標(biāo)準(zhǔn)DB37T 3629-2019 飼料中氟蟲腈的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法規(guī)范

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液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法2019-07-23發(fā)布2019-08-23實(shí)施FORMTEXT山東省市場監(jiān)督管理局???發(fā)布DB37/T3629—2019前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13原理 14試劑或材料 15儀器設(shè)備 26樣品 27試驗(yàn)步驟 27.1提取 27.2凈化 27.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備 27.4儀器測定 28試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 49精密度 4附錄A（資料性附錄）氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜 5前??言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并監(jiān)督實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所，青島市華測檢測技術(shù)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張蕓、劉濤、劉雪芹、孫延軍、莫貞峰、李斌、李俊玲。飼料中氟蟲腈的測定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中氟蟲腈的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料和植物源飼料原料中氟蟲腈的測定。本標(biāo)準(zhǔn)氟蟲腈的檢出限為0.002mg/kg，定量限為0.005mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備原理樣品用乙腈提取，經(jīng)C18固相萃取柱、液液分配凈化后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。水：GB/T6682，一級。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。乙酸銨：色譜純。甲酸：色譜純。80%乙腈水溶液：將80mL乙腈與20mL水混合均勻。80%甲醇水溶液：將80mL甲醇與20mL水混合均勻。0.1%甲酸水溶液（含4mmol/L乙酸銨）：稱取0.308g乙酸銨于適量水中，準(zhǔn)確加入甲酸1mL，用水定容至1000mL。氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/mL）：稱取氟蟲腈對照品（CAS：120068-37-3，純度不低于98.7%）10mg(準(zhǔn)確至0.01mg)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇(4.2)溶解定容。-18℃避光保存，有效期為1年。氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)工作液Ⅰ(100μg/mL)：準(zhǔn)確移取氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.8）1mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容。2～8℃保存，有效期為1個(gè)月。氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)工作液Ⅱ(1μg/mL)：準(zhǔn)確移取氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)工作液Ⅰ（4.9）0.1mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容。2～8℃保存，有效期為1個(gè)月。C18固相萃取柱：1000mg/6mL，或性能相當(dāng)者。微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)系。儀器設(shè)備液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量0.0001g和0.01mg。旋渦混合器。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。固相萃取裝置。超聲波振蕩器。氮吹儀。樣品按GB/T20195制備樣品，至少200g，粉碎過0.42mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中避光保存?zhèn)溆?。試?yàn)步驟提取平行做兩份試驗(yàn)。稱2g（準(zhǔn)確至0.01g）樣品于50mL離心管，準(zhǔn)確加入25mL乙腈(4.3)，振蕩提取20min，4500r/min離心5min，取上層乙腈2.5mL于15mL的離心管，加入0.5mL水，渦旋混勻待用。凈化C18固相萃取柱分別用6mL乙腈和6mL水活化，接收加載液，于50mL離心管中，近自然滴干時(shí)，再加入12mL80%乙腈水(4.6)，并同時(shí)接收于上述離心管中，加入約1.5gNaCl使上述溶液飽和，振蕩，4500r/min離心5min，取上層乙腈層濃縮至干。準(zhǔn)確加入4mL80%甲醇水(4.7)溶液定容，過0.22μm濾膜，待測。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備準(zhǔn)確量取適量標(biāo)準(zhǔn)工作液，用80%甲醇水溶液(4.7)稀釋成濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、5.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配，供液相色譜-串級質(zhì)譜儀測定。對于基質(zhì)效應(yīng)較大的樣品，采用基質(zhì)空白溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量。儀器測定液相色譜參考條件色譜柱：BEHC18柱，長50mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當(dāng)者。柱溫：40℃。流速：0.3mL/min。進(jìn)樣量：1μL。流動(dòng)相：A為甲醇（4.2）；B為0.1%甲酸水溶液（4.8），梯度洗脫條件見表1。梯度洗脫程序表時(shí)間，min流速,mL/minA，%B，%1initial0.3109021.50.395533.50.395543.510.31090質(zhì)譜參考條件離子化模式及掃描方式：電噴霧負(fù)離子掃描（ESI-）。檢測方式：多反應(yīng)檢測（MRM）。氣簾氣(CurtainGAS)35Psi。碰撞氣(CollisionGAS)8Psi。噴霧電壓(IonSprayVoltage)-2500V。霧化源溫度(Temperature)400℃。霧化氣(IonSourceGAS1)55Psi。輔助加熱氣（IonSourceGAS2)55Psi。定性離子對、定量離子對及電壓、碰撞能量見表2。質(zhì)譜參數(shù)名稱離子對（m/z）DP(V)CE（V）氟蟲腈定量離子434.9＞329.9-65-24定性離子434.9＞249.9-65-36定性測定在相同試驗(yàn)條件下，待測物在樣品中的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作液中的保留時(shí)間相對偏差在±2.5%之內(nèi)，并且色譜圖中定性離子對的相對豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)工作液中相應(yīng)定性離子對的相對豐度進(jìn)行比較，若相對偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷為樣品中存在對應(yīng)的待測物。定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許誤差相對離子豐度（%）＞50＞20～50＞10～20≤10允許的相對偏差（%）±20±25±30±50定量測定在儀器最佳工作條件下，將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（從低濃度到高濃度）和試樣溶液上機(jī)測定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液中氟蟲腈定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)，氟蟲腈濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，對樣品進(jìn)行定量。試樣溶液中氟蟲腈的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線測定的線性范圍內(nèi)。超出線性范圍的則用80%的甲醇水溶液（4.7）適當(dāng)稀釋后再進(jìn)樣分析。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)工作液特征離子的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖參見附錄A。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中氟蟲腈的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，多點(diǎn)校準(zhǔn)按式(1)計(jì)算： (SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1)式中：C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中氟蟲腈的濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——上機(jī)液定容體積，單位為毫升（mL）；V1——提取液體積，單位為毫升（mL）；V2——分取體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；n——上機(jī)測定的試樣溶液超出線性范圍后，進(jìn)一步稀釋