過程無菌操作：不讓除我們接種的微生物以外 其它微生物侵入的技術(shù)。第十八頁，共二十一頁。第十九頁，共二十一頁。（一） 簡單染色操作步驟1涂片：載玻片、無菌水、斜面菌種、無菌操作、均勻的薄層2干燥：3固定：加熱固定4染色：結(jié)晶紫染1min或蕃紅染2-3min或石炭酸復(fù)