動物細胞工程hao課件

人耳鼠“人耳鼠”再出風頭

2001年，一只特別的活老鼠在北京引起轟動——這是有著一對紅眼睛的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠。值得一提的是，這只小白鼠的背上，竟長著一只幾乎與身子一般大小的“人耳”。這只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復外科主任曹誼林教授利用組織工程技術復制出來的。

在京展出的數(shù)天，盡管門票高達20元，但還是有將近20萬人，心甘情愿地掏錢一睹“人耳鼠”的風采。

“人耳鼠”是怎樣制作出來的呢？是人的耳朵基因插進老鼠的基因了嗎？不是的，這與細胞的研究有關。據(jù)“人耳鼠”的制作者曹誼林教授說，人耳是先用一種高分子化學材料聚羥基乙酸做成人耳的模型支架，然后讓細胞在這個支架上繁殖生長。等“耳朵”長好后，就在無毛鼠的背上割開一個口子，植入“人耳”并縫合。過一段時間后，“人耳”的支架會自己降解消失，于是“人耳”就“長”在老鼠的背上。人耳鼠“人耳鼠”再出風頭在京展出的數(shù)天，盡管門票高達20元思考與回憶：1、動物細胞全能性特點？

隨著細胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄。細胞核仍具有全能性。2、能否用植物組織培養(yǎng)的方法使動物細胞發(fā)育成動物個體？

不能。動物細胞和組織在體外培養(yǎng)的過程中，伴隨一定的組織分化，不管采用什么手段和培養(yǎng)條件，由于細胞的運動、變化，細胞發(fā)生結構功能變異，結果長時間的培養(yǎng)只能使單一類型的細胞保存下來，最終成了簡單的細胞培養(yǎng)。3、動物的細胞培養(yǎng)的理論依據(jù)（原理）？

細胞增殖思考與回憶：動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合單克隆抗體技術核移植動物細胞工程常用技術其它動物細胞工程的基礎動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合單克隆抗體技術核移植動物細胞工程常用專題2.2動物細胞工程2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術專題2.2動物細胞工程2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術一、動物細胞培養(yǎng)的應用和概念：1、概念：動物細胞培養(yǎng)就是從動物有機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖.2、原理：細胞增殖一、動物細胞培養(yǎng)的應用和概念：1、概念：動物細胞培養(yǎng)就是從動定義：人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。胰蛋白酶處理取出組織胚胎或幼齡動物器官組織剪碎單個細胞細胞懸液轉入培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)（貼壁生長長成單層細胞。有接觸抑制現(xiàn)象）。①原代培養(yǎng)3：過程圖示原代培養(yǎng)定義：人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。胰蛋白強調一：細胞貼壁過程■細胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁?！雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無毒、易于貼附。強調一：細胞貼壁過程■細胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細胞很快■當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。強調二：接觸抑制■當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞就會停止分裂增殖，動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液10代細胞50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細胞株細胞系遺傳物質未改變遺傳物質已改變接觸抑制動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液10代細胞50代細胞動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液10代細胞50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細胞株細胞系動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，將細胞網(wǎng)絡起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。遺傳物質未改變遺傳物質已改變接觸抑制動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液10代細胞50代細胞

定義：當原代培養(yǎng)的細胞處于接觸抑制后,用胰蛋白酶處理,使細胞從瓶壁上脫離下來,然后加入新的培養(yǎng)液,將細胞分離稀釋,并從原培養(yǎng)瓶內轉接到新的培養(yǎng)瓶內,這個過程稱傳代培養(yǎng).（分瓶培養(yǎng)的過程）②傳代培養(yǎng)定義：②傳代培養(yǎng)▲細胞株：傳代細胞一般能傳到40-50代，遺傳物質一般不會發(fā)生改變，叫細胞株。強調：細胞系、細胞株（了解即可，老課本體系）▲細胞系：傳代50代以后不能再傳下去，部分細胞遺傳物質發(fā)生了改變，能連續(xù)傳代，獲得不死性，叫細胞系?！毎辏簜鞔毎话隳軅鞯?0-50代，遺傳物質一般不會發(fā)3、總結：動物細胞培養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官配置細胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理10代細胞轉入培養(yǎng)瓶40-50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液稀釋傳代10代以內，遺傳物質不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長緩慢以至于完全停止，部分細胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？分瓶傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)特點：細胞貼壁、接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細胞獲得不死性，細胞突變，遺傳物質已經(jīng)改變，等同于癌細胞。細胞株：一般說遺傳物質未改變細胞系：遺傳物質已改變原代培養(yǎng)3、總結：動物細胞培養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官配置4.動物細胞培養(yǎng)的條件:1）無菌無毒的環(huán)境：

適宜的溫度：人和哺乳動物細胞最適溫度為36.5±0.5℃。適宜的酸堿度：PH：7.2-7.4液體合成培養(yǎng)基：（糖、氨基酸）、促生長因子、（水、無機鹽、微量元素）等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。4）氣體環(huán)境：2）營養(yǎng)：3）溫度和pH：“95％空氣+5％CO2”的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氣是細胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的PH。對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細胞造成危害。補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質4.動物細胞培養(yǎng)的條件:1）無菌無毒的環(huán)境：適宜的溫度問題3：為什么用胰蛋白酶處理？問題1：、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？因為其細胞生命力旺盛，分裂能力強，分化程度低。問題2、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？擴大細胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細胞吸收營養(yǎng)。動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞間的蛋白質和細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞。

問題4：為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶？動物細胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4，胰蛋白酶作用的適宜PH為7.2-8.4，胃蛋白酶適宜PH為2.胃蛋白酶在PH為7.2-7.4的動物細胞培養(yǎng)中無活性。問題5：用胰蛋白酶處理不會把所培養(yǎng)的細胞消化掉嗎？控制好時間！長時間處理當然會損傷細胞。問題3：為什么用胰蛋白酶處理？問題1：、為什么選用動物胚胎或問題6、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？問題7、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、無機鹽）、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體問題8、動物細胞培養(yǎng)的原理：細胞增殖。問題9、目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常在10代以內，為什么？10代以內的細胞遺傳物質不改變，保持正常二倍體核型。問題6、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何5.動物細胞培養(yǎng)技術的應用:1.蛋白質生物制品的生產(chǎn)如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2.應用于基因工程主要用于作為受體細胞3.檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性

4.細胞的生理、藥理、病理研究

如用于篩選抗癌藥物5.動物細胞培養(yǎng)技術的應用:1.蛋白質生物制品的生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較：見導學教程P31表比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞的全能性細胞增殖培養(yǎng)基性質固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖促--動物血清培養(yǎng)結果植物體細胞株、細胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細胞或細胞分泌蛋白取材植物幼嫩部分或花藥胚胎或幼齡動物的器官或組織其他條件無菌無毒，適宜條件無菌無毒，適宜條件植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較：見導學教程P31表比較項目二、動物體細胞核移植技術和克隆動物1、定義：

動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中.使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體.3、分類：

胚胎核移植、體細胞核移植。胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易。動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難2、原理：

動物細胞核具有全能性二、動物體細胞核移植技術和克隆動物1、定義：動物核移植是將二、動物體細胞核移植技術和克隆動物1、定義：

動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中.使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體.3、分類：

胚胎核移植、體細胞核移植。胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易。動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難2、原理：

動物細胞核具有全能性二、動物體細胞核移植技術和克隆動物1、定義：動物核移植是將4、體細胞核移植過程---示動物克隆---無性繁殖1.）克隆羊多利培育過程：黑面綿羊去核卵母細胞白面綿羊乳腺細胞核細胞核移植重組細胞電脈沖刺激早期重組胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利◆特別注意：克隆動物性狀與供體動物完全一樣嗎？不可能！因為：一、供體動物只提供細胞核，而細胞質中的遺傳物質（如線粒體DNA）來自于受體卵母細胞.二、生物的性狀不僅與遺傳物質有關，還受環(huán)境的影響。供體受體代孕受體4、體細胞核移植過程---示動物克隆---無性繁殖1.）克隆黑面綿羊去核卵母細胞白面綿羊乳腺細胞核a重組細胞電脈沖刺激早期重組胚胎b另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利1、寫出AB所代表細胞工程名稱：a表示：

b表示:

2、實施細胞工程時，所需受體細胞大多采用卵母細胞的原因：體積大，易操作。含有促使細胞核表達全能性的物質和營養(yǎng)條件。3、多利面部毛色是：

根據(jù)遺傳學原理說明判斷依據(jù)。4、若黑面綿羊的基因型為AA,白面綿羊的基因型為aa，則克隆羊的基因型為

核移植胚胎移植白色多利全部的核基因都來自白面綿羊aa黑面綿羊去核卵母細胞白面綿羊乳腺細胞核a重組細胞電脈沖刺激早

◆取供體細胞傳代培養(yǎng)10代以內的細胞.為什么？◆用的是去核的減數(shù)第二次分裂中期細胞（MⅡ中期）為什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：電刺激◆胚胎移植至代孕受體內

妊娠、分娩2.）核移植流程供體：優(yōu)質高產(chǎn)奶牛受體：普通奶牛（卵母細胞的采集與培養(yǎng)）

1.體積大，易操作。2.含有促使細胞核表達全能性的物質和營養(yǎng)條件。有人說它三個母親，對嗎？◆取供體細胞傳代培養(yǎng)10代以內的細胞取供體細胞取卵母細胞

供體細胞培養(yǎng)培養(yǎng)到MⅡ中期

卵母細胞去核

供體細胞注入去核的卵母細胞

供體核進入受體卵母細胞

重組胚胎

代孕母牛

生出與供體遺傳物質基本相同的個體2.過程：取供體細胞取卵母細胞供體細胞培養(yǎng)培養(yǎng)到MⅡ中期卵母細胞4.體細胞核移植技術的應用前景●畜牧生產(chǎn)方面：培育良種動物。保護瀕危物種●醫(yī)藥衛(wèi)生方面：生產(chǎn)醫(yī)用蛋白、器官和組織移植4.體細胞核移植技術的應用前景●畜牧生產(chǎn)方面：5.體細胞核移植技術存在的問題（1）胚胎成活率低（2）動物健康問題（3）克隆動物安全性5.體細胞核移植技術存在的問題（1）胚胎成活率低專題2.2動物細胞工程2.2.1動物細胞融合與單克隆抗體專題2.2動物細胞工程2.2.1動物細胞融合與單克隆抗體1、定義：指用自然或人工方法使兩個或多個不同的細胞融合成一個細胞的過程。一、動物細胞融合◆細胞雜交：不同基因型的細胞之間的融合就是細胞雜交?！綦s交細胞：融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞成為雜交細胞。1、定義：指用自然或人工方法使兩個或多個不同的細胞融合成一個

細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合

受精作用細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合受精作用2、誘導融合的因素生物法：滅活的病毒誘導融合.(動物細胞融合所特有的。這是由于病毒的磷脂外衣與動物細胞的膜十分相似的緣故。病毒外殼上的某些糖蛋白可能還有促進細胞融合的功能。喪失感染性,保留融合活性)

化學法：聚乙二醇PEG誘導融合.物理法：電激融合病毒顆粒黏附細胞表面細胞膜連接細胞膜被病毒顆粒穿通細胞融合、形成雜種細胞2、誘導融合的因素病毒顆粒黏附細胞表面細胞膜連接細胞膜被

二.動物細胞融合二.動物細胞融合思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？

因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎3、動物細胞融合技術的應用意義：細胞融合技術突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。應用：利用雜交瘤技術，制備單克隆抗體。3、動物細胞融合技術的應用意義：細胞融合技術突破了有性雜交的主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質體融合細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目植物、動物細胞融合的比較主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學方法（同左）人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?將抗原注入動物體,然后從動物血清中提取抗體這種方法的缺點是什么?效率低，產(chǎn)量有限，純度低，動物抗體注入人體可能產(chǎn)生嚴重的過敏反應。運用已學知識，設想怎樣獲得單一類型的抗體？能否用單個B淋巴細胞通過克隆形成的細胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體呢？B淋巴細胞在體外不能無限增殖。二：動物細胞融合的成功應用

——單克隆抗體的制備思考人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?二：動物細胞融合的成功應用單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案將能夠產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞和具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞融合在一起，形成雜交瘤細胞。雜交瘤細胞既能在體外快速生長，又能持續(xù)分泌成分單一的特異性抗體。這種單一類型的只針對某一特定抗原決定簇的抗體分子，就是單克隆抗體。米爾斯坦(阿根廷)和科勒(德國)因此在1984年獲諾貝爾獎。單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案雜交細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體雜交細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小動物特異性免疫分離B淋巴細胞（B）；找到骨髓瘤細胞（G）。注意B淋巴細胞是一個系列。（B1,B2,B3,---Bn）細胞融合——三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)”上培養(yǎng)篩選雜交瘤細胞（只有BG雜交瘤細胞存活。但BG雜交瘤細胞也是一個系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培養(yǎng)基上不能存活。）第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細胞系列

，每孔只放一個雜交瘤細胞。“克隆化培養(yǎng)”每個雜交瘤細胞，并進行“單一抗體檢測”，“檢測陽性”的孔內即是所需要的雜交瘤細胞。選擇所需要的雜交瘤克隆細胞群，體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內增殖。提取單克隆抗體。1、單抗的制備過程要點：動物特異性免疫1、單抗的制備過程要點：3）為何要進行兩次篩選？4）、如何進行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個雜交瘤細胞。第1次篩選得到雜交瘤細胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞群。問題強化：1）、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2）、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體3）為何要進行兩次篩選？4）、如何進行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內腫瘤的定位等,與常規(guī)抗體相比,具有準確、高效、簡易、快速特點.2、用于治療疾病和運載藥物：主要用于癌癥治療。生物導彈：抗癌細胞的單克隆抗體+放射性同位素+化學藥物或細胞毒素。（單克隆抗體：導向。準確找到癌細胞位置，原位殺死癌細胞。）2、單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，可大量制備。3、單克隆抗體的應用1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內腫瘤的定B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌單克隆抗體的實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體B細胞抗體細胞融合滅活病毒雙親細胞分泌抗體無限增殖原代傳代50例3：B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到AC例題1：1975年，英國劍橋大學分子生物學實驗室的科勒和米爾斯坦，把小鼠的淋巴細胞（脾細胞）和小鼠的骨髓瘤細胞融合起來，成為雜交瘤細胞，實現(xiàn)在體外大量生產(chǎn)抗體的目的。實驗過程如圖所示。(1)淋巴細胞能與骨髓瘤細胞融合成一個細胞，兩種細胞膜也能“融合”在一起，說明細胞膜

。(2)單克隆抗體的準確定義應為()A．一類特殊抗體B．無性繁殖系

C．單一抗體細胞的無性繁殖系產(chǎn)生的抗體

D．單一抗體細胞的有性繁殖系產(chǎn)生的抗體(3)雜交瘤細胞繁殖進行的是_______分裂，其遺傳性狀__________。(4)單克隆抗體注入體內后可以自動追蹤抗原(病原體或癌變細胞等)并與之結合，而絕不攻擊任何正常細胞，故稱為“生物導彈”這是利用了

_____________

。具有一定的流動性C有絲不變抗體能與抗原發(fā)生特異性結合的特點例題1：(1)淋巴細胞能與骨髓瘤細胞融合成一個細胞，兩種細胞1.動物細胞工程技術的基礎是：（）

A．動物細胞融合

B．胚胎移植

C．動物細胞培養(yǎng)

D．核移植Ｃ課堂練習;1.動物細胞工程技術的基礎是：（）Ｃ課堂練習;２．在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結果是相同的

B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同Ｂ２．在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞C1、科學家用小鼠骨髓細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細胞A鞏固練習1、科學家用小鼠骨髓細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)2..動物細胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服遠緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細胞3.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）誘導融合的方法完全相同B.所用的技術手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細胞BD2..動物細胞融合的目的中最重要的是------------4.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成D4.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（

[例題2]（1）在用動物細胞融合技術制備單克隆抗體時，將抗原注射到小鼠體內，可獲得(多選)

（）

A．T淋巴細胞B．效應B淋巴細胞

C．抗體D．記憶細胞（2）下列關于單克隆抗體的制備和應用的敘述中，正確的是(多選)（）

A．B淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合，一般需要滅活的仙臺病毒或聚乙二醇誘導

B．融合后形成的雜交瘤細胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生單克隆抗體

C．體外培養(yǎng)時，一個B淋巴細胞可以產(chǎn)生一種抗體，但不能無限增殖

D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性明顯

BCD

ACD[例題2]BCDACD再見再見動物細胞工程hao課件

1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是--------------------（）

A．細胞系B．細胞株

C．原代細胞D．傳代細胞2、動物細胞工程技術的基礎是------（）

A.動物細胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動物細胞培養(yǎng)

AD1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是---3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異

B．具有更強的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強D3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡

4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）

A.培養(yǎng)基不同；

B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；

C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能；

D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株。A4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于-----體驗高考(2008·寧夏理綜)(1)在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面

時，細胞會停止分裂增增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的

。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是

。要使貼壁細胞從瓶壁上分離下來，需要使用的酶是

。相互接觸接觸抑制單層胰蛋白酶體驗高考(2008·寧夏理綜)(1)在動物細胞培養(yǎng)過程中，體驗高考(2008·寧夏理綜)(2)隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)可以連續(xù)增殖，其中有些會因遺傳物質發(fā)生改變面變成

細胞，該種細胞的黏著性

，細胞膜表面蛋白質（糖蛋白）的量

。衰老甚至死亡不死性降低減少體驗高考(2008·寧夏理綜)衰老甚至死亡不死性降低減1.下列哪—項屬于克?。ǎ〢．將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲的細胞內C．將鼠骨髓瘤細胞與經(jīng)過免疫的脾細胞融合成雜交瘤細胞D．將某腫瘤細胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個細胞系D2.（多選）美國杜克大學醫(yī)療中心的一個研究小組利用成年豬的動脈血管細胞和模擬胚胎環(huán)境的新型生物反應器,成功地在實驗室里培育出新的動脈血管，這種血管的外形和功能都與真的血管一樣,這一研究成果是生物組織培養(yǎng)領域的重大進展。下列關于以上技術的敘述中，正確的是（）A．屬于“克隆”B．可能要利用去核卵細胞C．關鍵是激發(fā)血管細胞的全能性D．關鍵是激發(fā)血管細胞發(fā)育成血管的潛能ABD1.下列哪—項屬于克?。ǎ〥2.（多選）美國杜克大學3.從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細胞中，融合后的細胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內，出生小羊的大多數(shù)性狀 （）A、難以預測B、像甲C、像乙D、像丙4.生物技術的發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復生”將不再是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功“復生”野驢的方法是（）A．將野驢的體細胞取出，利用組織培養(yǎng)技術，經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個體B．將野驢的體細胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個體C．取出野驢的體細胞核移植到母家驢的去核卵細胞中，經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個體D．將野驢的基因導入家驢的受精卵中，培育成新個體B

C

3.從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙去掉BC5.下圖所示為用兩棲動物卵所做的實驗圖解，據(jù)圖回答下列問題：⑴蝌蚪腸上皮細胞核中含有青蛙發(fā)育所需的_________，重新組合的細胞相當于蛙的______

細胞，經(jīng)過____________和________________形成組織和器官。全部基因

受精卵

細胞分裂細胞分化⑵本實驗結果說明_____________________具有全能性，圖中A過程采用的技術手段稱做_______________。

動物體細胞核核移植技術5.下圖所示為用兩棲動物卵所做的實驗圖解，據(jù)圖回答⑴蝌蚪腸上1、基因型為Aa與基因型為Bb的動物體細胞混合，用滅活的仙臺病毒處理后，不可能獲得下列哪種基因型的細胞A．AAaaB．AaBbC．AabbD．BBbb2、動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是①誘導融合的方法完全相同②所用的技術手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成雜種細胞A.①② B.①③C.②④ D.③④3、動物細胞融合和植物原生質體融合比較，在動物細胞融合中有特殊性的是A、融合的原理 B、融合的優(yōu)點C、融合的誘導手段 D、融合的過程C

C

C

1、基因型為Aa與基因型為Bb的動物體細胞混合，用滅活CC4.科學工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標記人和鼠的細胞膜上的蛋白質。當兩個標記細胞融合成一個細胞后，起初一半膜發(fā)出綠色熒光，另一半膜發(fā)出紅色熒光，一段時間后，兩種顏色的熒光點均勻分布，如圖所示。請分析回答：⑴該實驗結果說明了細胞膜

，這是因為⑵若在兩個細胞融合成一個細胞后，將融合細胞置于0℃條件下再保持40min，則融合細胞仍然是一半膜發(fā)綠色熒光，另一半膜發(fā)紅色熒光，這說明具有一定的流動性

構成細胞膜的磷脂分子和蛋白質大都是可以運動的膜的流動性受溫度影響，在低溫下分子的運動受抑制4.科學工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標記人和鼠的⑴該實驗1、下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質和A細胞的名稱為 ()A、抗體、T淋巴細胞 B、抗原、T淋巴細胞C、抗體、B淋巴細胞 D、抗原、漿細胞D1、下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質和A2、關于單克隆抗體，下列敘述不正確的是A、可以制成診斷盒．用于疾病的珍斷B、可以與藥物結合，用于病變細胞的定向治療C、可以利用基因工程技術生產(chǎn)D、可以在生物體內生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)3、“生物導彈”是指A、單克隆抗體B、帶有特定藥物的單克隆抗體C、雜交細胞D、B淋巴細胞D

B

4.單克隆抗體技術在疾病診斷和治療以及生命科學研究中具有廣泛的應用。下列關于單克隆抗體的敘述，錯誤的是 A．特異性強、靈敏度高B．與抗癌藥物結合可制成“生物導彈”C．體外培養(yǎng)B淋巴細胞可大量分泌單克隆抗體D．由效應B細胞與骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞分泌C

2、關于單克隆抗體，下列敘述不正確的是DB4.單克隆抗體5.下圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合）請據(jù)圖回答：

I．若A、B是基因型分別為rrHH、RRhh兩個煙草品種細胞的花粉，且這兩對基因位于非同源染色體上，由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強度大于800勒克斯時，都不能生長。⑴實驗開始時必須用

除去不利于原生質體融合的物質。⑵實驗中除獲得雜種細胞外，還有基因型為

的融合細胞。纖維素酶和果膠酶rrHH、RRhh

5.下圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合）I．若A⑶設計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，方法：

⑷將雜種細胞培養(yǎng)成雜種植株依據(jù)的理論基礎是

。II．若該過程是制備治療“SARS”病毒的單克隆抗體，A為人B淋巴細胞（染色體組成為2A＋XX=46），B為鼠骨髓瘤細胞（染色體組成為2A＋XX=40）⑸用單克隆抗體制成“生物導彈”主要利用了抗體的

特性。⑹A細胞來自于

，雜種細胞C共有

個染色體組。⑺雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)時與植物組織培養(yǎng)的主要區(qū)別是培養(yǎng)基要用

培養(yǎng)基。（物理狀態(tài)），培養(yǎng)基中除了添加必要的營養(yǎng)物質為還需加入

。置大于800勒克斯光照下培養(yǎng)，收集分化的細胞團細胞的全能性

抗體與抗原結合，發(fā)揮特異性免疫效應

非典患者

4

液體動物血清

⑶設計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜置大于806.右圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題：6.右圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題：⑴給小鼠注射抗原的目的是__________________。⑵在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具有________

的特性。⑶由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了________和______________的動物細胞工程技術手段，前者常用的誘導劑與植物原生質體融合不同的是可用_____________。⑷動物細胞培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，與植物細胞培養(yǎng)基有所不同的是，還含有_________________。獲得能產(chǎn)生相應抗體的B細胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體

動物細胞融合

動物細胞培養(yǎng)

滅活的病毒

動物血清

⑴給小鼠注射抗原的目的是__________________⑸在動物細胞融合過程中，需要將所選取的組織細胞離散開，以利于細胞融合，可用________________