1.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)

1.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)1.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)1.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)V:1.0精細(xì)整理，僅供參考1.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)日期：20xx年X月生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用技術(shù)一、分子方面1、基因工程1）PCR（PolymeraseChainReaction）(二樓PCR儀器全部會(huì)用)2）RT-PCR；Q-PCR3）瓊脂糖凝膠電泳；膠回收4）酶切/鏈接5）轉(zhuǎn)化6）固體/液體LB培養(yǎng)基配制（高壓蒸汽滅菌鍋使用方法）7）質(zhì)粒大/小抽原理及步驟（手提、溶液I、II、III作用）8）基因組DNA抽提9）RNA提取；2、蛋白質(zhì)工程1）蛋白收集（蛋白裂解液+PMSF；1×Loading裂解（推薦））2）SDS（電泳膠的配制）2）考馬斯亮藍(lán)染色，銀染3）Westernblot4）蛋白定量常用的方法及原理，以及熟練操作Bradford法蛋白定量（TRIZOL法原理、注意事項(xiàng)及步驟）二、細(xì)胞方面1）細(xì)胞培養(yǎng)、傳代2）細(xì)胞凍存與復(fù)蘇凍存液配制：（1）DMSO:血清=1:9（推薦）（2）DMSO：培養(yǎng)基：血清=1:3:6均可DMSO為細(xì)胞專用型；現(xiàn)用現(xiàn)配，效果最好；凍存時(shí)細(xì)胞在-80℃中不要超過一周，最好在24-48h內(nèi)放入液氮罐中保存。3）細(xì)胞培養(yǎng)基配制（過濾除菌）、胰酶配制（過濾除菌），PBS配制（滅菌）；（不同培養(yǎng)基的區(qū)別；谷氨酰胺（提供氮源），2周補(bǔ)充一次）4）轉(zhuǎn)染5）MTT原理及操作（檢測細(xì)胞存活率或死亡率）6）堿性磷酸酶實(shí)驗(yàn)（ALP，檢測細(xì)胞分化）（5、6需學(xué)會(huì)SPSS軟件及graphpadprism5軟件使用）7）Hoechst染色8）結(jié)晶紫染色（不推薦）9）蘇木精/伊紅染色（9可以替代8，以后實(shí)驗(yàn)推薦使用9，圖片漂亮）10）熒光顯微鏡的使用11）激光共聚焦顯微鏡樣品制備（細(xì)胞固定，染色，洗脫）（7、8、9、10、11需學(xué)會(huì)Photoshop常用工具處理數(shù)據(jù)）12）流式細(xì)胞儀樣品制備（包括：轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞凋亡染色標(biāo)記）以及儀器操作（需學(xué)會(huì)FlowJo軟件分析流式結(jié)果）三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1）小鼠的定制：常見的小鼠：ICR小鼠（正常），9元/只BalB/C小鼠（正常），30元/只SD大鼠（正常），30元/只裸鼠（免疫缺陷小鼠），80元/只NODSCID小鼠（免疫三缺陷），250元/只其中前四種是常用的，最后一種以后可能會(huì)用到。浙江中醫(yī)藥大學(xué)：小鼠品系齊全，可提供以上小鼠靜脈注射，提供體內(nèi)原位成瘤手術(shù)；杭州師范大學(xué)：NODSCID品系小鼠沒有，不提供裸鼠靜脈注射，不提供體內(nèi)原位成瘤手術(shù)。2）小鼠成瘤（熟練皮下成瘤操作）；3）腫瘤測量（游標(biāo)卡尺測量；IVIS測量（推薦，前體要構(gòu)建Luc細(xì)胞系））4）慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)Luc癌細(xì)胞系5）小鼠的腹腔注射、瘤內(nèi)注射以及ICR小鼠的尾靜脈注射6）小鼠尾部和眼球取血7）小動(dòng)物活體成像儀的原理及使用方法8）小鼠解剖及組織固定電鏡樣品：2.5%戊二醛固定；免疫組化：10%的福爾馬林或4%的多聚甲醛固定9）組織電鏡樣品的制備及TEM的使用（每個(gè)樣品400，額外每張TEM照片5元）10）免疫組織切片樣品的制備（蠟塊制備25元；HE