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文檔簡介
1、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(一) 靛基質(zhì)(吲哚)試驗1、原理:某些細菌含有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基質(zhì)(吲哚)。吲哚與對二甲氨基苯甲醛結(jié)合,可形成紅色化合物,即玫瑰吲哚,以此鑒別細菌。 應(yīng)用:主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。2、試驗方法所用試劑:(1)柯凡克(Kovacs)試劑或(2)歐-波試劑將待檢菌小量接種于培養(yǎng)基中,于361 培養(yǎng)2448h時后,加入柯凡克試劑數(shù)滴,輕搖試管,呈紅色者為陽性?;蜓卦嚬鼙诰徛尤霘W-波試劑約0.5ml覆蓋液面,兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者,為陽性反應(yīng),無紅色者為陰性反應(yīng)。3、結(jié)果觀察與記錄:呈現(xiàn)玫瑰紅色,為陽性反應(yīng),記+無紅色者,為陰性反應(yīng),記-(二)
2、硫化氫(H2S)試驗1、原理:某些細菌可分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸或含硫化合物,產(chǎn)生硫化氫,硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽可生成黑色沉淀物PbS或FeS,以此鑒別細菌2、試驗方法:挑取待檢菌,用穿刺接種法接種于三糖鐵培養(yǎng)基上,于361培養(yǎng)2448h,觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察與記錄培養(yǎng)基底部呈黑色,為陽性,記+培養(yǎng)基底部無黑色,為陰性,記-應(yīng)用:用于腸道桿菌鑒定試驗,如:沙門氏菌屬、愛德華菌屬、枸櫞酸桿菌屬及變形桿菌等為陽性;腸道桿菌中其他菌屬為陰性,沙門菌屬中的甲型副傷寒沙門菌也為陰性。(三) 尿素酶試驗1、原理:某些細菌能產(chǎn)生尿素酶,將尿素分解產(chǎn)生氨,氨使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑呈粉紅色,培養(yǎng)
3、基由黃色變?yōu)榧t色,為陽性。以此鑒別細菌。應(yīng)用:主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌尿素酶陽性,雷氏普羅威登斯菌和摩氏摩根菌陽性,斯氏和產(chǎn)堿普羅威登斯菌陰性。2、試驗方法:挑取大量培養(yǎng)1824h的待試菌,濃密涂布接種于尿素瓊脂斜面上,不要到達底部,留底部作變色對照。培養(yǎng)2、4和24h分別觀察一次結(jié)果,培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色為陽性,顏色不變者為陰性。如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天,作最終判定。3、結(jié)果觀察與記錄:培養(yǎng)基變呈粉紅色,為陽性,記 +培養(yǎng)基顏色不變,為陰性,記 -(四) 氨基酸脫羧酶試驗1、原理:某些細菌能產(chǎn)生氨基酸脫羧酶, 可使賴氨酸、鳥氨酸生產(chǎn)脫羧作用, 生成胺類物質(zhì)和C
4、O2。胺類物質(zhì)使培養(yǎng)基呈堿性變紫色,為陽性, 如呈黃色為陰性,以此鑒別細菌。2、試驗方法:取待檢菌,分別接種于含有氨基酸的培養(yǎng)基內(nèi)和不含氨基酸的對照培養(yǎng)基內(nèi),在361 培養(yǎng)14天,每天觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察與記錄:試驗管呈紫色,對照管呈黃色,為陽性,記 +試驗管、對照管都呈黃色,為陰性,記 -。陽性反應(yīng)試驗管顏色變化過程:紫色黃色紫色原理:對照管呈黃色,說明有細菌生長。在培養(yǎng)的早期(1012h),細菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使培養(yǎng)液pH下降,指示劑溴甲酚紫由紫色變?yōu)辄S色,以后由于氨基酸脫羧生成胺,pH又回升至堿性,指示劑顯紫色。應(yīng)用:沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外,其余沙門菌的鳥氨酸和賴氨酸脫羧酶試劑均為
5、陽性。志賀菌除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌均陽性。故可作為腸桿菌科細菌鑒定的重要方法。此外,對鏈球菌和弧菌科細菌的鑒定也有重要價值。(五) 苯丙氨酸脫氨酶試驗1、原理:某些細菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶,使苯丙氨酸脫去氨基,形成苯丙酮酸,苯丙酮酸與氯化鐵作用生成綠色化合物,以此鑒別細菌。2、試驗方法:從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,接種于苯丙氨酸培養(yǎng)基上,在361 培養(yǎng)1824h后,加入氯化鐵溶液45滴,轉(zhuǎn)動試管,使試劑與菌苔表面充分接觸,立即觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察與記錄試驗管立即出現(xiàn)綠色,為陽性,記 +無色為陰性,記 -。應(yīng)用:本試驗特異性較高,主要用于腸桿菌科細菌鑒定。變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬細菌均為強陽性,腸桿菌科中其他細菌均為陰性。(六) 明膠液化試驗1、原理:有些細菌具有明膠酶(亦稱類蛋白水解酶),能將明膠先水解為多肽,又進一步將多肽水解為氨基酸,明膠失去凝膠性質(zhì),使培養(yǎng)基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)。2、試驗方法:挑取培養(yǎng)1824h的待試菌,以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度。于2022培養(yǎng)714天。明膠高層亦可培
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