瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件

瘋牛病及其檢測規(guī)范劉雨田國家牛海綿狀腦病參考實驗室中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心2008年5月瘋牛病及其檢測規(guī)范兩個參考實驗室：國家新城疫參考實驗室國家瘋牛病參考實驗室外來?。盒》雌c獸疫、尼帕病、西尼羅河熱、裂谷熱、水泡性口炎、羊癢病、瘋牛病、結(jié)節(jié)性皮膚病、C型口蹄疫等國家外來動物疫病診斷中心兩個參考實驗室：國家新城疫參考實驗室國家外來動物疫病診斷中心一、瘋牛病的歷史1986年首次在英國確診1988年基本摸清瘋牛病的發(fā)病原因和流行情況1990年我國農(nóng)業(yè)部發(fā)出嚴(yán)防瘋牛病傳入我國的通知1992年和1993年瘋牛病發(fā)病率達(dá)到高峰1996年確診第一例人瘋牛?。╪vCJD）2001年瘋牛病首次在亞洲的日本發(fā)生2003年瘋牛病首次在北美的加拿大發(fā)生2005年瘋牛病首次在北美的美國發(fā)生2008年，瘋牛病還在發(fā)生，只是數(shù)量不多一、瘋牛病的歷史1986年首次在英國確診

二、定義瘋牛?。˙SE），學(xué)名為牛海綿狀腦病，是成年牛的一種致死性漸進(jìn)性神經(jīng)性疾病。它是一個新病，也是第一個人造動物病。它與人的克雅氏?。–JD）、庫魯?。↘uru）以及綿羊癢病（Scrapie）等統(tǒng)稱為傳染性海綿狀腦?。═SE）。

三、BSE病原—朊毒體

（PrPSc）源于肉骨粉中的癢病因子一種奇特的蛋白質(zhì)——Prion，宿主神經(jīng)元表面正常朊蛋白的異構(gòu)體感染動物不會產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)能抵抗PK酶的消化很難滅活無株系差異（？）正常異常三、BSE病原—朊毒體

（PrPSPK消化溶于DDα螺旋β折疊

PrPC是是40%約3%

PrPSc否否

30%45%

PrPSc對一般的物理化學(xué)消毒方法具有極強(qiáng)的抵抗力

最有效的殺滅方法是焚燒；134-138℃蒸汽高壓消毒，18分鐘；此外，含２％有效氯的次氯酸鈉及２Ｎ的氫氧化鈉，20oC、1小時以上用于表面消毒免疫學(xué)檢測的基礎(chǔ)PK消化溶于DDα螺旋β折疊瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件

１、潛伏期

2－８年或更長，平均為3－５年２、發(fā)病率

感染牛群的發(fā)病率在3%以下３、感染來源

癢病病羊或BSE病牛，制成的肉骨粉(MBM)４、傳播途徑

主要通過飼料傳播，無水平傳播和垂直傳播的證據(jù)，但在疫病防控中要考慮四、流行病學(xué)四、流行病學(xué)PrPScPrPScPrPScPrPScnvCJD有機(jī)溶劑&>134℃×少量PrPScPrPScPrPScPrPScPrPScnvCJD有機(jī)溶劑&５、易感動物

１）?？苿游铩遗?、野牛等—與癢病不同，無遺傳易感性的差異—奶牛多發(fā)，因奶牛存養(yǎng)時間比肉牛長

２）貓科—家貓、虎、豹、獅等

３）實驗感染—牛、豬、綿羊、山羊、鼠、貂、猴

雞不發(fā)病５、易感動物６、BSE發(fā)生流行的三個要素

１）存在大量綿羊且有癢病流行或從癢病、BSE發(fā)病國進(jìn)口了污染朊毒體的動物組織或肉骨粉２）肉骨粉加工方法不能滅活朊毒體３）用這種肉骨粉喂牛６、BSE發(fā)生流行的三個要素國外某肉骨粉加工廠國外某肉骨粉加工廠我國某骨粉加工廠我國某骨粉加工廠7、病例分布英國（97%）歐洲其他大部分國家亞洲—日本、以色利北美洲——加拿大、美國中國？7、病例分布英國（97%）我國從BSE發(fā)病國進(jìn)口肉骨粉的情況(噸)荷蘭英國日本1996年至2001年去向不明我國從BSE發(fā)病國進(jìn)口肉骨粉的情況(噸)荷蘭英97%97%BSE25國BSE25國五、發(fā)病機(jī)理回腸陪氏淋巴結(jié)口服DC中復(fù)制（1）脾DC中復(fù)制（2）腸神經(jīng)叢腹腔注射中樞神經(jīng)迷走神經(jīng)

?SOD活性下降抗氧化功能降低海綿狀腦部病變神經(jīng)癥狀ＡＢ五、發(fā)病機(jī)理回腸陪氏淋巴結(jié)口服DC中復(fù)制脾DC中復(fù)制腸神經(jīng)叢六、病原在機(jī)體內(nèi)的分布(SRM)外周神經(jīng)？？六、病原在機(jī)體內(nèi)的分布(SRM)外周神經(jīng)？？瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件七、公共衛(wèi)生1、食物：污染BSE病原的食品；2、醫(yī)源性：手術(shù)、牛源性醫(yī)療器械、藥品；3、化妝品：口紅（污染BSE）；七、公共衛(wèi)生1、食物：八、其他影響經(jīng)濟(jì)方面

英國：超過百億英鎊；美國：60億美元；加拿大：40億美元。。。。社會方面

恐慌，不肯吃肉牛等政治方面

英國農(nóng)業(yè)部部長下臺、德國農(nóng)業(yè)部和衛(wèi)生部部長下臺、日本農(nóng)水省官員受處分。。。。。BSE成為政治問題——貿(mào)易談判八、其他影響經(jīng)濟(jì)方面九、國際BSE有關(guān)情況介紹發(fā)達(dá)國家的BSE檢測數(shù)量驚人OIE正在推進(jìn)BSE風(fēng)險等級認(rèn)證：檢測數(shù)量要換算成監(jiān)測分?jǐn)?shù)值九、國際BSE有關(guān)情況介紹發(fā)達(dá)國家的BSE檢測數(shù)量驚人Table1.Pointstargetsfordifferentadultcattlepopulationsizes

inacountry,zoneorcompartment

Pointstargetsforcountry,zoneorcompartmentAdultcattlepopulationsize

(24monthsandolder)（頭）Type

A

surveillanceType

B

surveillance>1,000,000300,000150,000800,000-1,000,000240,000120,000600,000-800,000180,00090,000400,000-600,000120,00060,000200,000-400,00060,00030,000100,000-200,00030,00015,00050,000-100,00015,0007,500（分?jǐn)?shù)值）（分?jǐn)?shù)值）Table1.PointstargetsfordiTable2.Surveillancepointvaluesforsamplescollected

fromanimalsinthegivensubpopulationandagecategorySurveillancesubpopulationRoutine

slaughter2.Fallen

stock3.Casualty

slaughter4.Clinical

suspect5.Age>1yearand<2years0.010.20.4N/AAge>2yearsand<4years(youngadult)0.10.20.4260Age>4yearsand<7years(middleadult)0.20.91.6750Age>7yearsand<9years(olderadult)0.10.40.7220Age>9years(aged)0.00.10.245（不同亞群與年齡段的分?jǐn)?shù)值）Table2.Surveillancepointva十、我國BSE檢測規(guī)范

１、臨床診斷２、鑒別診斷３、實驗室診斷

十、我國BSE檢測規(guī)范

1、臨床診斷發(fā)病初期——非常隱蔽，不易察覺?！饕憩F(xiàn)為走路落伍、不愿過水泥地和門檻、擠奶時踢腿、反芻減少、走路時高抬后腿、逐漸消瘦。1、臨床診斷發(fā)病初期發(fā)病后期

食欲不振、明顯消瘦、行走時左右搖擺、易倒地并且起來困難、怕光、怕觸摸、怕刺耳的聲音、經(jīng)常甩頭、具有明顯的攻擊性、時有瘙癢、顫抖、踢腿明顯、神經(jīng)癥狀明顯、不愿過障礙物發(fā)病后期瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件2、鑒別診斷

１）有機(jī)磷農(nóng)藥中毒２）低鎂血癥３）神經(jīng)性酮?。矗├钍蠗U菌?。担┠X灰質(zhì)軟化或腦皮質(zhì)壞死６）腦內(nèi)腫瘤７）腦內(nèi)寄生蟲?。福┛袢?/p>

9）其他腦病2、鑒別診斷3、實驗室診斷

1）組織病理染色法（HE染色）方法確實，80-90%，經(jīng)驗

2）免疫組化檢查PrPSc，確診，OIE規(guī)定的“金標(biāo)準(zhǔn)”

3）Western-blotting檢查PrPSc，輔助確診，昂貴

4）ELISA篩檢方法，簡便快速、價格昂貴

5）動物接種實驗?zāi)X內(nèi)接種轉(zhuǎn)基因鼠，70天左右潛伏期3、實驗室診斷臨床表現(xiàn)——臨床可疑、緊急屠宰、病死牛年齡——4-7歲為主品種——奶牛為主，肉牛為輔盡量在奶牛場采樣樣品要求臨床表現(xiàn)——臨床可疑、緊急屠宰、樣品要求臨床可疑牛：1．一般可疑：行為改變，如落伍□像拉馬車樣低頭站立□過度舔舌□經(jīng)常伸展脖子□耳朵豎立□失明□磨牙□2．中度可疑：沒有外傷或感染而瀕臨死亡□斜靠著物體才能站立□癱瘓/局部麻痹□顫抖□走路時后肢過度搖擺□意識異?！蹀D(zhuǎn)圈運動□倒地□踢腿□興奮□狂怒□膽怯□恐懼□共濟(jì)失調(diào)□3．高度可疑：感覺過敏如聽覺、觸覺、視覺□面對舍門或障礙物猶豫不前□不愿進(jìn)擠奶室□擠奶時持續(xù)踢踏□走路時后肢過度伸展□緊急屠宰牛：倒地不起

□不愿行動□嚴(yán)重傷病□宰前檢驗認(rèn)為要銷毀的?！跗渌?/p>

死畜：在農(nóng)場病死的□在運輸過程中病死的□在其他地方病死的□臨床可疑牛：第一對恒齒長齊—24月齡與30月齡之間乳齒-小于24月齡三顆恒齒-30月齡兩對恒齒-大于30月齡第一對恒齒長齊—24月齡與30月齡之間乳齒-小于24月齡三顆瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件永久門齒生長情況對應(yīng)年齡第一對永久門齒長出2歲第二對永久門齒長出3歲第三對永久門齒長出4歲第四對永久門齒長出(齊口)5歲前三對永久門齒齒面重磨，第四對永久齒也出現(xiàn)磨損6歲第一對永久門齒齒面呈方形7-8歲第二對永久門齒齒面呈方形8-9歲第一對永久門齒齒面呈圓形，第三對永久門齒齒面呈方形9-10歲第一對永久門齒齒面呈三角形，第四對永久門齒齒面呈方形11歲第二、三、四對永久門齒齒面呈三角形12歲以上的老牛永久門齒生長情況對應(yīng)年齡第一對永久門齒長出2歲第二對永久門齒采集牛腦－－采樣勺法

物品準(zhǔn)備：

采樣單、手套、剪刀、口罩、工作服、樣品杯、記號筆或鉛筆、冰袋、大號透明膠帶、帶蓋泡沫箱、簽字筆或圓珠筆、吸水紙

采集牛腦－－采樣勺法

物品準(zhǔn)備：瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件腦硬膜延腦腦硬膜延腦瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件冷凍樣品先以ELISA方法篩檢，然后確診用IHC方法冷凍樣品先以ELISA方法篩檢，然后確診用IHC方法采集牛腦－－電鋸法采集牛腦－－電鋸法瘋牛病檢測規(guī)范與防控課件甲醛固定的全腦－－只能以IHC方法和HE染色檢測甲醛固定的全腦－－只能以IHC方法和HE染色檢測ObexObex采樣存在的問題健康牛的比例太大采集部位不對采樣單填寫不詳細(xì)樣品冷凍程度不夠采樣存在的問題健康牛的比例太大實驗室檢測實驗室檢測組織病理學(xué)方法(HE)常規(guī)的HE染色

耗時較長，從組織固定到觀察結(jié)果至少10天結(jié)果判斷較難，要豐富的經(jīng)驗

確診率不高，需要結(jié)合其他免疫學(xué)方法觀察空泡變化，有時沒有典型的空泡病變----神經(jīng)元和神經(jīng)纖維網(wǎng)漿常用的儀器設(shè)備

簡單但耗時，價格低廉組織病理學(xué)方法(HE)常規(guī)的HE染色簡明步驟取材透明甲醛固定脫甲醛脫水浸蠟包埋切片烤片脫蠟蘇木精染色伊紅染色透明封片觀察結(jié)果簡明步驟取材透明甲醛固定脫甲醛脫水浸蠟包埋切片烤片脫蠟蘇木精免疫組織化學(xué)方法(IHC)核心技術(shù)：單抗OIE規(guī)定為“金標(biāo)準(zhǔn)”確診方法

從組織固定到結(jié)果判斷耗時至少10天參考實驗室必須熟練掌握的技術(shù)

常用的儀器設(shè)備工作量大

方法簡單但耗時，價格低廉，操作要仔細(xì)免疫組織化學(xué)方法(IHC)核心技術(shù)：單抗簡明步驟取材透明甲醛固定脫甲醛脫水浸蠟包埋切片烤片脫蠟PK酶消化封閉單抗孵育ABC試劑孵育觀察結(jié)果封片簡明步驟取材透明甲醛固定脫甲醛脫水浸蠟包埋切片烤片脫蠟PK酶（1為孤束核—瘋牛病，2為三叉神經(jīng)第五束核，3為迷走神經(jīng)背核—癢?。?/p>

（1為孤束核—瘋牛病，2為三叉神經(jīng)第五束核，3為迷走神經(jīng)背核HE染色HE染色I(xiàn)HC染色I(xiàn)HC染色空泡空泡紫紅色顆粒紫紅色顆粒HE染色H